食管癌组织中FHIT蛋白及mRNA的临床意义分析

陈 鹏

（赤峰市医院肿瘤外科，内蒙古 赤峰，024000）

食管癌是一种基因型疾病，长期以来，我国食管癌病死率均较高，对我国居民的生命健康造成了严重威胁[1]。现阶段，在降低食管癌病死率的尝试中，早期发现、诊断、治疗癌前病变是唯一途径。对疑似病例，均应做食管吞稀钡X 线双重对比造影。早期可见食管黏膜皱襞紊乱、粗糙或有中断现象。食管癌首发吞咽困难或者吃饭有哽咽感，甚至胸前区和后背有疼痛表现，出现上述症状要高度警惕。首选患者做食管钡餐检查，检查后如果发现食管黏膜有破坏、有充盈缺损或者食管壁僵硬，高度怀疑食管癌，建议患者做胃镜检查、食管镜检查。食管镜检查，可以对病变部位的描述更清楚。通过活检的办法，取组织以便诊断更明确，如果经病理诊断后，诊断是鳞状细胞癌，可明确诊断。病理诊断为临床上最常用的检查方法，也是确诊的方法，对于食管癌患者，没有食管镜活检的病理检查，不采用手术治疗。因此，分析癌前病变基因蛋白表达变化，并分析其和组织病理学改变的相关性，对其分子机制进行探讨，能够为临床提供食管癌发生发展及转归提供理论依据。近年来，分子生物学得到了飞速发展，临床日益重视食管癌中抑癌基因的作用[2]。有研究表明，绝大部分肿瘤中脆性组氨酸三联体基因（fragilehistidinetriad，FHIT）丢失或频繁降低表达，而FHIT 基因转录和肿瘤的发生相关，因此在多种肿瘤中，FHIT 基因均是候选抑制基因[3-4]。本研究统计分析了2019年3月～2021年10月赤峰市医院收治的60 例食管癌患者的资料，分析了食管癌组织中FHIT 蛋白及mRNA 的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2019年3月～2021年10月赤峰市医院的食管癌患者60 例样本作为病例组、内镜室的正常食管组织患者60 例样本作为对照组。对照组60 例，年龄37～77 岁，平均年龄（53.98±6.65）岁；女23 例，男37 例。病例组60 例，年龄36～76 岁，平均年龄（53.26±6.47）岁；女24 例，男36例；在病理分期方面：Ⅰ期10 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期22 例，Ⅳ期16 例；在分化程度方面：低分化10 例，中分化25 例，高分化25 例；在淋巴结转移情况方面：有40 例，无20 例。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。所有患者均知情同意参与本研究并签署知情同意书，且本研究已被赤峰市医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①均符合食管癌的诊断标准[5]；②均为鳞癌；③均经内镜检查确诊；④均具有正常的语言沟通能力。

排除标准：①有凝血功能障碍者；②合并其他恶性肿瘤者；③有严重心脑血管疾病者；④中途退出研究者。

1.3 方法

1.3.1 逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）

手术将食管癌组织及癌旁组织切取下来并冻存，制备成悬液，依据Trizol 试剂盒一步法将总RNA 提取出来。依据试剂盒要求的条件将cDNA 合成，在PCR 扩增中应用所得逆转录产物。PCR 反应条件：在94 ℃、94 ℃、55 ℃、72 ℃温度下分别预变形、变性、退火、延伸2 min、40 s、40 s、40 s，共36个循环，然后在72 ℃的温度下延伸7 min。外显子FHIT、β-actin基因上游引物序列分别为5'-GCCAACATCTCATCAAGCCCT-3'、5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'，下游引物序列分别为5'-TGGGTCGTCTGAAACAAATCG-3'、5'-CTCCTTAAT GTCACGCACGATTTC-3'，扩增片段分别为172 bp、500 bp。

1.3.2 免疫组化

运用SP 免疫组化检测法，应用免疫组化超敏试剂盒、抗FHIT 多克隆抗体一抗，阳性标准为有棕色颗粒出现在胞质中，阳性细胞所占百分比：无评定为0 分、≤10%评定为1 分、11%～50%评定为2 分、51%～75%评定为3 分、>75%评定为4 分，染色强度：无评定为0 分、浅黄色评定为1 分、浅棕色评定为2 分、深棕色评定为3 分，二者相乘0～1 分、2～3 分、>3 分分别评定为缺失表达、弱表达、正常表达[6]。

1.4 观察指标

①两组组织中FHIT 蛋白表达；②两组组织中FHIT mRNA；③病例组癌组织中FHIT mRNA 与临床病理参数的相关性。临床病理参数包括临床分期、分化程度、淋巴结转移。

1.5 统计学分析

采用SPSS 20.0 软件，计数资料用[n（%）]表示，比较采用χ2检验；计量资料以（±s）表示，比较采用t 检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组组织中FHIT 蛋白表达比较

与对照组正常组织相比，病例组癌组织、癌旁组织中FHIT 蛋白缺失表达率、弱表达率均较高（P<0.05），正常表达率均较低，差异有统计学意义（P<0.05），而与癌旁组织相比，癌组织中FHIT 蛋白缺失表达率较高（P<0.05），弱表达率、正常表达率均较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组组织中FHIT 蛋白表达比较 [n（%）]

2.2 两组组织中FHIT mRNA 比较

与对照组正常组织相比，病例组癌组织、癌旁组织中FHIT mRNA 缺失率均较高，差异有统计学意义（P<0.05），与癌旁组织相比，癌组织中FHIT mRNA 缺失率较高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2、图1。

表2 两组组织中FHIT mRNA 比较 [n（%）]

2.3 病例组癌组织中FHIT 蛋白及mRNA 与临床病理参数的相关性分析

与Ⅰ期患者相比，病例组Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与高分化患者相比，低分化、中分化患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率均较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与无淋巴结转移患者相比，有淋巴结转移患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率较高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 病例组癌组织中FHIT 蛋白与临床病理参数的相关性分析 [n（%）]

3 讨论

食管癌是食管发生的恶性肿瘤，在不断侵袭向腔内生长后，就会引起患者吞咽不畅；向腔外生长，会引起周围的脏器或软组织受侵袭，然后会播散到全身，出现全身转移。食管中段癌多与进食含亚硝酸盐的食物等有关，食管下段癌与胃食管反流有关。治疗方法有手术、放疗、化疗及综合疗法。如能行手术治疗，根据情况选择食管癌切除胃代食管吻合术，食管癌切除结肠代食管吻合术，食管癌切除空肠代食管吻合术。以食管癌切除胃代食管吻合术最为常用，并且效果好，为首选。同时可结合放化疗提高切除率和生存率。晚期和不能耐受手术的患者可选择放化疗。

FHIT 是近年新发现的抑癌基因，FHIT 主要通过某种信号途径诱导细胞凋亡、调控细胞周期、降解促使细胞增殖的二腺苷三磷酸（AP3A），从而抑制肿瘤细胞增殖。FHIT 基因是一种抑癌基因，其编码的FHIT 蛋白能够对多磷酸二腺苷进行区域特异性水解，使其向二磷酸腺苷及腺苷酸转变，参与调控细胞周期、细胞凋亡。有研究表明，在多种肿瘤的发生过程中，FHIT 蛋白广泛失活与缺失[7-8]。也有研究表明，在消化道肿瘤中，FHIT 基因具有异常的表达[9-10]。食管癌的发生发展和FHIT 蛋白及mRNA 表达下调与缺失关系密切，同时检测两种指标能够为临床早期诊断食管癌并判定预后提供有效依据[11-12]。本研究结果表明，与对照组正常组织相比，病例组癌组织、癌旁组织中FHIT 蛋白缺失表达率、弱表达率均较高，正常表达率均较低，差异有统计学意义（P<0.05），而与癌旁组织相比，癌组织中FHIT 蛋白缺失表达率较高，弱表达率、正常表达率均较低，差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组正常组织相比，病例组癌组织、癌旁组织中FHIT mRNA缺失率均较高，差异有统计学意义（P<0.05），与癌旁组织相比，癌组织中FHIT mRNA 缺失率较高，差异有统计学意义（P<0.05），说明癌组织中FHIT 蛋白及mRNA 表达随着癌前细胞转化为癌细胞而逐渐降低，因此组织学上正常组织在缺失FHIT 基因表达的情况下可能有癌变存在，早期诊断价值较高。同时，在食管癌的发生发展过程中，FHIT 基因的抑癌基因功能可能会在其缺失或减弱的情况下降低，从而促进食管癌易感性的增加。

本研究结果还表明，与Ⅰ期患者相比，病例组Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与高分化患者相比，低分化、中分化患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率均较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与无淋巴结转移患者相比，有淋巴结转移患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率较高，差异有统计学意义（P<0.05），说明FHIT 基因的阳性表达和食管癌癌组织临床分期、分化程度、淋巴结转移关系密切。现阶段，早期诊断仍然是提高食管癌患者5年生存率的重要手段，寻找出一种具有较高灵敏度与特异度的诊断方法是早期诊断的关键，而检测各种异常基因给临床提供了新的思路[13-14]。有学者对血浆中FHIT 基因的甲基化进行了检测，结果表明，血浆中FHIT 基因在肿瘤中甲基化，如果肿瘤患者的肿瘤长径在2 cm 以下、病理分级为Ⅰ级，那么其就具有异常的血浆DNA FHIT 基因，认为在早期诊断食管癌的过程中，检测血液中DNA FHIT 基因较为有效[15-16]。有学者采用高效荧光检测技术开发出对FHIT DNA 及蛋白表达进行同时检测的多功能生物芯片，其具有直接性、选择性、灵敏性等优势[17-18]。近年来，医学界逐渐确定了食管癌的发生发展与基因异常的关系，目前已经开始探索对食管癌治疗中基因异常的若干试验性治疗方法[19-20]。

综上所述，食管癌组织中FHIT 蛋白及mRNA 的缺失表达率提升，能够为临床诊断与治疗及预后判断提供有效依据。