格雷夫斯病患者血清颗粒蛋白前体表达情况及其与IL-17、IL-10 相关性分析

宋秋玲，代 娇

（曲靖医学高等专科学校，云南曲靖 655000）

格雷夫斯病（Graves disease，GD）是一类器官特异性自身免疫性甲状腺疾病，是甲状腺功能亢进的主要病因〔1〕。流行病学数据显示，GD 的发病率为0.50%～2.30%，男性的发病率约为0.50%，而女性的发病率则高达3.00%左右〔2〕。GD 的主要特征为机体产生抗促甲状腺激素受体抗体（thyroid stimulating hormone receptor antibody，TRAb），发挥类似促甲状腺素（thyroid stimulating hormone，TSH）的生物学效应，进而引发甲状腺功能亢进和弥漫性甲状腺肿〔3〕。虽然目前GD 的发病机理并不清楚，但越来越多的研究证实促炎-抑炎免疫平衡的破坏可导致甲状腺淋巴细胞浸润以及B 细胞活化，进一步分泌自身抗体，而这些自身抗体在GD 病因学中扮演着重要的角色〔4〕。促炎-抑炎免疫平衡包括细胞因子和免疫细胞的失衡，其中细胞因子失衡包括白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）等促炎细胞因子异常上调，白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）等免疫抑制细胞因子异常下调；免疫细胞失衡包括近期研究较多的辅助性T 细胞（helper T cell，Th）17/调节性T 细胞（regulatory T cell，Treg）平衡破坏〔5〕。颗粒蛋白前体（progranulin，PGRN）是近期发现的一种免疫调控细胞因子，目前已有研究发现其在系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎及干燥综合征等多种自身免疫性疾病中存在异常表达〔6〕，机制学研究发现PGRN 可通过调控Th17/Treg 以及促炎-抑炎细胞因子平衡参与机体免疫调控。据此推测PGRN 可能在GD 发生、发展中发挥着一定的作用，但目前关于PGRN 在GD 中的研究报道甚少，本研究将探究GD患者外周血中PGRN 的表达变化及其与IL-17、IL-10 的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象将2019 年3 月至2021 年5 月于曲靖市第二人民医院内分泌科就诊且明确诊断为GD 的患者39 例（GD 组）纳入研究，选取同期健康体检者30 例作为健康对照（健康对照组）。GD 诊断主要依据甲状腺功能亢进的临床证据，临床典型症状为食欲增加但体质量下降、疲劳、热耐受不良、出汗增多及颤抖等；实验室依据为血清TSH 下降，游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（free tetraiodothyronine，F T4）和TRAb 升高，其中TSH＜0.34 μIU/mL，F T3＞6.30 pmol/L，FT4＞24.50 pmol/L，TRAb＞30.00 IU/mL。所有患者均为初诊患者且已排除自身免疫性疾病、其他慢性炎症性疾病或肿瘤等。GD 组中，男性10 例，女性29 例；平均年龄（36.89±11.67）岁。健康对照组中，男性7 例，女性23 例；平均年龄（35.02±10.58）岁。2 组人群在性别、年龄等方面差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 标本处理采集清晨空腹静脉血6 mL 分装于2 管中，室温静置20 min 后4 000 r/min 离心10 min分离血清，其中一管用于血清F T3、F T4、TSH 和TRAb 水平的测定，另一管分离血清冻存于-80 ℃冰箱，用于血清PGRN、IL-17 和IL-10 水平的测定。

1.3 血清标本测定采用电化学发光法测定血清FT3、FT4、TSH 和TRAb 水平；采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定血清PGRN、IL-17 和IL-10 水平，ELISA 试剂盒均购自美国R&D 公司，所有操作步骤严格按照试剂盒说明书执行。

1.4 统计分析采用SPSS 20.0 软件对实验数据进行统计分析，计量资料用（）表示，组间比较使用独立样本t 检验；采用Spearman 相关性分析法分析PGRN 与IL-17、IL-10 的相关性，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2 组人群甲状腺功能指标比较甲状腺功能测定结果显示，GD 组患者血清FT3、FT4和TRAb 水平显著高于健康对照组，血清TSH 水平显著低于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 2 组人群甲状腺功能指标比较（）

表1 2 组人群甲状腺功能指标比较（）

注：与健康对照组比较**P＜0.01。

2.2 2 组人群血清PGRN、IL-17 和IL-10 水平比较与健康对照组比较，GD 组患者血清PGRN 水平和促炎细胞因子IL-17 水平显著升高，抑炎细胞因子IL-10 水平显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

表2 2 组人群血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平比较（）

表2 2 组人群血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平比较（）

注：与健康对照组比较**P＜0.01。

2.3 GD 组患者血清PGRN 与细胞因子IL-17、IL-10 的关系Spearman 相关性分析结果显示，GD 组患者血清PGRN 水平与IL-17 水平呈显著正相关（r=0.508，P=0.008），与IL-10 水平呈显著负相关（r=-0.314，P=0.021）。

2.4 治疗前后患者血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平变化比较GD 组患者接受131I 治疗3 个月时再次测量其血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平，与治疗前相比，血清PGRN、IL-17 水平显著降低，IL-10 水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表3。

表3 GD 组患者治疗前后血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平变化比较（）

表3 GD 组患者治疗前后血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平变化比较（）

注：与治疗前比较**P＜0.01；此表中治疗前各项指标数据仅纳入GD 组中完成随访的12 例患者数据，故与表2 中各指标数据存在差异。

3 讨论

GD 在中国人群中的发病率为0.25%～1.09%，但在女性中的发病率高达3.00%左右〔7〕。目前GD的病因学机理尚不十分清楚，虽然涉及环境因素，但有研究〔8-9〕表明免疫功能紊乱在其中扮演着重要的角色。免疫细胞及相关细胞因子已成为GD 致病机制领域研究的热点，本研究发现相较于健康人群，GD 患者血清IL-17、IL-10 等细胞因子的表达水平存在异常现象。此外，Yao 等〔10〕的研究已证实GD 中异常的Th2 细胞反应非常重要，但Th2 细胞反应理论并不能完全解释GD 展现出的所有现象。Li 等〔11〕的研究发现CD4+T 淋巴细胞其他亚群（如Th17、Treg 及相关细胞因子）在自身免疫性甲状腺疾病中均存在异常现象，其中Th17/Treg 免疫平衡紊乱已被证实在GD 的致病机理中非常重要。Qin等〔12〕的研究结果发现Th17 及其转录因子RORγt和效应细胞因子IL-17 在GD 患者中异常上调，Treg 细胞频率显著下降，在本研究中同样发现IL-17 在GD 患者中表达水平异常上调，而本研究中的IL-10 是Treg 的直接效应细胞因子，故可间接表明GD 患者存在Treg 细胞反应下调现象。GD 患者接受131I 治疗后，其促炎细胞因子IL-17 水平较治疗前显著下降，抑炎细胞因子IL-10 显著上调，这也提示经过治疗后患者IL-17/IL-10 作用轴平衡有所恢复，免疫功能有所改善，然而何种因素参与调控Th17/Treg 免疫平衡紊乱尚不清楚。PGRN 是一类新发现的免疫调控性细胞因子，有研究〔13〕证实其可参与多个免疫信号通路的调控过程，它对Th17/Treg免疫平衡的调控也引发了学者的关注。本研究在GD 中发现PGRN 与IL-17 呈正相关，与IL-10 呈负相关，这也提示其可能通过调控IL-17/IL-10 作用轴参与了GD 的发病。这在既往研究中也有所证实，如Wang 等〔14〕发现在椎间盘退行性病变患者中PGRN 异常增加且可调控IL-17/IL-10 作用轴，进而抑制炎症；Li 等〔15〕在柯萨奇病毒B3 感染患者中发现PGRN 水平增加且可下调Th17 细胞分化并抑制细胞因子IL-17 的分泌；Wei 等〔16〕在结肠炎动物模型中发现PGRN 可诱导Treg 细胞分化及IL-10 分泌发挥保护作用，这些结果都表明PGRN 可能通过调控IL-17/IL-10 作用轴进而在包括GD 在内的多种自身免疫性炎症性疾病中发挥抑制炎症的生物学效应。

本研究发现PGRN 在GD 患者中异常上调，与既往在多种自身免疫性疾病患者中发现的PGRN表达异常的研究结果类似，如Tanaka 等〔17〕在类风湿性关节炎患者中发现血清PGRN 显著升高且与患者的临床疾病活动度密切相关，PGRN 可中和患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）分泌白细胞介素-6 的能力〔18〕。体外实验也证实异常上调的PGRN 在这些疾病中发挥抑炎效应，而之所以PGRN 出现高表达可能是机体出现了代偿效应，治疗后PGRN 显著下调的结果则提示其或可作为评估疾病严重程度以及预后评估的生物学标志物。本研究并未分析PGRN 在体外对GD 患者PBMC 中IL-17 和IL-10 分泌能力的影响，将在下一步研究中深入分析。

综上所述，本研究初步发现新型免疫调控因子PGRN 在GD 患者中的表达异常上调，且与IL-17、IL-10 存在显著相关，经过治疗，PGRN 水平显著下降，提示PGRN 可能参与了GD 的发病过程。