心脑血管疾病患者载脂蛋白基因多态性与血脂、载脂蛋白水平的相关性研究*

孔倩倩，王 丽，余汉忠，蔡 迁

1.中国矿业大学，江苏 徐州 221000；2.徐州市第一人民医院检验科，江苏 徐州 221000；3.徐州市妇幼保健院，江苏 徐州 221000

心脑血管疾病（CVD）是心血管疾病和脑血管疾病的统称，具有发病率高、死亡率高、致残率高等特点［1-2］，严重威胁人类生命健康。CVD的致病因素非常多，近年来的研究表明遗传因素尤其是影响血脂代谢的基因［3］，与其发病密切相关。其中载脂蛋白E（ApoE） 基因可与脂质及其受体，低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）及LDL相关蛋白结合，作为配体参与受体介导的载脂蛋白清除过程，是目前发现对血脂水平影响较大的基因［4-5］。为进一步证实载脂蛋白E（ApoE）基因多态性和心脑血管疾病的关系，本研究收集样本医院就诊的CVD患者，检测其ApoE基因多态性、血脂水平，分析ApoE基因多态性在CVD发生发展中的作用，并分析其可能机制，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年9月—2019年8月徐州市第一人民医院就诊的500 例CVD 患者为实验组，男性270 例，女性230例，平均年龄67.77 岁，其中198 名患者诊断为冠心病，162名患者诊断为脑梗死，140例诊断为高血压病。所有患者均排除肿瘤、服用他汀类药物等影响因素。选取106例健康体检者为对照组，其中男性66 例，女性40 例， 平均年龄65.29 岁，两组受试者年龄和性别等一般资料具有可比性（P＞0.05）。

1.2 仪器与试剂

（1）试剂：血液基因组DNA 提取试剂盒（离心柱型），购自TIANGEN 北京生物科技有限公司；人类ApoE基因检测试剂盒购自武汉友芝友生物科技有限公司。（2）仪器：全自动荧光检测PCR扩增仪购自杭州博日科技有限公司、全自动生化分析仪（AU5821）购自德国贝克曼库尔特公司。

1.3 方法

（1）ApoE 基因多态性检测：采集全血1 mL 于依地酸钠钙（EDTA）抗凝管，按照DNA 提取试剂盒（DP318）说明书提取全血DNA，并以此为模板，采用PCR荧光探针法进行荧光定量PCR 扩增，按照说明书进行ApoE 基因型判读。并按照ApoE 基因型分为三组：E2 基因型组（E2/E2、E2/E3），E3基因型组（E2/E4、E3/E3），E4基因型组（E3/E4、E4/E4）。（2）血脂及载脂蛋白检测：所有患者在采集血样前3 d 禁食高脂肪食物，并至少空腹12 h 以上，采集晨起空腹血样4 mL 于促凝管，4 000 rpm/min 离心10 min 分离血清，血清甘油三酯（TG），血清总胆固醇（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、LDL、载脂蛋白A（APoA）、载脂蛋白B（APoB）、脱脂转化酶（Lpa）、ApoE等指标均采用全自动生化分析仪检测（贝克曼库尔特AU5821）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料用例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受试者ApoE等位基因频率分布情况

对CVD 患者和健康体检者采用荧光定量PCR 的方法进行ApoE 基因型检测，发现CVD 患者E3 基因型频率最高，占73.30%，与健康体检者相比，其E4 基因频率较高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组受试者ApoE等位基因频率分布情况 例（%）

2.2 不同ApoE等位基因之间血脂及载脂蛋白水平情况

将入组患者按照ApoE 基因型分为三组：E2 基因型组（E2/E2、E2/E3），E3基因型组（E2/E4、E3/E3），E4基因型组（E3/E4、E4/E4），比较各组血脂（血清TC、TG、HDL、LDL）以及载脂蛋白（APoA、APoB、Lpa、ApoE）水平，发现三组间TC、LDL、APoB、Lpa、ApoE水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。将各组进行两两比较，发现与E2组相比较，E3组E4组TC、LDL、APoB、Lpa水平明显升高，ApoE 水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），E3 组APoA 水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），E4组与E4组血清血脂及载脂蛋白，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 不同ApoE等位基因之间血脂及载脂蛋白水平情况（±s） 分

表2 不同ApoE等位基因之间血脂及载脂蛋白水平情况（±s） 分

a表示与E4组比较，P＜0.05，b表示与E3组比较，P＜0.05。

组别E2 E3 E4 t值P值TC 4.27±1.34ab 4.62±1.20 4.75±1.13 12.58＜0.05 TG 1.53±1.75 1.53±1.35 1.81±1.85 1.95 0.38 HDL 1.25±0.37 1.19±0.31 1.20±0.33 2.15 0.34 LDL 2.10±0.77ab 2.55±0.87 2.63±0.81 24.27＜0.05 APoA 1.14±0.34a 1.07±0.31 1.07±0.35 5.06 0.08 APoB 0.79±0.23ab 0.97±0.27 0.99±0.26 35.84＜0.05 Lpa 217.11±250.31ab 254.84±239.35 297.64±294.83 8.28 0.02 ApoE 44.15±10.22ab 34.28±10.89 33.58±12.14 57.12＜0.05

2.3 不同心脑血管疾病与ApoE基因频率及血脂水平情况

将入组患者按照疾病类型进行分组，对其ApoE 基因频率、血脂以及载脂蛋白水平进行比较，各组间ApoE 基因频率、血脂、载脂蛋白水平，差异无统计学意义（P＜0.05），见表3、表4。

表3 不同心脑血管疾病与ApoE基因频率

表4 不同病例组患者血脂水平

3 讨论

CVD是严重威胁当今人类生命健康的疾病之一，21世纪初期CVD 死亡数已占发达国家死亡总数的50%、发展中国家死亡总数的25%，成为世界大多数国家第一、二位死亡原因［6］。大量研究表明，血脂异常是CVD的重要致病因素之一，TC水平的升高、TG水平升高以及LDLc是CVD的重要危险因素［7］。ApoE 是影响血浆脂蛋白的主要成分，可与脂质及受体结合，作为配体参与受体介导的载脂蛋白清除过程，在血脂水平调节过程中发挥重要作用。

ApoE具有显著遗传多态性，根据第112和158位残基的不同，分为E2、E3、E4基因型，现普遍认为，ApoE基因多态性可影响脂质代谢，并最终导致心脑血管疾病CVD的发生，研究高血脂症患者ApoE 基因、表型频率，对于CVD 的预防具有重要的意义。本研究对500 例CVD 患者ApoE 基因型进行检测，ApoE E3/E3 基因型比率最高，高达50.80%，E3 基因型频率最高，占73.30%，这与之前的报道相一致［8］，此外与健康体检者相比，心脑血管疾病患者E4基因频率较高，表明E4基因可能对心脑血管疾病有促进作用。为进一步分析ApoE 基因型对CVD 患者血脂的影响，将患者按照ApoE 基因型分组，研究发现E2 组比较，E3组E4组TC、LDL水平明显升高，这可能与ApoE不同异构体与LDL 受体结合能力不同相关，由于E4 等位基因的存在能提高ApoE 与LDL 受体亲和力，从而调节血脂代谢，加速CM 和VLDL 的代谢，降低LDL-C 受体数量，减少体内LDL、LDL-C 分解代谢，从而导致E4 患者LDL水平升高，而TC基本取决于LDL-C水平，使得E4组患者表现为较高的LDL、TC 水平。所以血清ApoA 可以反映HDL 水平，与HDLC 水平呈明显正相关，而APoB 水平与LDL呈正相关，因此E4组患者还表现为ApoA、ApoB水平明显升高。此外，本次研究还发现，血清ApoE 水平表现为E2＞E3＞E4，具有一定的相关性，然而是否由于ApoE基因多态性导致血清ApoE 水平血清差异。目前，该方面研究较少，其机制还尚不清楚，有待进一步研究。为进一步研究ApoE 在不同心血管疾病中是否具有相同的作用，本研究将患者按照疾病类型进行分组比较血脂以及ApoE基因频率，发现均无明显差异，说明ApoE 在冠心病、脑梗、高血压等常见慢性心血管疾病中都具有促进疾病发生发展的作用。

综上所述，E4 基因可升高LDL、TC 水平，促进心脑血管疾病的发生发展，ApoE基因型与ApoE水平有一定相关性，但是由于本研究中样本数不够大，E2 组、E4 组样本较少，如果能增大样本数，采用大数据分析结果，将更能有效地分析ApoE 基因多态性在心脑血管疾病中发挥的作用，以及造成血清ApoE水平差异性的机制研究。