微小RNA-196a-2、心房钠尿肽在原发性高血压合并心力衰竭患者血清中表达及其临床意义

黄 辉，邱炜炜，袁 彬，冯 凯

（江苏省江阴市中医院心内科，江苏江阴 214400）

原发性高血压（essential hypertension，EH）是由遗传、环境等多种因素引起的心血管综合征，是心力衰竭（heart failure，HF）发生的重要危险因素［1］。HF 的临床表现缺乏特异性，容易漏诊、误诊，影响预后甚至危及患者生命［2］。因此，寻找能早期诊断HF 的血清标记物显得至关重要。微小RNA-196a-2（microRNA-196a-2，miR-196a-2）可通过结合3'端非翻译区并于转录水平调控该基因的表达，广泛参与机体的各种病理、生理过程［3］。心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）是一种肽类激素，主要由心房肌细胞合成并释放，具有调节血压及心血管功能的作用［4］。黄颖等［5］研究报道，EH 合并HF 患者血浆微小RNA-196 表达上调，其水平升高与HF 严重程度及氨基末端脑钠肽前体浓度明显相关。鉴于此，本研究通过检测血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度，分析其与HF 患者发病及病情严重程度的关系，以期为个体化治疗及改善患者预后提供理论依据。结果如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2019 年3 月至2020 年9 月江阴市中医院收治的180 例EH 患者作为研究对象，其中男97 例，女83 例；年龄（56.21±15.80）岁。纳入标准：（1）均符合EH 相关诊断标准［6］；（2）临床资料完整；（3）患者及家属均知情同意，并签署《知情同意书》。排除标准：（1）合并有先天性心脏病；（2）严重肝、肾功能障碍；（3）有精神疾病；（4）合并恶性肿瘤、急慢性感染等可能影响miR-196a-2表达水平、ANP 浓度的疾病。根据HF 诊断标准［7］，将180 例患者分为HF组（n=74）和非HF组（n=106）。另选取性别、年龄匹配的同期健康体检者90 名作为对照组，其中男51 名，女39 名；年龄（57.04±16.11）岁。根据美国纽约心脏病协会（New York Heart Associ⁃ation，NYHA）心功能分级，HF 组患者Ⅱ级23 例，Ⅲ级29 例，Ⅳ级22 例。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 临床资料收集

收集3 组受试者的临床资料，包括性别、年龄、体质量指数、EH 病程、吸烟史（吸烟≥3 支/d且持续1 年）、饮酒史（折合饮酒量≥0.04 kg/d 且持续1 年）、EH 分级、心率、左心室射血分数（left ven⁃tricular ejection fractions，LVEF）、左心室舒张末期容积（left ventricular end diastolic volume，LVEDV）及左心室收缩末期容积（left ventricular end systolic volume，LVESV）情况。体质量指数=体质量（kg）/身高（m）2；EH 分 级［6］：收 缩 压140～159 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒张压90～99 mmHg，即为1 级；收缩压160～179 mmHg 和（或）舒张压100～109 mmHg，即为2 级；收缩压≥180 mmHg 和（或）舒张压≥110 mmHg，即为3 级；采用ACUSON X300 型彩色多普勒超声诊断仪（德国西门子）进行心动图检查，记录LVEF、LVEDV 及LVESV。

1.3 标本收集

收集EH 患者入院次日及对照组健康体检时空腹肘静脉血5 mL，以3 000 r/min 的速度离心10 min，分离血清，分为2 管，1 管用于检测miR-196a-2 表达水平，另1 管用于检测ANP 浓度。

1.4 血清miR-196a-2 表达水平检测

采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测血清miR-196a-2 表达水平。采用TRIzol 试剂盒（购自无锡百泰克生物技术有限公司）提取血清中总RNA，并使用cDNA 反转录试剂盒（购自江苏楚天生物科技有限公司）对A260/A280在1.8～2.0 的总RNA 行逆转录，合成cDNA产物。miR-196a-2 上游引物：5'-CGTCAGAAGG⁃AATGATGCACAG-3'，下游引物：5'-ACCTGCGTA⁃GGTAGGTTTCATGT-3'；内参U6 上游引物：5'-CT⁃CGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物：5'-AACGCT⁃TCACGAATTTGCGT-3'。反应条件为94℃、2 min，94℃、20 s，60℃、34 s，共40 个循环。重复3 次，采用2-ΔΔCt标准化法计算miR-196a-2 相对表达量。

1.5 血清心房钠尿肽浓度检测

采用酶联免疫吸附法检测血清ANP 浓度，人ANP 酶联免疫吸附法试剂盒购自泉州市九邦生物科技有限公司，检测方法参照试剂盒说明书。

1.6 统计学分析

采用SPSS 22.0处理数据。计数资料以［n（%）］表示，行卡方（χ2）检验。计量资料均符合正态分布，以（）表示，两组间比较行t检验，三组间比较行单因素方差分析（有差异时以SNK-q法进行两两比较）。采用Pearson 检验分析EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度与心功能指标的相关关系。采用多因素Logistic 回归模型分析影响EH 患者发生HF 的危险因素。以双侧P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组受试者临床资料比较

3组受试者性别、年龄、体质量指数、吸烟史、饮酒史、心率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；3 组受试者LVEF、LVEDV、LVESV 比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；非HF 组和HF 组患者EH 病程比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；非HF 组和HF 组患者EH 分级、LVEF、LVEDV、LVESV 比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 3 组受试者临床资料比较 ［n（%），±s］

表1 3 组受试者临床资料比较 ［n（%），±s］

注：与对照组相比，*P＜0.05；与非HF 组相比，1）*P＜0.05

2.2 3 组受试者血清miR-196a-2 表达水平、ANP浓度比较

非HF 组和HF 组患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；HF 组患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度均明显高于非HF 组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 3 组受试者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度比较 ［±s］

表2 3 组受试者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度比较 ［±s］

注：与对照组相比，*P＜0.05；与非HF 组相比，1）*P＜0.05

2.3 不同心功能分级EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度及心功能指标比较

心功能Ⅲ级、Ⅳ级EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度及LVEDV、LVESV 均明显高于Ⅱ级患者，LVEF 明显低于Ⅱ级患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；心功能Ⅳ级患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度及LVEDV、LVESV 均明显高于Ⅲ级患者，LVEF 明显低于Ⅲ级患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 不同心功能分级EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度及心功能指标比较 ［±s］

表3 不同心功能分级EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度及心功能指标比较 ［±s］

注：与心功能Ⅱ级比较，*P＜0.05；与心功能Ⅲ级比较，1）*P＜0.05

2.4 EH 合 并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度与心功能指标的相关性

EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP浓度分别与LVEF呈负相关（r=-0.464、-0.640，P＜0.05），分别与LVEDV 呈正相关（r=0.482、0.661，P＜0.05），分别与LVESV 呈正相关（r=0.478、0.652，P＜0.05），见图1。

图1 EH 合并HF 患者血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度与心功能指标的相关性散点图

2.5 影响EH 患者发生HF 的危险因素分析

将EH 患者是否发生HF 作为因变量，将有统计学意义的指标：EH 分级、LVEF、LVEDV、LVESV、miR-196a-2、ANP 作为自变量行多因素Logistic 回归分析。结果发现EH 3级、LVEF降低及血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度升高是影响EH 患者发生HF 的独立危险因素（P＜0.05），见表4。

表4 影响EH 患者发生HF 的危险因素分析

3 讨论

EH 患者由于长期的血管外周阻力增加，左心室的负担加重，导致左心室肥大，最终诱发HF，HF 发生与血压控制情况及EH 病情严重程度密切相关［8-9］。本研究结果也提示HF 发生与EH 病情严重程度有关。同时超声心动图检查结果发现，非HF组和HF组患者LVEF较对照组降低，LVEDV、LVESV 较对照组升高，HF 组患者变化更明显，且心功能分级越高，心功能指标异常越严重，提示合并HF 的患者心功能已受到损害。

微小RNA（microRNA，miRNA）可通过抑制蛋白质翻译或其目标mRNA 的降解这两种方式参与调控基因表达，在生长发育、代谢等方面发挥关键性的生物学作用［10-11］。已有研究证实［12-13］，miRNA与EH、心脏病等心血管疾病发生、发展密切相关。miR-196a-2 是miRNA 家族中重要一员，近年来在心血管疾病中的作用受到越来越多的关注［14］。有研究表明，微小RNA-196a-2 基因多态性与冠状动脉疾病易感性相关［15］。本研究结果显示，非HF组和HF 组患者血清miR-196a-2 表达水平较对照组升高，且HF 组患者升高更明显，提示血清miR-196a-2 表达水平升高可能参与HF 发病。进一步研究发现，心功能Ⅳ级患者血清miR-196a-2 表达水平最高，其次为心功能Ⅲ级患者，心功能Ⅱ级患者血清miR-196a-2 表达水平最低，且血清miR-196a-2 表达水平与LVEF 呈负相关，与LVEDV、LVESV 呈正相关，提示血清miR-196a-2 表达水平越高，EH 合并HF 患者心功能受损可能越严重。

ANP的主要作用是降压，使血管外周阻力减小，当中心静脉压升高、血量过多等心房壁受牵拉时，可刺激心房肌细胞释放ANP［16-18］。Banaszak等［19］研究报道，EH 和肾性高血压儿童血清N 末端ANP 前体浓度较血压正常儿童升高，且肾性高血压儿童血清N 末端ANP 前体浓度较EH 儿童高。还有研究表明，ANP 与心脏压力和容量负荷的增加有关，其浓度变化可作为评估心肌肥厚和HF 的有效指标之一［20］。本研究结果显示非HF 组和HF 组患者血清ANP 浓度明显升高，且HF 组患者血清ANP浓度明显高于非HF 组患者，提示血清ANP 浓度升高可能与HF 发生有关。同时对HF 组患者心功能进行分级，结果发现不同心功能分级患者血清ANP 浓度从高到低为Ⅳ级、Ⅲ级、Ⅱ级，且与心功能指标LVEF 呈负相关，与LVEDV、LVESV 呈正相关，提示EH 合并HF 患者血清ANP 浓度升高可能与心功能受损程度密切相关。此外，本研究结果还发现，血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度升高是影响EH 患者发生HF 的独立危险因素，提示临床检测血清miR-196a-2 表达水平、ANP 浓度，可能有利于评估EH 患者HF 发生情况，对及时采取措施防治HF 具有一定指导意义。

综上所述，EH 合并HF 患者血清miR-196a-2表达水平、ANP 浓度升高，且两者均与心功能指标LVEF、LVEDV 及LVESV 密切相关，同时也是影响HF 发生的独立危险因素，有望成为防治HF 的血清标记物。但本研究样本量较少，结果具有一定局限性，尚需扩大样本深入研究。