彝药野拔子的化学成分研究

林春燕，董 媛，张赟华，张雯洁

（云南省食品药品监督检验研究院，工业与信息化部产业技术基础公共服务平台，云南 昆明 650106）

野拔子为唇形科香薷属植物野拔子（Elsholtzia rugulosaHemsl.）的干燥地上部分，为常见的彝族药，彝药名有“阿能抛”和“尔吾”。2000多年前，野拔子已经作为彝药在使用[1]。成书于1566年的彝药书籍《齐苏书》中也记载了野拔子，认为其可治疗消化不良、胃痛、膈食，治跌打损伤、瘀血内停[2]。清代彝族医药书籍《医病好药书》中也收载了多个野拔子的单方或复方。《中国彝族药学》中彝医传统应用有“治风寒感冒；治蛔虫病；治蛇咬伤；治肚腹寒痛；治跌打损伤；治胃痛；治心情不舒、伤食等”[3]。前期研究表明，野拔子中主要含黄酮类、萜类、苯丙素类、有机酸、甾体等[4]。

为进一步研究野拔子的药用物质基础，本文采用多种柱色谱方法对野拔子进行了化学成分研究，得到6个化合物，其结构分别鉴定为：豆甾醇（I）、perilloxin （II）、熊果酸 （III）、乌苏酸内酯（IV）、2α, 3α, 19α-三羟基熊果酸（V）、白桦脂酸（VI）。其中，化合物II和IV为首次从该属植物中分离得到，化合物V为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

1.1 仪器

岛津 LC/MS-IT-TOF质谱仪（日本岛津公司）；Advance III-400型超导核磁共振仪，III-600型超导核磁共振仪（德国Bruker公司），以TMS为内标。

1.2 材料

MCI CHP20P填料（75～150 μm，日本Misubishi Chemical）；GF254薄层硅胶板（烟台新诺化工有限公司）；柱色谱硅胶（200～300目，海祥化工有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）；乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；熊果酸对照品（批号：110742-201823，含量：99.9 %，中国食品药品检定研究院）。

野拔子地上部分于2021年11月8日采自云南省玉溪市梁王山，由云南大学标本馆王焕冲老师鉴定为野拔子Elsholtzia rugulosaHemsl.，标本（编号：20211108-3-1）存放于云南省食品药品监督检验研究院。

2 提取与分离

取野拔子地上部分（5 kg），晒干粉碎，用90 %乙醇冷浸提取2次，每次20 L，合并后减压浓缩，得到浸膏（355 g）。浸膏用适量甲醇溶解，吸附于300 g硅胶（200～300目），进行硅胶柱层析，以氯仿、甲醇-氯仿（5:95）、甲醇-氯仿（10:90）、甲醇进行梯度洗脱，所得流份经薄层色谱（TLC）检测后合并，得到流份Fr. A～Fr. L。

Fr. G（8.0 g）经硅胶柱层析，以石油醚、丙酮-石油醚（5:95）、丙酮-石油醚（10:90）为洗脱溶剂进行梯度洗脱，所得流份经TLC检测后合并，得到Fr. G-1～ Fr. G-6。Fr. G-1（500 mg）经Sephadex LH-20柱层析纯化[洗脱剂：甲醇-氯仿（50:50）]，重结晶后得到化合物I（40 mg）。取Fr.G-1（2.0 g）进行硅胶柱层析，用乙酸乙酯-石油醚（5:95）洗脱，所得流份经TLC检测后合并，得到Fr. G-2-A～Fr. G-2-F。Fr.G-2-D经Sephadex LH-20柱层析纯化[洗脱剂：甲醇-氯仿（50:50）]，得到化合物II（400 mg）。

Fr. J（120 g）经硅胶柱层析，依次用丙酮-石油醚（5:95）、丙酮-石油醚（10:90）、丙酮-石油醚（20:80）、丙酮-石油醚（40:60）、丙酮洗脱，所得流份经TLC检测后合并，得到Fr. J-1～Fr. J-8。Fr. J-3（3.0 g）经硅胶柱层析，甲醇-氯仿（1:300）洗脱，所得流份经TLC检测后合并，得到4个流份（Fr. J-3-a～Fr. J-3-d）。Fr. J-3-c（2.0 g）首先经MCI gel CHP 20P（75～150 μm）柱层析[洗脱剂：甲醇-氯仿（90:10）]，继续经硅胶柱层析，洗脱溶剂为乙酸乙酯-石油醚（10:90），所得流份经TLC检测合并，得到6个流份（Fr. J-3-c-1～Fr. J-3-c-6）。流份Fr. J-3-c-1（150 mg）和Fr. J-3-c-2（600 mg）进一步经Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物IV（15 mg）和V（80 mg）。

Fr. J-8经硅胶柱层析，甲醇-氯仿（1:100）洗脱，所得流份经TLC检测合并，得到6个流份（Fr.J-8-a～Fr. J-8-f）。Fr. J-8-a与熊果酸对照品进行对照，鉴定为化合物III（1.5 g）。流份Fr. J-8-c（1 g）经硅胶柱层析，洗脱溶剂依次为乙酸乙酯-石油醚（20:80）、乙酸乙酯-石油醚（30:70），得到化合物VI（120 mg）。

3 结构鉴定

化合物I：白色针状结晶，HR-ESI-MSm/z413.3533[M+H]+（C29H48O，计算值为 413.3783）；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.34（1H，m，H-6），5.14 （1H，dd，J=15.1，8.7 Hz，H-22），5.01（1H，dd，J=15.1，8.8 Hz，H-23），3.51（1H，m，H-3），1. 05（3H，s，H-19），1.00（3H，d，J=5.1 Hz，H-21），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.87～0.77（6H，m，H-26，27），0.67（3H，s，H-18）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.4（C-1），31.8（C-2），71.9（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.0（C-7），32.0（C-8），50.3（C-9），36.3（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.3（C-13），56.2（C-14），24.4（C-15），28.4（C-16），56.9（C-17），12.0（C-18），19.5（C-19），40.6（C-20），21.2（C-21），138.5（C-22），129.4（C-23），51.4（C-24），32.0（C-25），21.2（C-26），19.2（C-27），25.6（C-28），12.1（C-29）。以上数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定该化合物为豆甾醇。

化合物II：黄色粉末，HR-ESI-MSm/z275.1296 [M+H]+（C16H18O4，计算值为275.1278）；1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.46（1H，s，H-4），5.86（1H，d，J=7.1 Hz，H-9），5.79（1H，d，J=7.2 Hz，H-7），5.66（1H，d，J=7.2 Hz，H-6），5.46（1H，d，J=7.1 Hz，H-8），4.50（1H，t，J=9.0 Hz，H-2），3.69（3H，s，H-1’’），3.08（1H，dd，J=16.1，8.7 Hz，H-3），3.00（1H，dd，J=16.1，9.3 Hz，H-3），1.31（3H，s，H-2’），1.18（3H，s，H-3’）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：89.07（C-1），31.32（C-2），127.2（C-3），108.6（C-4），150.9（C-5），123.0（C-6），108.6（C-7），145.4（C-8），147.0（C-9），107.4（C-10），118.2（C-11），150.8（C-12），71.8（C-13），26.3（C-14），24.2（C-15），56.9（C-16）。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定该化合物为perilloxin。

化合物III：白色粉末。HR-ESI-MSm/z457.3684 [M+H]+（C30H48O3，计算值为457.3682）；TLC检查中，与熊果酸对照品Rf值一致，鉴定该化合物为熊果酸。

化合物IV：白色粉末。HR-ESI-MSm/z455.3527 [M+H]+（C30H46O3，计算值为455.3525）；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.96（1H，d，J=11.4 Hz，H-12），5.53（1H，dd，J=10.3，3.1 Hz，H-11），3.22（1H，dd，J=11.5，4.8 Hz，H-3），1.16（3H，s，27-Me），1.05（3H，s，26-Me），1.00（3H，d，J=4.3 Hz，29-Me），0.99（3H，s，25-Me），0.93（3H，d，J=2.8 Hz，30-Me），0.91（3H，s，23-Me），0.79（3H，s，24-Me）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ：38.4（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），39.1（C-4），54.9（C-5），17.8（C-6），31.5（C-7），42.1（C-8），53.2（C-9），36.5（C-10），129.0（C-11），133.6（C-12），89.8（C-13），41.8（C-14），25.7（C-15），22.9（C-16），45.2（C-17），60.7（C-18），40.4（C-19），38.3（C-20），31.0（C-21），31.4（C-22），27.9（C-23），15.1（C-24），19.3（C-25），19.0（C-26），16.2（C-27），180.1（C-28），18.0（C-29），18.1（C-30）。以上数据与文献报道基本一致[7]，鉴定化合物IV为乌苏酸内酯。

化合物V：白色粉末。H R-E S I-M Sm/z489.3573 [M+H]+（C30H48O5，计算值为489.3580）；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δ：5.60（1H，brs，H-12），4.32（1H，d，H-2），3.78（1H，d，J=2.3 Hz，H-3），3.05（1H，s，H-18），0.91，0.99，1.12，1.28，1.44，1.65（各3H，s），1.12（d，J=3.8 Hz）。13C NMR（150 MHz，C5D5N）δ：43.3（C-1），66.6（C-2），79.8（C-3），39.0（C-4），49.2（C-5），19.1 （C-6），34.0（C-7），41.1（C-8），48.1（C-9），39.2（C-10），24.6（C-11），128.5 （C-12），140.4（C-13），42.9（C-14），29.7（C-15），26.9（C-16），48.8（C-17），55.1（C-18），73.2（C-19），42.7（C-20），27.4（C-21），39.3（C-22），30.0（C-23），22.8（C-24），17.1（C-25），17.8（C-26），25.1（C-27），181.2（C-28），27.6（C-29），17.3（C-30）。与文献报道的数据基本一致[8]，鉴定该化合物为2α, 3α, 19α-三羟基熊果酸。

化合物VI：白色粉末。HR-ESI-MSm/z457.3671 [M+H]+（C30H48O3，计算值为457.3682）；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δ：4.97（1H，brs，H-29α），4.79（1H，brs，H-29β），1.81（3H，s，H-23），1.25（3H，s，H-24），1.09（3H，s，H-30），1.08（3H，s，H-26），1.03（3H，s，H-25），0.84（3H，s，H-27）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δ：39.1（C-1），28.8（C-2），78.6（C-3），40.0（C-4），56.4（C-5），19.3（C-6），35.3（C-7），41.6（C-8），51.4（C-9），38.1（C-10），21.7（C-11），26.6（C-12），39.8（C-13），43.3（C-14），30.8（C-15），33.4（C-16），57.1（C-17），48.2（C-18），50.2（C-19），151.8（C-20），31.7（C-21），38.0（C-22），29.2（C-23），16.9（C-24），16.8（C-25），16.9（C-26），15.4（C-27），179.4（C-28），110.4（C-29），20.0（C-30）。与文献报道的数据基本一致[9]，鉴定该化合物为白桦脂酸。

4 结论

首先，在对野拔子地上部分进行的植化分离中发现三萜类成分种类较多且量大，本研究中得到的6个化合物中4个为五环三萜类；其次，文献中报道的五环三萜类成分较多，且得量较大，包括熊果酸、2α-羟基乌苏酸、2α-羟基齐墩果酸、齐墩果酸、桦木酸、3, 24-二羟基-17, 21-半缩醛基-12(13)齐墩果烯、2, 3-二羟基5(6), 2(13)-二烯熊果酸[9-12]等。因此，五环三萜类为野拔子中主要化学成分。