45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG的高效液相色谱分析方法

常海龙，王龙，卞传飞，肖健，李保同

(江西农业大学 国土资源与环境学院，江西 南昌 330045)

苯并烯氟菌唑，是由先正达研制的吡唑酰胺类杀菌剂[1]，被广泛用于防治小麦白粉病、亚洲大豆锈病等多种病害[2-6]。嘧菌酯，是由先正达开发研制的一种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂[7]，可用于防治白粉病、锈病等几乎所有的真菌病害，使用方式多样，且对作物生长较安全[8-10]。目前国内已经有苯并烯氟菌唑、嘧菌酯原药和嘧菌酯与其他药物复配制剂的常量分析方法报道，但是对苯并烯氟菌唑和嘧菌酯复配制剂的分析方法尚未见报道。本文采用高效液相色谱法同时测定45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂中有效成分的含量，方法简单高效，精确度好，适用于同时定量分析该制剂中的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

苯并烯氟菌唑标准品(≥98.0%)、嘧菌酯标准品(≥98.0%)、45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG(苯并烯氟菌唑15%，嘧菌酯30%)，均购自瑞士先正达作物保护有限公司。

安捷伦1260型 Ⅱ 代高效液相色谱仪；Poroshell 120 EC-C18(4.6 mm×150 mm，4-Micron)色谱柱；EX224ZH电子天平；F-060S超声波机。

1.2 高效液相色谱条件

检测波长220 nm，流动相为体积比60∶40的乙腈-0.1%磷酸水体系，柱温30 ℃，流速1 mL/min，进样量10 μL。

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的配制 于50 mL容量瓶中加入用电子天平精确称量的苯并烯氟菌唑标准品 0.005 0 g、嘧菌酯标准品0.010 0 g，加入20 mL乙腈进行溶解后用超声波机水浴助溶5 min，待静置冷却至室温后再用乙腈定容，摇匀后放置冰箱备用。

1.3.2 试样溶液的配制 于50 mL容量瓶中加入用电子天平精确称量的45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂0.033 4 g(精确至0.000 1 g)，加入20 mL乙腈进行溶解后用超声波机水浴助溶5 min，待静置冷却至室温后再用乙腈定容，摇匀后放置冰箱备用。

1.3.3 测定方法 用注射器移取0.5 mL标样溶液，过0.22 μm有机滤膜注入进样瓶，之后按照1.2节的色谱条件，待四元泵压力和基线趋于稳定，上机检测，连续进样，待相邻2针1.3.1节的标样溶液的峰面积值变化低于1.5%时，按照标样→试样→试样→标样溶液的顺序进样。在1.2节色谱条件下，嘧菌酯标准品的保留时间为2.963 min，苯并烯氟菌唑标准品的保留时间约为5.136 min。测定结果见图1、图2。

图1 苯并烯氟菌唑·嘧菌酯标样液相色谱图Fig.1 Liquid chromatogram of benzovindiflupyr· azoxystrobin standard sample

图2 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂液相色谱图Fig.2 Liquid chromatogram of benzovindiflupyr· azoxystrobin 45% WG

1.3.4 计算 平均2针标样和2针试样中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的峰面积，试样中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的质量分数(W2，%)按下式计算：

其中，A1、A2分别为标样和试样中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)峰面积的平均值；M1、M2为标样和试样的质量(g)；W1为标样溶液中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择 用注射器移取0.5 mL的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯标样溶液过0.22 μm有机滤膜注入进样瓶中，在190～400 nm的波长范围内进行紫外扫描，获得苯并烯氟菌唑和嘧菌酯的紫外吸收光谱图(图3)。发现苯并烯氟菌唑和嘧菌酯在200～240 nm处同时有较大吸收，因此综合考虑选择220 nm作为检测波长，在该波长下杂质和各组分能够很好分离。

图3 苯并烯氟菌唑·嘧菌酯紫外吸收光谱图Fig.3 UV absorption spectrum of benzovindiflupyr·azoxystrobin

2.1.2 流动相的选择 通过反复测试不同体积比的乙腈-水/0.1%磷酸水、甲醇-水/0.1%磷酸水体系来选择合适的流动相，并测试柱温和流速对峰面积以及保留时间的影响。

经过测试发现，柱温对待测样品峰面积以及保留时间的影响较小，不对其进行单独讨论；不同的流速对出峰时间的影响为：流速越小，苯并烯氟菌唑和嘧菌酯保留时间越长；当乙腈溶液作为有机相时，组分与杂质分离效果更好，杂峰更少，有效成分的峰面积更大，峰形更好；以乙腈+水体系为流动相，峰形会出现拖峰情况，为了得到更好的分离效果和峰形，将水相更换为0.1%磷酸水，并对其体积比进行优化。

最终确定色谱条件为：220 nm的检测波长，30 ℃ 的柱温，体积比为60∶40的乙腈-0.1%磷酸水体系，流速1 mL/min，进样量10 μL。

2.2 分析方法的线性相关性

制备质量浓度梯度为0.01，0.1，1，5，10，50，100(0.02，0.2，2，10，20，100，200)mg/L的苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)标样溶液。在上述高效液相色谱条件下，用外标法进行定量分析。以苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)标样溶液的质量浓度(x)为横坐标，苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)标样溶液的色谱峰面积(y)为纵坐标，绘制标准曲线图(图4、图5)。

苯并烯氟菌唑在0.01～100 mg/L质量浓度范围内，线性回归方程为y=35.114x-2.822 5，R2=0.999 9；嘧菌酯在0.02～200 mg/L质量浓度范围内，线性回归方程为y=41.967x-7.984 7，R2=0.999 9。该方法可用于分析和检测45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂。

图4 苯并烯氟菌唑标准曲线Fig.4 Standard curve of benzovindiflupyr

图5 嘧菌酯标准曲线Fig.5 Standard curve of azoxystrobin

2.3 分析方法的精密度

从同一45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂中取5个样品，在上述色谱条件下，待四元泵压力和基线趋于稳定后进样测定，通过计算得到45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂的标准偏差和变异系数(见表1)。苯并烯氟菌唑和嘧菌酯的标准偏差分别为6.86%和5.32%，变异系数为0.46%和 0.18%，变异系数均符合CIPAC的要求(<1.71%)，证明该方法精密度高。

表1 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂精密度测定Table 1 Precision determination of benzovindiflupyr·azoxystrobin 45% WG

2.4 分析方法的准确度

采用加标回收法，准确称取5份已知含量的45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂试样置于容量瓶中，分别加入一定量的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯标准品，按照上述色谱方法分析，计算回收率，结果见表2。苯并烯氟菌唑的回收率为98.97%～100.12%，平均回收率为99.49%；嘧菌酯回收率为98.36%～99.95%，平均回收率为99.18%。

表2 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂准确度测定Table 2 Accuracy determination of benzovindiflupyr·azoxystrobin 45% WG

3 结论

(1)使用Poroshell 120 EC-C18色谱柱，以体积比为60∶40乙腈-0.1%磷酸水体系为流动相，流速为 1 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为220 nm，建立了一种能够同时测定45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG中有效成分的高效液相色谱分析方法。

(2)检测结果表明，该方法操作简便，能使苯并烯氟菌唑和嘧菌酯有效分离，线性关系良好，精密度和准确度高，适用于45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒剂的定量分析。