经肋间单孔胸腔镜肺叶切除术联合消癌平对非小细胞肺癌患者miR-210 和miR-101 表达的影响*

王维新，何国丽，张剑锋，付红艳，左晶晶，任宏玲

（1.河北省秦皇岛市第二医院，河北 秦皇岛 066600；2.河北省秦皇岛市第四医院，河北 秦皇岛 066600）

肺癌以非小细胞肺癌（NSCLC）最常见，占70%～80%［1］。NSCLC 的癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚，早期无明显症状，确诊时多处于早中期阶段，此时可通过手术切除治疗而抑制癌细胞的增殖、转移、扩散［2］。经肋间单孔胸腔镜（IUVATS）肺叶切除术创伤小、痛苦轻、恢复快、疗效确切、安全可靠，近年来广泛应用于治疗NSCLC［3］。为了提高手术治疗效果，临床推荐术后行辅助化疗。常规西药化疗对癌细胞有较好的抑制及杀灭作用，但存在细胞毒性大、患者免疫功能下降、耐药等问题［4］。中医认为，癌症是由癌毒积聚、正气不足、脾肾亏虚等导致［5］。消癌平具有清热解毒、化痰软坚、益气养阴功效，既往用于肝癌、肺癌、胃癌、食管癌等癌症的辅助化疗效果较好［6］。微小RNA210（miR-210）、微小RNA101（miR-101）在癌症肿瘤疾病中呈现异常表达，与NSCLC 病情进展有一定关联［7］，可作为NSCLC 诊断及疗效评估的标志物。本研究中探讨了IUVATS 肺叶切除术后给予消癌平注射液辅助治疗NSCLC 的疗效，以及对miR-210 和miR-101 表达水平的影响。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准：确诊NSCLC，符合《Ⅰ～ⅢB期非小细胞肺癌完全切除术后辅助诊疗指南（2021版）》中相关诊断标准［8］；IUVATS肺叶切除术治疗指征；对消癌平注射液等治疗药物无禁忌证。本研究方案经医院医学伦理委员会审查批准，患者签署知情同意书。

排除标准：预计生存周期不足3 个月；术后出现严重并发症转入重症监护室；入组前已接受其他治疗药物干预；未严格执行预定的化疗方案；治疗期间出现严重不良反应需停止治疗。

病例选择与分组：选取我院2020年4月至2021年4月收治的NSCLC 患者118例，按随机数字表法分为对照组和观察组，各59 例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。详见表1。

表1 两组患者一般资料比较（n=59）Tab.1 Comparison of the patients' general data between the two groups（n=59）

1.2 方法

对照组患者以IUVATS 肺叶切除术治疗，行双腔气管内插管静脉复合全身麻醉后，采用健侧侧卧位，用3 孔法行手术操作。选择腋中线与腋后线第7 或第8 肋间为观察孔，肩脚下角线第7 或第8 肋间取长约1.5 cm的切口为辅助操作孔，第4 或第5 肋间腋前线取长约3～4 cm 的切口为主操作孔。胸腔镜下探查胸腔，分离粘连，排除胸腔内转移情况。若术前病理诊断明确，则行肺叶切除及淋巴结清扫术；若术前病理诊断不明确，则术中行楔形切除，冰冻病理证实为肿瘤再行肺叶切除及淋巴结清扫，分别处理肺动脉、肺静脉及支气管。具体方案：一般先游离切断肺静脉，处理肺动脉和支气管，以直线切割缝合器进行切断，离断支气管前请麻醉师鼓肺，确认病变肺叶及余肺复张情况，用标本袋自主操作孔取出病变肺组织，常规清扫肺门和纵隔淋巴结，即对目标区域内的所有淋巴结及周围脂肪组织等进行整块切除。完成后胸腔内注入0.9%氯化钠注射液，麻醉师协助鼓肺检查有无支气管残端及其他部位漏气，分别放置上下胸腔闭式引流管，关闭切口。术后，辅以EP（顺铂+依托泊苷）化疗方案，给予注射用顺铂（山东罗欣药业集团股份有限公司，国药准字H20046375，规格为每支10 mg）50 mg/m2+500 mL 0.9%氯化钠注射液缓慢静脉滴注，第1天；依托泊苷注射液（华润双鹤药业股份有限公司，国药准字H11021801，规格为每支5 mL∶0.1 g）120 mg/ m2+500 mL 0.9%氯化钠注射液缓慢静脉滴注，第1 天至第3 天。以21 d 为1 个化疗周期，1 个化疗周期结束后休息7 d，观察组患者在对照组治疗基础上加用消癌平注射液（南京圣和药业有限公司，规格为每支20 mL，国药准字Z20025868）60 mL +250 mL 0.9%氯化钠注射液静脉滴注，滴注时间60～90 min。以21 d为1个化疗周期，在化疗周期的第1天至第14天每日给药1次。两组均连续治疗4个周期。

1.3 观察指标与疗效判定标准

肿瘤标志物水平：分别于治疗开始前、治疗结束后1 d 采集空腹静脉血各3 mL，采用TD-5M 型实验室高速离心机（山东博科医学仪器厂）离心（离心半径5 cm，转速5 000 r/min）15 min。采用酶联免疫吸附法检测肿瘤标志物水平，包括糖类抗原199（CA199）、糖类抗原153（CA153）、人细胞角蛋白21-1片段（CYFRA21-1）水平，检测仪器为HED-SY96S型多功能酶标仪（山东霍尔德科技公司），试剂盒由深圳芬德生物技术公司提供。

2）免疫功能指标：取血清上清液，采用FACS Canto10型荧光流式细胞仪（美国BD公司）检测患者的T淋巴细胞亚群CD3+，CD4+，CD8+水平，计算CD4+/CD8+，试剂盒由上海康朗生物技术公司提供，将10 μL CD3+，CD4+，CD8+试剂加入各指标检测管中，分别加入抗凝血酶100 μL，并设立同型对照管，振荡均匀，避光室温孵育20 min。加入2 mL 溶血素，振荡均匀，避光室温孵育5 min，离心（转速1 000 r/min）5 min，弃去上清液，加入2 mL 磷酸盐缓冲液，离心（转速1 000 r/min）5 min，弃去上清液，再加入300 μL 磷酸盐缓冲液，混匀，然后采用流式细胞仪检测。miR-210 和miR-101 水平：采用逆转录合酶链式反应（RT-PCR）法提取细胞总RNA，检测RNA 纯度、含量，逆转录处理后获得cDNA，采用Primer 5.0软件设计引物，采用2-ΔΔCt方法计算（内参U6），采用2-ΔΔCt法计算。

疗效判定［9］：完全缓解（CR），治疗4 个周期后，1 个月内CT 探查显示肿瘤病灶完全消退；部分缓解（PR），疗程结束后1 个月内，CT 探查肿瘤病灶减小超过50%；稳定（SD），疗程结束后1 个月内，患者影像学检查癌症病灶缩小不超过50%，增大不超过25%；进展（PD），疗程结束后1 个月内，CT 探查病灶无减小或有增大。客观缓解（ORR）=CR+PR；疾病控制（DCR）=CR+PR+SD。

安全性：统计并比较两组患者治疗期间恶心呕吐、腹泻、消化道出血、关节痛等不良反应发生情况。

1.4 统计学处理

采用SPSS 25.0 统计学软件分析。计量资料符合正态分布和方差齐性规律以表示，行t检验；计数资料以率（%）表示，行χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

结果见表2至表6。

表2 两组患者肿瘤标志物水平比较（，U/L，n=59）Tab.2 Comparison of tumor marker levels between the two groups（，U/L，n=59）

表2 两组患者肿瘤标志物水平比较（，U/L，n=59）Tab.2 Comparison of tumor marker levels between the two groups（，U/L，n=59）

注：与本组治疗前比较，*P ＜0.05。表3和表4同。Note：Compared with those before treatment，*P ＜ 0.05（for Tab.2-4）.

表3 两组患者miR-210和miR-101表达水平比较（，ng/L，n=59）Tab.3 Comparison of miR-210 and miR-101 expression levels between the two groups（，ng/L，n=59）

表3 两组患者miR-210和miR-101表达水平比较（，ng/L，n=59）Tab.3 Comparison of miR-210 and miR-101 expression levels between the two groups（，ng/L，n=59）

表4 两组患者免疫功能指标比较（，n=59）Tab.4 Comparison of immune function indexes between the two groups（，n=59）

表4 两组患者免疫功能指标比较（，n=59）Tab.4 Comparison of immune function indexes between the two groups（，n=59）

表5 两组患者临床疗效比较［例（%），n=59］Tab.5 Comparison of clinical efficacy between the two groups［case（%），n=59］

表6 两组患者不良反应发生情况比较［例（%），n=59］Tab.6 Comparison of the incidence of adverse reactions between the two groups［case（%），n=59］

3 讨论

对于有手术治疗指征的早中期NSCLC 患者，IUVATS 肺叶切除术仍为首选治疗方案，为了提高术后预后效果和生存周期，术后需行辅助化疗［10］。EP 方案为NSCLC 常用一线化疗方案，即给予抗癌药物依托泊苷和顺铂抑制及杀灭癌细胞，两药联用能从不同作用机制和途径发挥协同增效作用。但常规化疗药物的毒性较大，杀灭癌细胞的同时对机体正常组织的损伤较大，患者耐受性较低，且不良反应影响化疗效果，破坏免疫功能系统［11］。

中医认为，NSCLC 属“癌病”“胸痛”“咳嗽”病变范畴，为正气亏虚、外邪侵肺、脏腑失调等导致的邪积胸中、阻塞气逆、痰血瘀滞等遂结成块而发病，病机根本在气阴两虚、热毒侵犯、痰瘀互结，故应以清热解毒、化痰软坚、扶正固本为主要治疗原则［12］。观察组患者增加消癌平治疗，ORR 和DCR 均显著升高，表明消癌平在NSCLC 术后辅助化疗中有良好应用价值。消癌平是中药通关藤的活性提取成分。通关藤归肺经，具有清热解毒、化痰通络之功效，可有效对抗NSCLC 的热毒侵犯、痰瘀互结［13］。通关藤提取物活性成分包括多种有机酸、生物碱、皂苷、多糖类成分。其中，绿原酸、咖啡酸等有机酸具有抗癌、抗病毒、抗菌和镇痛作用；生物碱可促进生长抑素的分泌作用，抑制肿瘤细胞增殖，诱导癌细胞凋亡［14］；多糖类成分能清除机体氧自由基，减轻氧化应激损伤；皂苷类活性成分可增强机体的免疫力，提高机体的活动能力，改善术后的乏力、气虚、神疲等不适感［15］。故从中医理论和现代药理学角度均证实消癌平对NSCLC术后的辅助治疗效果良好。

CD3+是细胞免疫的主要组成部分，而CD4+主要起调节作用，CD8+为细胞毒性T淋巴细胞，具有抑制CD4+及诱导靶细胞死亡的作用［16］。NSCLC 患者受癌细胞增殖及化疗药物治疗的影响，免疫功能处于较低水平，表现 为CD3+，CD4+，CD8+等细胞免疫指标的异常表达［17］。本研究中，观察组患者治疗后的CD3+，CD4+，CD4+/CD8+表达水平均显著高于对照组，CD8+表达水平显著低于对照组，表明消癌平能辅助改善患者的免疫功能。在癌症发病过程中伴随着多种血清学指标水平的异常改变［18］，miR-210是微小RNA家族中的一员，在多种生物学过程中起重要作用。有报道显示，miR-210与炎性损伤、癌细胞增殖有一定关联，可通过抑制肿瘤细胞促凋亡基因的表达，进而促进癌细胞的增殖转移［19］。miR-101 在NSCLC 患者中呈高表达，在肺上皮细胞中作为促癌炎性因子促进肿瘤的发生和癌细胞的增殖、转移，在肿瘤病情的进展中有重要调控作用［20］。本研究中，观察组患者治疗后的miR-210和miR-101表达水平均显著低于对照组，表明消癌平的辅助化疗能有效抑制上述指标的表达，进一步证实消癌平在NSCLC术后辅助化疗中的良好作用。观察组联用消癌平治疗的不良反应未显著增加，提示安全性良好。

综上所述，IUVATS 肺叶切除术联合消癌平治疗NSCLC 的临床疗效良好，能降低患者的肿瘤标志物水平，增强免疫力，抑制miR-210和miR-101的表达，且治疗安全性较好。