非酒精性脂肪肝患者血清Asprosin、Glypican 4表达水平及临床意义

何学学，谢梅

延安市人民医院感染科，陕西 延安 716000

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，疾病谱包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化等[1-2]。流行病学调查结果显示，NAFLD 已经成为全球最为常见的慢性肝脏疾病，其发病率呈逐年上升趋势[3]。白脂素(asprosin)是一种新发现的脂肪因子，在机体能量平衡、炎症和免疫应答等代谢过程中发挥作用[4]。磷脂酰肌醇蛋白聚糖4 (glypican 4，GPC-4)是一种由白色脂肪组织分泌的脂肪因子，与胰岛素敏感性密切相关，能够通过与胰岛素受体之间的相互作用，调节胰岛素信号的转导，促进脂肪细胞分化[5]。近年来相关研究发现，脂肪组织分泌的脂肪因子可能参与胰岛素抵抗以及NAFLD 的发生与发展[6-7]。但是目前关于血清Asprosin、Glypican 4与NAFLD的相关研究尚少。因此，本研究主要探讨NAFLD 患者的血清Asprosin、Glypican 4表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年10月至2020年10月延安市人民医院收治并确诊的98例NAFLD患者为研究对象。纳入标准：(1)符合NAFLD的诊断标准[8]；(2)均为初次进行治疗；(3)临床资料完整；(4)家属和患者知情同意。排除标准：(1)合并病毒性肝炎，药物性肝炎等其他肝脏疾病；(2)合并严重肝肾功能不全者；(3)合并恶性肿瘤者；(4)既往有精神病史或认知功能障碍者；(5)妊娠期或哺乳期女性。根据疾病严重程度[7]不同将NAFLD患者分为轻度组42例(肝实质回声弥漫性改变，稍细密、增强；后方回声无衰减，包膜清晰；肝脏内管状结构清晰可见)、中度组31例(肝实质回声弥漫性改变，细密、增强；后方回声有衰减，包膜欠清晰；肝脏内管状结构欠清晰)和重度组25 例(肝实质回声弥漫性改变，显著细密、增强；后方回声衰减明显，包膜不清或者不可见；肝脏内管状结构不清或者不可见)。另选取同时期来我院体检的30例健康人作为对照组。各组受检者的年龄、性别、病程(仅患者)比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，而三组患者的体质量指数(BMI)明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。本研究经我院医学伦理委员会审核批准(批号：180209)。

表1 各组受检者的一般资料比较[，例(%)]

表1 各组受检者的一般资料比较[，例(%)]

组别轻度组中度组重度组对照组F/χ2值P值例数42 31 25 30年龄(岁)45.68±8.14 45.96±8.17 45.84±8.16 46.79±8.21 0.120 0.948男/女25(59.52)/17(40.48)19(61.29)/12(38.71)14(56.00)/11(44.00)17(56.67)/13(43.33)0.223 0.974病程(月)18.26±5.37 18.57±5.36 19.68±5.41-0.560 0.571 BMI(kg/m2)23.39±2.31 24.82±2.34 26.91±2.46 20.74±2.25 34.410 0.001

1.2 检测方法 所有受检者均需要采集清晨空腹外周静脉血10 mL，3 500 r/min 离心10 min，取上清液，放置于-80℃冰箱内保存待检。采用酶联免疫吸附法检测血清Asprosin、Glypican 4 水平；采用全自动生化仪(北京普朗新技术有限公司)检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)；根据FBG和FINS计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(HOMA-IR=FBG×FINS/22.5)。所有试剂盒均购于上海酶联生物科技有限公司，具体操作均按照使用说明书进行。

1.3 统计学方法 应用SPSS24.0 软件进行数据分析。计量资料符合正态分布，以均数±标准差()表示，采用单因素方差分析比较，多重比较采用SNK-q检验；计数资料比较采用χ2检验；相关性分析采用Pearson 相关分析法，采用受试者工作特征曲线(ROC)评估血清 Asprosin、Glypican 4 对 NAFLD 的诊断价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组受检者血清中Asprosin、Glypican 4 表达水平比较 轻度组、中度组、重度组患者血清中Asprosin、Glypican 4 表达水平明显高于对照组，且随着疾病严重程度的加重而升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 各组受检者血清中Asprosin、Glypican 4表达水平比较()

表2 各组受检者血清中Asprosin、Glypican 4表达水平比较()

注：与对照组比较，aP＜0.05；与轻度组比较，bP＜0.05；与中度组比较，cP＜0.05。

组别 例数Asprosin(ng/mL)Glypican 4(μg/L)对照组轻度组中度组重度组F值P值30 42 31 25 1.07±0.23 1.56±0.54a 1.94±0.65ab 2.68±0.34abc 40.090 0.001 2.21±0.41 2.62±0.43a 2.97±0.46ab 3.86±0.85abc 46.270 0.001

2.2 各组受检者血清生化指标表达水平比较 轻度组、中度组、重度组患者血清中AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR表达水平明显高于对照组，且随着疾病严重程度的加重而升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 各组受检者的血清生化指标表达水平比较()

表3 各组受检者的血清生化指标表达水平比较()

注：与对照组比较，aP＜0.05；与重度组比较，bP＜0.05；与中度组比较，cP＜0.05。

组别轻度组中度组重度组对照组F值P值HOMA-IR 2.73±0.45abc 3.94±0.56ab 5.78±1.26a 1.54±0.42 185.080 0.001例数42 31 25 30 AST(U/L)34.67±8.45abc 40.79±9.31ab 56.42±10.47a 16.69±4.64 84.581 0.001 ALT(U/L)32.79±8.46abc 39.13±9.28ab 51.35±10.28a 15.34±4.51 63.035 0.001 FBG(mmol/L)4.67±0.31abc 5.42±0.32ab 7.10±0.54a 4.31±0.24 334.990 0.001 FINS(mU/L)12.29±3.67abc 14.35±3.74ab 17.13±4.16a 8.17±1.48 30.137 0.001

2.3 血清Asprosin、Glypican 4水平与各项指标的相关性 经Pearson相关分析结果显示，血清Asprosin、Glypican 4均与AST、ALT无关(P＞0.05)，与BMI、FBG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P＜0.05)，见表4。

表4 血清Asprosin、Glypican 4水平与各项指标的相关性

2.4 血清Asprosin、Glypican 4 及两者联合对NAFLD的诊断价值 绘制ROC曲线(图1)，与单项指标诊断NAFLD相比，Asprosin、Glypican 4两者联合诊断NAFLD的临床价值更高，见表5。

表5 血清Asprosin、Glypican 4及两者联合对NAFLD的诊断价值

图1 血清Asprosin、Glypican 4及两者联合对NAFLD的诊断ROC曲线

3 讨论

NAFLD 是指排除酒精和其他明确的损肝因素，以肝细胞内脂肪过度沉积为特征的临床病理综合征，其发病机制尚不明确，可能与肥胖、糖尿病、胰岛素抵抗等有关[9]。近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，NAFLD的发病率逐年升高，且发患者群逐渐年轻化，严重影响人们的身心健康[10]。大部分NAFLD 患者早期临床症状不明显，少数患者会出现消化不良、肝区疼痛、肝脾肿大等非特异性症状和体征[11]。肝活检是临床上诊断NAFLD的“金标准”，但由于其创伤性大，术后容易引起感染、出血、血肿等并发症，而且容易造成采样误差，存在一定的局限性[12]。因此，寻找一种创伤性小、敏感性高的生物学指标来早期诊断NAFLD，为临床治疗提供参考依据，是现阶段研究的热点。

Asprosin 是由140 个氨基酸组成脂肪因子，是原纤维蛋白C 末端裂解的产物，通过肝细胞的G 蛋白-cAMP-PKA信号通路诱导肝糖原的合成与释放，从而促进血清胰岛素和血糖升高[13]。同时，Asprosin 能够调节机体炎性反应，促进胰岛β细胞凋亡，保护机体的心肌细胞，改善心功能[14]。刘师伟等[15]研究发现，Asprosin能够参与糖脂代谢，并且增加胰岛素抵抗，在糖尿病的发展进程中起着重要作用。刘文华等[16]研究发现，Asprosin 在多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者体内水平升高，并且与疾病的发生、发展有关。本研究结果显示，轻度组、中度组、重度组患者血清中Asprosin 表达水平明显高于对照组(重度组＞中度组＞轻度组)，表明血清Asprosin 可能参与NAFLD 的发生发展，并且与疾病严重程度有关。究其原因，Asprosin能够调节下丘脑促食和厌食神经元，当其血清水平升高时，促食神经元被激活，厌食神经元失效，导致机体的脂质代谢紊乱，大量的脂肪在肝内堆积，形成脂肪肝。同时，Asprosin 能够通过内质网应激及炎性途径增强机体的胰岛素抵抗，导致胰岛素作用减弱，肝内游离的脂肪酸增多，甘油三酯形成增加，过多的甘油三酯在肝内堆积，进而诱发NAFLD。

Glypican 4是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPGs)的成员之一，位于Xq26.1染色体，广泛存在于皮下组织脂肪中，能够通过磷脂酰肌醇定于细胞膜的表面，可以参与多种生长因子的信号传导[17]。同时，Glypican 4能够与肝脏、脂肪组织等胰岛素靶器官上的受体相结合，促进胰岛素的信号转导，参与葡萄糖的摄取和脂肪细胞的分化过程[18]。宁冬平[19]研究发现，血清Glypican 4水平在代谢综合征患者体内升高，并且与胰岛素抵抗有关。ZHANG等[20]研究发现，血清Glypican 4水平在不同糖代谢状态的肥胖患者中升高，并且其水平高低与胰岛素抵抗呈正相关。本研究结果显示，轻度组、中度组、重度组患者血清中Glypican 4表达水平明显高于对照组(重度组＞中度组＞轻度组)，表明血清Glypican 4水平升高与NAFLD患者疾病严重程度有关。究其原因，Glypican 4能够直接作用于胰岛素受体，减弱胰岛素的敏感性，增强机体的胰岛素抵抗，促使机体的脂解作用降低，大量的脂肪组织和非脂肪组织向肝内转移和堆积，进而形成NAFLD。

本研究结果显示，轻度组、中度组、重度组患者血清中AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR 表达水平明显高于对照组(重度组＞中度组＞轻度组)，差异均有统计学意义(P＜0.05)。此外，经Pearson 相关性分析结果显示，血清Asprosin、Glypican 4 均与AST、ALT 无关(P＞0.05)，与 BMI、FBG、FINS、HOMA-IR 呈正相关(P＜0.05)。表明血清 Asprosin、Glypican 4 与 NAFLD 患者体内糖脂代谢和胰岛素抵抗有关。随着NAFLD患者体内糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗加剧，血清Asprosin、Glypican 4 水平呈上升趋势，可能与其参与胰岛素合成以及相关信号通路的传导有关。ROC 曲线分析结果显示，血清Asprosin、Glypican 4预测NAFLD的AUC为0.856、0.841，两者联合检测的AUC 为0.894。表明血清Asprosin、Glypican 4 能够作为早期诊断NAFLD的生物学标记物，且两者联合诊断的价值更高，可以为临床早期治疗提供参考依据，对改善患者预后具有重要的临床意义。

综上所述，NAFLD 患者血清Asprosin、Glypican 4水平均升高，且与疾病的严重程度有关，两者对辅助诊断NAFLD具有一定的临床价值。