结核感染T 细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值

吴恩强，卓义理，邹赛英

福建医科大学附属闽东医院 （福建福安 355000）

结核病是一种由结核分歧杆菌感染引起的传染性疾病，可在所有年龄阶段发病，其中免疫力低下人群为易感人群，对公共卫生安全造成巨大威胁[1]。流行病学统计显示，我国结核病发病率较高，每年新增发病患者规模约为130 万，患者规模在全球位居第2 位[2]。目前，结核病尚无特效治疗药物，且治疗周期长，存在耐药性、不良反应多等局限性，导致治疗效果不理想[3]。因此，做好结核病的预防成为结核病防治工作的首要问题。而预防结核病的前提是快速确诊，阻断结核病在普通人群中广泛传播[4]。既往结核病检测手段，如萋-尼抗酸染色（acid-fast bacilli，AFB）、皮肤结核菌素试验（purified protein derivative，PPD），在肺结核或肺外结核诊断中的漏诊风险均较高，影响结核病预防工作的推进[5]。结核感染T 细胞斑点试验（tuberculosis infection T cell spot test，T-SPOT.TB）的原理是通过提取外周血单核细胞，经特异性高抗原的刺激，继而释放大量γ 干扰素，经酶联显色后，通过全自动计算分析仪对显色斑点计数，继而判定患者的结核分歧杆菌感染情况[6]。基于此，本研究选取2018 年1 月至2021 年10 月我院收治的105 例初诊疑似结核病患者，探讨T-SPOT.TB 在结核病诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年1 月至2021 年10 月于我院接受诊治的105 例初诊疑似结核病患者，其中男56 例，女49 例；年龄22～71 岁，平均（44.46±15.71）岁；复诊时均行T-SPOT.TB、AFB 及PPD 检测，并保持对患者的随访。本研究入组患者均签署知情同意书。

纳入标准：临床表现为咳嗽、咳血、咳痰、消瘦、乏力、低热等症状或体征；X 线检查显示存在肺部改变，抗炎治疗后效果不理想。排除标准：既往有结核病病史；免疫功能障碍、矽肺、肺部肿瘤等；人免疫缺陷病毒阳性抗体检出；治疗依从性不佳，不配合研究；不配合随访工作。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB 检测

采集患者的外周静脉血5 ml，以密度梯度离心法分离制备外周单个核细胞，用无血清培养液AIM-V 洗涤细胞，并减去内源性γ 干扰素；制备结核分歧杆菌检测的标注细胞稀释液（250 万细胞/ml），取出培养板，标记并加入AIM-V 无血清培养液50 μl、抗 原A 50 μl、抗 原B 50 μl、阳 性 对 照50 μl，每孔再加入100 μl 含外周血单个核细胞的细胞稀释液，完成后将培养板进行37℃温育（5%CO2条件下）16～20 h，再以磷酸盐缓冲液洗涤4 遍，每孔加入新配制的酶标抗体溶液50 μl，4℃培养1 h；然后以磷酸盐缓冲液洗涤1 遍，酶联显色，干燥培养板，之后使用试剂盒（oxford immunotec ltd，UK）进行酶联免疫点自动计数仪计数斑点。

结核病判定：当阴性对照孔斑点数0～5 时，阳性样本判定标准为（抗原A 或抗原B 斑点数）-（阳性对照孔斑点数）≥6；当阴性对照组孔斑点数≥6，阳性样本判定标准为（抗原A 或抗原B 斑点数）≥2×（阴性对照孔斑点数）。

1.2.2 AFB 检测

采集患者晨起深处痰液、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液等，制作标本后在载玻片上行抗酸杆菌染色，在显微镜下观察染色结果。

结核病判定：至少连续观察300 个不同视野，若发现1～8 条染色，则视为阳性；若连续观察300 个不同视野，未发现染色情况，则视为阴性。

1.2.3 PPD 检测

在患者前臂屈侧皮内注射0.1 ml 结核菌素纯蛋白衍生物稀释液51 U，注射后48～72 h 观察患者注射皮肤局部硬结出现情况。

结核病判定：硬结面积≥5 mm 为阳性，硬结面积＆lt;5 mm 为阴性。

1.3 观察指标

以患者穿刺活检诊断结果作为诊断金标准。依据金标准结果分别计算T-SPOT.TB、AFB 及PPD诊断结核病的灵敏度、特异度、准确度。

1.4 统计学处理

采用SPSS 24.0 统计软件处理数据，计数资料用率表示，采用χ2检验，P＆lt;0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 穿刺活检诊断结果

穿刺活检诊断结果显示，105 例患者中检出结核病患者82 例，非结核病患者23 例。其中，肺结核46 例，肺外结核36 例（淋巴结结核12 例，骨结核24 例）。

2.2 T-SPOT.TB、AFB 及PPD 的诊断价值

在结核病的诊断中，T-SPOT.TB 的灵敏度为91.46%（75/82），特异度为95.65%（22/23），准确度为92.38%（97/105）；AFB 的灵敏度为68.29%（56/82），特异度为65.22%（15/23），准确度为67.62%（71/105）；PPD 的 灵 敏 度 为75.61%（62/82），特异度为73.91%（17/23），准确度为75.24%（79/105），见表1～3。

表1 T-SPOT.TB 在结核病诊断中的价值（例）

表2 AFB 在结核病诊断中的价值（例）

表3 PPD 在结核病诊断中的价值（例）

2.3 T-SPOT.TB、AFB 及PPD 在肺结核诊断中的价值

在肺结核的诊断中，T-SPOT.TB 的灵敏度为91.30%（42/46），特异度为91.67%（33/36），准确度为91.46%（75/82）；AFB 的灵敏度为65.22%（30/46），特异度为75.00%（27/36），准确度为69.51%（57/82）；PPD 的灵敏度为73.91%（34/46），特异度为77.78%（28/36），准确度为75.61%（62/82），见表4～6。T-SPOT.TB 检测在肺结核检测中灵敏度、特异度、准确度均高于AFB 检测、PPD 检测。

表4 T-SPOT.TB 在肺结核诊断中的价值（例）

表5 AFB 在肺结核诊断中的价值（例）

表6 PPD 在肺结核诊断中的价值（例）

2.4 T-SPOT.TB、AFB 及PPD 在肺外结核诊断中的价值

在肺外结核的诊断中，T-SPOT.TB 的灵敏度为91.67%（33/36），特异度为91.30%（42/46），准确度为93.90%（77/82）；AFB 的灵敏度为77.78%（28/36），特异度为73.91%（34/46），准确度为75.61%（62/82）；PPD 的 灵 敏 度 为75.00%（27/36），特异度为65.22%（30/46），准确度为69.51%（57/82），见表7～9。T-SPOT.TB 检测在肺外结核检测中灵敏度、特异度、准确度均高于AFB 检测、PPD 检测。

表7 T-SPOT.TB 在肺外结核诊断中的价值（例）

表8 AFB 在肺外结核诊断中的价值（例）

表9 PPD 在肺外结核诊断中的价值（例）

3 讨论

结核病传染性较强，通常主要传染源是肺结核患者，严重威胁人类健康，其防治意义重大[7]。结核病的临床症状与许多呼吸系统疾病相似，影像学特点不典型，缺乏特异性[8]。目前，临床以AFB、PPD 检测等作为常规检查方法。但由于多种因素影响，导致结核病在检测中具有一定漏诊风险，延误患者的治疗，甚至进展为重症肺结核，增加不良结局的风险[8]。基于以上原因，临床迫切需要一种灵敏度、特异度高的诊断方式。

本研究结果显示，T-SPOT.TB 诊断结核病的灵敏度等指标均高于AFB、PPD，且T-SPOT.TB 的诊断灵敏度、特异度分别为91.46%、95.65%，均处于较为理想的水平，证明T-SPOT.TB 检测有更高的可靠性，能极大减少漏诊、误诊的发生；另外，T-SPOT.TB 检测技术的样本采集为外周血，采集简便，且可避免AFB 样本采集导致的特异度下降，在检测上效率更高，特异度更高[9]。宋瑞红等[10]研究显示，T-SPOT.TB 诊断结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别是90.55%、72.60%、85.19%、81.54%，其中灵敏度与本研究相当，但特异度低于本研究，其原因可能与本研究中本身假阴性患者例数较少有关。T-SPOT.TB 在结核病诊断中应用价值高，具有较高的可靠性，原因如下。（1）AFB 采集的样本包括痰液、支气管肺泡灌洗液、胸腔积液、腹腔积液等，受到个体差异及排菌时间不同的影响，部分时间段采集样本的结核分歧杆菌浓度偏低，检出率也相应降低，由此导致灵敏度不高[11]；同时，非结核分歧杆菌也可导致抗酸试验变色，这导致假阳性增多，特异度下降。（2）PPD 使用结核分歧杆菌纯蛋白衍生物抗原进行检测，将抗原注射到患者皮下，引发迟发性超敏反应形成的硬结判断有无结核分歧杆菌感染[12]，其检测结果受到人体免疫系统、是否接种过卡介苗、是否接触过结核分歧杆菌等多种因素的影响，造成假阴性、假阳性率均较高。（3）T-SPOT.TB基本不受个体差异影响，无论患者免疫系统状态、排菌量、是否接种过卡介苗等都不会导致假阴性或假阳性。

综上所述，T-SPOT.TB 检测在结核病诊断中具有较高的临床价值，能有效降低漏诊、误诊风险。