南京市部分地区禽流感免疫抗体水平分析

刘峻池，黄 鑫，杨 虹，白梦茹，于丰硕

江苏省南京市畜牧兽医站，南京 210012

禽流感（avian influenza，AI）是由A 型流感病毒引起的人兽共患传染病，根据其病毒致病力的不同，大体可分为高致病性禽流感（HPAI）、低致病性禽流感（LPAI）和非致病性禽流感[1-2]。高致病性禽流感的广泛流行对养禽业的危害极重，被OIE 列为必须报告的动物传染病和A 类传染病，我国则将其列为一类动物疫病并实施强制免疫。高致病性禽流感病原主要为H5 亚型和H7 亚型，一旦感染家禽，发病率和死亡率均高，给养禽业造成重大损失[3-5]。疫苗免疫是防控禽流感的重要手段，目前，我国强制免疫的禽流感疫苗为重组禽流感病毒H5+H7 三价灭活疫苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re3 株）[6-8]。

1 材料与方法

1.1 主要材料

禽血清，采自江苏南京19 个家禽养殖场点；1%红细胞悬液，自行配制；禽流感病毒H5 亚型Re-11株血凝抑制试验抗原（批号2020002）、禽流感病毒H5 亚型Re-12 株血凝抑制试验抗原（批号2021002）、禽流感病毒H7 亚型H7-Re3 株血凝抑制试验抗原（批号2021004）及阴阳性血清，购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

1.2 样品采集

家禽侧卧保定，展开翅膀，暴露翅静脉，用酒精棉球擦拭静脉处表皮。入针，使采血器针头方向与静脉一致，入针角度约为15°。缓慢抽取禽血3～5 mL，拔出针头，套紧针帽，禽翅静脉压迫止血，将采血器活塞拉至最底部，掰去活塞轴，做好标记。

1.3 鸡红细胞的采集

采集3 只健康公鸡血液于抗凝管中，方法同本文“1.2”，采集时将抗凝管充分颠倒，使鸡血与抗凝剂混匀，标记备用。

1.4 禽血清样品的制备

将装有禽全血的采血器倾斜45°放入恒温培养箱37 ℃静置2 h，取出，再放入4 ℃冰箱静置过夜，使血清充分析出。将血清转移至无菌2 mL 离心管中，做好标记，备用。

1.5 1%红细胞悬液制备

向抗凝血中加入PBS，颠倒混匀以充分洗涤红细胞，1 000 r/min 室温离心10 min，充分吸取上清。如此洗涤3 次后，用PBS 配成体积分数为1%的红细胞悬液，备用。

1.6 抗体效价的测定

采用HA/HI 试验对禽血样本中的禽流感病毒抗体进行效价测定。血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验（微量法）按《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2020）进行。试验结果按照《2022—2025 年江苏省动物疫病监测与流行病学调查工作方案》（苏农办牧〔2022〕7 号）标准判定，即HI 抗体效价≥4 log2 为免疫合格个体，免疫合格个体数量占群体总数的70%（含）以上为免疫合格群体。

2 结果与分析

2.1 各场点禽流感疫苗免疫情况

本研究对各场点禽类别、饲养量、饲养模式、日龄及免疫情况进行了统计（表1），采集的血清样本主要来自于鸡，部分来自于鸭、鹅等水禽，所有养禽场均有H5+H7 三价灭活苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re3 株）免疫史，疫苗品牌按使用率排序依次为乾元浩、大华农、吉林冠界和哈药集团。

表1 各场点基本信息

2.2 各场点禽流感抗体检测情况

对各场点禽血清的Re-11 抗体、Re-12 抗体及H7-Re3 抗体进行检测，并对各场点的免疫合格率进行统计，结果见表2。300 份禽血Re-11 抗体合格率为98.3%，Re-12 抗体合格率为97.7%，H7-Re3 抗体合格率为94.3%；各场点Re-11、Re-12 抗体合格率均在70%以上，有2 个场点H7-Re3 抗体合格率不足70%。禽流感免疫抗体水平整体较高，但场点F、S 的H7-Re3 免疫效果不理想。

表2 各场点抗体合格率

2.3 各场点禽流感抗体水平分析

对各场点禽血清禽流感抗体水平进行分析，并计算出抗体效价均值及变异系数（表3）。总体上各场点禽流感免疫抗体效价较高、均匀度良好，但场点F、S 的抗体效价偏低且均匀度较差。

表3 各场点禽流感抗体效价均值及变异系数

续表3

3 讨 论

目前，疫苗免疫仍是我国养禽业防止禽流感暴发的主要措施，现阶段使用的疫苗为重组禽流感病毒H5+H7 三价灭活苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re3 株）。为主动监测本地区禽流感免疫情况，本研究对来自江苏南京19 个场点的300 份禽血进行抗体检测并对抗体水平进行分析[9-11]，以期为禽流感防控提供依据。

3.1 南京市禽流感免疫抗体水平整体较高

本研究中所选取的养禽场点在饲养规模上全面覆盖了禽场和散户，在养殖禽类别上兼顾了鸡、鸭、鹅3 种主要禽类。从疫苗接种率上，所有的禽类养殖场点均提供了禽流感疫苗免疫信息，禽流感疫苗接种率达100%，充分反映出本地区禽流感免疫工作整体完成情况良好、各场点工作人员素质较高。从抗体合格率看，总体上禽流感3 种抗体合格率均达90%以上，且大部分场点禽流感3 种毒株的抗体效价较高（8 log2 以上），可为禽流感Re-11株、Re-12 株及H7-Re3 株的感染提供免疫保护。从抗体均匀度看，整体上禽流感3 种抗体的变异系数均不超过0.3，表明抗体均匀度较高，达到了应有的免疫效果。

3.2 部分场点免疫效果不理想的原因

分析发现，场点F 和场点S 的H7-Re3 抗体合格率不足70%，理论上不能形成有效的群体保护，且这2 个场点的3 种抗体的变异系数均较高（＞30%），抗体均匀度差，具有感染风险。通过查询场点信息得知，场点F 最后1 次免疫距采样时间间隔已超过180 d，推测长时间未补免是导致抗体水平下降的主要原因，可通过及时补免使鸡群抗体恢复至高水平。场点S 主要饲养的禽类为鹅，该批鹅日龄较低，且采样前21 d 才进行禽流感疫苗的免疫，推测该鹅群抗体水平较低的主要原因是免疫与采样的时间间隔较短，鹅群尚未产生足够多的抗体，可间隔一段时间再对该鹅群进行抗体监测，若抗体水平仍较低则可能是免疫失败，应及时补免。

3.3 H7 亚型与H5 亚型免疫抗体水平的比较

在本研究中，对3 种抗体合格率计算发现，各场点合格率不足70%的指标均为H7-Re3 抗体。因此，本研究将所有场点的全部3 种指标的抗体效价进行统计并计算平均值，结果发现除有2 个场点3种抗体效价均达到10 log2 外，其余场点的H7 亚型抗体水平均低于该场点H5 亚型抗体水平，占89.5%。此外，由于国标《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936—2020）中HA/HI 试验所能测得的最高抗体效价为10 log2，由表3 可知许多场点的H5亚型抗体均值达10.00（即全部禽血样本抗体效价均为10 log2），理论上H7 亚型抗体水平与H5 亚型差距更大。通过查阅疫苗说明书，未发现3 种毒株在疫苗中的含量有差别，且H5+H7 灭活苗为“一针三价”，理论上不存在单独一价免疫失败的可能，因此推测2 种H5 亚型疫苗株之间存在交叉保护。这提示我们以后在禽流感抗体监测时要格外注意对H7 亚型的免疫抗体水平的监测。