酸浆化学成分及抗胃溃疡活性研究＊

王 勇，张炯怡谢明军，宋晓宁，张志勇，马 莹，李泽夏琼，赵 丽，邱红燕，刘 丹，甘 甜，杨 健

（1.贵州省食品药品检验所 贵阳 550004；2.贵州省食品检验检测院 贵阳 550004；3.贵州省药品监督管理局 贵阳 550004）

胃溃疡主要发生于胃部，是一种常见、多发病，同时又是一种易复发的慢性疾病。据有关资料统计其发病率占总人口的10%左右[1]。胃溃疡的现代医学发病机制迄今尚未完全阐明，目前认为，由攻击因子与防御因子之间失去平衡导致的胃粘膜损伤是本病的直接病因[2-4]。虽然许多合成药物，如质子泵抑制剂、抗生素、组胺受体拮抗剂、前列腺素类似物和胃保护药等[5]，被广泛用于治疗胃溃疡，但大多数药物长时间使用会造成过敏、心律不齐、造血功能改变、男性乳房发育症和阳痿等副作用[6]，且价格昂贵，不合理用药时疗效较慢。并且由于发病机制复杂，至今仍没有根治胃溃疡的药物。目前对胃溃疡的治疗常需要多种药物长期联合治疗，且一旦停药，溃疡极易复发或出血。因此，开发一种高效的、能完全治愈胃溃疡的新型药物是当今世界胃肠病学及药理学研究领域的重要课题之一。

传统医药和民间医药中蕴藏着极为丰富的抗胃溃疡天然活性物质，是开发抗胃溃疡药物的重要资源。且大多数天然产物具有易降解、对非靶标生物毒性低、结构新颖、活性高和副作用少等特点。因此从天然产物中寻求、筛选活性分子，是有效研制具有自主知识产权的创新药物的一条重要捷径。

酸浆属茄科酸浆属植物，英语名为Ground cherry，拉丁种名为Physalis alkekengiLinn.var.franchetii。在中国药典中，它的药材名叫酸浆，又名红姑娘、挂金灯、灯笼草等[1]。我国酸浆资源丰富，全国大部分地区均有分布，其中北方较多，吉林、河北、新疆维吾尔自治区等地为主要产区[8]。据研究报道，锦灯笼具有抗炎、抗菌、利尿、抗癌等多种药理作用[7]。酸浆的化学成分早期已被广泛报道[9-10]，目前为止，从酸浆中大约已经分离出120多种成分[11]，包括生物碱、甾体、黄酮和苯丙素类等。其中，黄酮和甾体（主要为酸碱苦味素类）被广泛认为是酸浆的特征活性物质。本课题组前期研究发现，酸浆微粉对小鼠水浸应激性溃疡有明显的抑制作用，并且低浓度对幽门螺旋杆菌具有较强的抑制和杀灭作用[12]。2015年，本课题组获得贵州省科技厅科技支撑项目资助（合同编号：黔科合SY字【2015】3032），重点对酸浆进行生物活性部位筛选及考察其抗胃溃疡作用，研究结果发现，酸浆乙酸乙酯萃取部位具有显著的抗胃溃疡活性[13]。因此，本实验对酸浆乙酸乙酯活性部位进行了化学成分研究，并对分离得到的32个化合物进行了结构鉴定，其中化合物3、4、12、26和32为首次从酸浆中分离得到。通过对分离纯化过程中的粗分片段进行体内抗胃溃疡活性筛选，推测抗胃溃疡药效分子并进行体内活性实验验证，进一步明确了酸浆苦味素B和木犀草苷是酸浆抗胃溃疡的物质基础，其中酸浆苦味素B显著的抗胃溃疡活性属于首次报道。

1 仪器与材料

Bruker AVNCEⅢ600M核磁共振仪[Bruker AVNCE 400M，核磁氘代试剂为MeOD（δH=3.31 ppm，δC=49.00 ppm）、CDCl3（δH=7.26 ppm，δC=77.16 ppm）和DMSO-d6（δH=2.50 ppm，δC=39.52 pp）；谱 图 软 件mestrenova version：6.1.0-6224，核 磁 软 件topspin version：2.1]，ZF-I紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂），KQ-250B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），RV8 V旋转蒸发仪（艾卡（广州）仪器设备有限公司），MS105DU电子天平（由梅特勒-托利多国际股份有限公司），硅胶200-300目及薄层用硅胶板GF254（均由青岛海洋化工厂提供），Sephadex LH-20凝胶柱层析（20-80 µm，Amersham Pharmacia Biotech AB公司）；ODS C18反相硅胶和Silica gel 60 RP-18 F254s反相薄层色谱板（德国Merck公司），其他试剂均为分析纯。

酸浆全草30 kg于2015年7月购于安徽亳州药材市场，药材样品经贵州省食品药品检验所中药标本馆李阳馆长鉴定为茄科酸浆属植物酸浆（Physalis alkekengiL.var.franchetii），植物标本（No.20150726）存放于贵州省食品药品检验所中药标本馆。

2 方法

2.1 提取与分离

取自然干燥的酸浆植物全草30 kg，粉碎成粗粉，用工业甲醇浸泡3次，每次3-4天，过滤，滤液合并，减压回收有机溶剂，蒸干的浸膏（4.18 Kg），加适量80-90℃蒸馏水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，回收溶剂，得乙酸乙酯部位浸膏698.36 g，经硅胶柱色谱对乙酸乙酯部位进行分离，先用氯仿、甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂对乙酸乙酯部位浸膏进行溶解，拌样，用850 g硅胶（200-300目）与溶液均匀混合，自然干燥，碾成粉末备用，装柱（干装，用200-300目硅胶4 kg），石油醚-丙酮100∶1梯度洗脱，用1000 mL锥形瓶接液，浓缩回收溶剂，第50瓶开始用石油醚-丙酮100∶2梯度洗脱，第70瓶开始用石油醚丙酮100∶2.5梯度洗脱，第200瓶开始用石油醚-丙酮=20∶1梯度洗脱，利用薄层硅胶板检测物质并展开。

合并粗分得以下几个组分:Fr A 1～14（5.9888 g）、Fr B 15～23（0.5564 g）、Fr C 24～27（0.2610 g）、Fr D 28～36（12.1684 g）、Fr E 37～51（1.8412 g）、Fr F 52～60（1.4990 g）、Fr G 61～71（4.8549 g）、Fr H 72～79（5.6053 g）、Fr I 80～89（5.6306 g）、Fr J 90～115（1.7796 g）、Fr K 116～124（4.9952 g）、Fr L 125～140（2.9292 g）、Fr M 141～169（8.7300 g）、Fr N 170～182（9.8300 g）、Fr O 183～206（28 g）、Fr P 207～233（32 g）、Fr Q 234～257（50 g）、Fr R（412.5353 g）。运用硅胶柱层析、C18反相柱层析、凝胶Sephadex LH-20柱层析和MCI大孔树脂柱层析等各类柱色谱分离方法对粗分片段进行分离纯化，分别从片段Fr G中分离得到化合物1（1.0 mg）、2（95 mg）、3（8.5 mg）、4（7.6 mg）、5（12 mg）、6（19 mg）、7（8.0 mg）和8（12 mg）；从片段Fr H中分离得到化合物9（7.0 mg）、10（6.0 mg）和11（3.0 mg）；从片段Fr I中分离得到化合物12（7.0 mg）、13（8.0 mg）、14（20 mg）和15（35 mg）；从片段Fr JK中分离得到化合物16（11.5 mg）、17（37 mg）、18（6.6 mg）、19（68 mg）和20（7.0 mg）；从片段Fr L中分离得到化合物21（10 mg）、22（8.0 mg）、23（12 mg）、24（4.0 mg）和25（9.0 mg）；从片段Fr M中分离得到化合物26（12 mg）和27（20 mg）；从片段Fr N中分离得到化合物28（10 mg）、29（8.0 mg）、30（14 mg）。

2.2 抗胃溃疡活性研究

2.2.1灌胃溶液的制备

待测粗分片段组：分别取Fr A、Fr D、Fr G、Fr H、Fr I、Fr K、Fr M、Fr N和Fr OPQR（由Fr O、Fr P、Fr Q、Fr R合并所得）九个粗分片段500 mg，用0.5%羧甲基纤维素钠（Carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na）配成50 mg·mL-1混悬液；待测单体药物组：分别取木犀草苷和酸浆苦味素B适量，用0.5%CMC-Na配成一定浓度的混悬液。并用0.5% CMC-Na分别将每组待测药物混悬液稀释至三个浓度梯度；阳性药物组：取法莫替丁200 mg，用0.5% CMC-Na研磨定容200 mL，制得浓度为1.0 mg·mL-1的混悬液。

2.2.2分组及给药

粗分片段抗胃溃疡活性筛选实验：取SD大鼠33只（约200 g），雌雄各半，按完全随机设计法分为11组，每组3只：法莫替丁10 mg·kg-1对照组、模型对照组、待测药物组（Fr A组、Fr D组、Fr G组、Fr H组、Fr I组、Fr K组、Fr M组、Fr N组和Fr OPQR组，用量均为250 mg·kg-1），分别灌胃给药，给药容积为10 mLkg-1，模型对照组给予等容积0.5% CMC-Na溶液。每天给药一次，给药2天；

单体药物抗胃溃疡考察实验：取SD小鼠54只（约25 g），雌雄各半，按完全随机设计法分为9组：正常对照组、模型对照组、酸浆苦味素B高剂量组（25 mg·kg-1）、中剂量组（12.5 mg·kg-1）、低剂量组（6.25 mg·kg-1），木犀草苷高剂量组（40 mg·kg-1）、中剂量组（20 mg·kg-1）、低剂量组（10 mg·kg-1）、法莫替丁40 mg·kg-1组，分别灌胃给药，给药容积为40 mg·kg-1，正常对照组和模型对照组分别给予等容积0.5% CMC-Na溶液。每天给药一次，连续2天。

2.2.3模型制备

粗分片段抗胃溃疡活性筛选实验：11组33只大鼠均造模。连续给药2天，第一天给药后开始禁食（不禁水，严格控制大鼠吃自己的粪便和垫料），24 h后（即第2天）继续给药一次，在给药1 h后灌胃95%乙醇（0.5 ml·200 g-1），乙醇灌胃1 h后，各组大鼠经乙醚麻醉并脱颈处死。

单体化合物抗胃溃疡考察实验：除正常对照组6只外，其余8组48只小鼠均造模。连续给药2天，第一天给药后开始禁食（不禁水，严格控制大鼠吃自己的粪便和垫料），24 h后（即第2天）继续给药一次，在给药1 h后灌胃95%乙醇5 ml·kg-1，1 h后将所有小鼠用乙醚麻醉脱颈处死。

2.2.4观察指标及方法

（1）胃溃疡面积的测定

小鼠和大鼠处死后，结扎贲门和幽门并取出胃，向胃腔内注入5%甲醛溶液8 ml。固定30 min后用剪刀沿胃大弯处剪开。用0.9%生理盐水将胃粘膜表面粘液冲洗干净后肉眼观察腺胃部胃粘膜的损伤程度。使用OLYMPUS体式显微镜自带图片编辑工具计算胃溃疡面积。并通过以下方程计算胃溃疡抑制率：

（2）透射电镜观察主细胞和壁细胞超微结构

取正常对照组、高剂量药物组、中剂量药物组、低剂量药物组和模型组的小鼠胃，在垫有冰块的平皿上，沿胃大弯剖开，在大鼠腺胃前后壁中央处，剪下0.5×0.5 cm大小胃黏膜组织，经2.5%戊二醛4℃固定，包埋切片，制作电镜标本，于8000倍下观测主细胞粗面内质网和线粒体结构改变情况，12000倍下观测壁细胞滑面内质网和线粒体结构的改变情况。

2.2.5统计学处理

数据以SPSS统计软件进行分析，组间差异比较采用两样本均数比较的t检验。

3 结果与分析

3.1 各化合物结构鉴定结果

化合物1：白色非晶型固体,m.p:156-160℃,ESIMSm/z:401[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.38(1H,m,H-6),3.84(1H,m,H-3),1.85,2.00(2H,m,H-16),1.82(2H,m,H-24),1.64,2.01(2H,m,H-4),1.54,1.85(2H,m,H-2),1.54(1H,m,H-25),1.45,1.55(2H,m,H-1),1.38(2H,m,H-23),1.37(1H,m,H-8),1.35(1H,m,H-20),1.33,1.39(2H,m,H-11),1.25,1.84(2H,m,H-7),1.25(1H,m,H-9),1.14,1.96(2H,m,H-12),1.14(H,m,H-17),1.08(H,m,H-14),1.07,1.55(2H,m,H-15),0.99(3H,s,H-19),0.95(3H,d,J=7.2 Hz,H-27),0.94(3H,d,J=7.2 Hz,H-26),0.94(3H,d,J=7.2 Hz,H-21),0.90(2H,m,H-22),0.70(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:131.1(C-5),128.9(C-6),67.7(C-3),55.8(C-14),55.4(C-17),45.8(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),39.8(C-12),39.1(C-24),36.7(C-22),36.7(C-1),35.5(C-20),35.5(C-10),32.9(C-2),30.1(C-7),30.8(C-8),29.5(C-25),28.3(C-16),24.2(C-23),24.1(C-15),21.2(C-11),20.0(C-26),19.1(C-27),18.4(C-19),17.8(C-21),12.1(C-18)。以上光谱数据与文献[14]报道的基本一致，因此，鉴定化合物1为(24S)-麦角甾-5-烯-3β-醇。

化合物2：白色针状结晶,m.p:137-138℃,ESIMSm/z:415[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.34(H,m,H-6),3.52(1H,m,H-3),2.27,1.68(2H,m,H-4),2.03,1.78(2H,m,H-7),1.68(2H,m,H-28),1.67,1.32(2H,m,H-1),1.65,1.28(2H,m,H-22),1.57,1.31(2H,m,H-12),1.56,1.81(2H,m,H-2),1.51,1.03(2H,m,H-15),1.44(1H,m,H-8),1.42(1H,m,H-9),1.26,1.52(2H,m,H-11),1.27(1H,m,H-20),1.25(3H,s,H-19),1.23,1.25(2H,m,H-23),1.17(3H,s,H-18),1.16,1.83(2H,m,H-16),1.15(1H,m,H-25),1.08(H,m,H-17),1.06(3H,s,H-6),1.05(H,m,H-14),1.00(3H,s,H-27),0.92(3H,s,H-21),0.91(3H,s,H-29),0.86(1H,m,H-24);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:140.8(C-5),121.7(C-6),71.7(C-3),56.8(C-4),51.2(C-9),50.1(C-17),45.8(C-14),42.3(C-24),42.3(C-13),39.8(C-10),36.5(C-22),33.9(C-20),33.7(C-1),32.4(C-2),31.9(C-25),31.9(C-7),31.8(C-26),31.6(C-8),28.3(C-16),28.2(C-23),26.1(C-15),24.3(C-12),23.1(C-28),21.2(C-11),21.1(C-18),19.1(C-21),18.3(C-19),12.0(C-29),11.9(C-27)。以上光谱数据与文献[15]报道的基本一致，因此，鉴定化合物2为β-谷甾醇。

化合物3：白色晶体,m.p:113-115℃,ESI-MSm/z:391[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.05(H,m,H-3),3.84(1H,d,J=2.2 Hz,H-6),2.25(2H,dd,J=13.3,11.4 Hz,H-4),1.94,1.08(2H,m,H-12),1.83,1.16(2H,m,H-16),1.68(H,m,H-8),1.67,1.53(2H,m,H-7),1.67,1.33(2H,m,H-1),1.56,1.80(2H,m,H-2),1.51,1.01(2H,m,H-15),1.46,1.31(2H,m,H-11),1.42(H,m,H-9),1.33,1.10(2H,m,H-22),1.27(3H,s,H-19),1.26(H,m,H-20),1.25,1.23(2H,m,H-23),1.17(1H,m,H-25),1.07(H,m,H-17),1.03(H,m,H-14),0.91(3H,d,J=6.9 Hz,H-21),0.87(2H,m,H-24),0.83(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.81(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.7(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-5),67.7(C-3),63.8(C-6),55.4(C-17),55.4(C-14),45.7(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),41.3(C-24),39.8(C-12),39.1(C-10),36.7(C-7),35.5(C-22),35.2(C-20),32.9(C-1),30.7(C-2),30.1(C-8),28.3(C-25),28.3(C-16),24.1(C-23),24.1(C-15),21.2(C-11),20.1(C-27),20.0(C-26),18.4(C-21),17.8(C-19),12.1(C-18)。以上光谱数据与文献[16]报道的基本一致，因此，鉴定化合物3为6β-氯胆甾烷-3β,5α-二醇。

化合物4：m.p:113-115℃,ESI-MSm/z:292.4451[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.08(1H,m,H-3),3.84(H,m,H-6),2.25,1.65(2H,m,H-4),1.99,1.17(2H,m,H-12),1.84,1.26(2H,m,H-16),1.83(1H,m,H-8),1.82,1.96(2H,m,H-7),1.66(2H,m,H-28),1.56,1.41(2H,m,H-1),1.53,1.09(2H,m,H-15),1.52,1.85(2H,m,H-2),1.39,1.34(2H,m,H-11),1.34(1H,m,H-20),1.31,1.01(2H,m,H-22),1.27(3H,s,H-19),1.24(1H,m,H-9),1.23(1H,m,H-25),1.13(1H,m,H-23),1.10(H,m,H-14),1.09(H,m,H-17),0.92(1H,m,H-24),0.90(3H,s,H-21),0.84(3H,t,J=7.2 Hz,H-29),0.82(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.80(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.68(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-5),67.7(C-3),63.8(C-6),56.1(C-14),55.4(C-17),45.9(C-24),45.8(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),39.9(C-12),39.1(C-10),36.2(C-20),35.5(C-7),33.9(C-22),32.9(C-1),30.7(C-2),30.2(C-8),29.2(C-28),28.2(C-16),26.1(C-23),24.1(C-15),23.1(C-25),21.2(C-11),19.8(C-27),19.0(C-26),18.7(C-21),18.4(C-19),12.2(C-18),12.0(C-29)。以上光谱数据与文献[17]报道的基本一致，因此，鉴定化合物4为5-羟基,6-氯-谷甾醇。

化合物5：黄色粉末,m.p:274-276℃,ESI-MSm/z:285[M-H]-;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:8.08(1H,d,J=8.6 Hz,H-6'),8.08(1H,d,J=8.6 Hz,H-2'),6.39(1H,brs,H-8),6.17(1H,brs,H-6),6.09(1H,d,J=8.6 Hz,H-5'),6.09(1H,d,J=8.6 Hz,H-3');13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:177.4(C-4),165.6(C-7),162.5(C-5),160.6(C-4'),158.3(C-9),148.1(C-2),137.1(C-3),130.7(C-6'),130.7(C-2'),123.8(C-1'),116.3(C-5'),116.3(C-3'),104.6(C-10),99.3(C-6),94.5(C-8)。以上光谱数据与文献[18]报道的基本一致，因此，鉴定化合物5为山奈酚。

化合物6：黄色粉末,m.p:328-330℃,ESI-MSm/z:285[M-H]-;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.34(1H,brs,H-2'),7.33(1H,dd,J=2.2 Hz,8.1 Hz H-6'),6.86(H,d,J=8.1 Hz,H-5'),6.44(1H,s,H-3),6.31(1H,d,J=1.44 Hz,H-8),6.10(1H,d,J=1.44 Hz,H-6);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:183.3(C-4),170.9(C-7),165.9(C-2),162.9(C-5),159.7(C-9),152.0(C-3'),147.4(C-4'),123.2(C-1'),120.1(C-6'),116.8(C-5'),113.7(C-2'),103.8(C-10),103.1(C-3),101.6(C-6),96.2(C-8)。以上光谱数据与文献[19]报道的基本一致，因此，鉴定化合物6为木犀草素。

化合物7：黄色粉末,m.p:310-312℃,ESI-MSm/z:303[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.73(1H,d,J=1.9 Hz,H-2'),7.63(1H,dd,J=8.5,1.9 Hz,H-6'),6.88(1H,d,J=8.5 Hz,H-5'),6.38(1H,d,J=1.7 Hz,H-8),6.18(1H,d,J=1.7 Hz,H-6);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:177.3(C-4),165.6(C-7),162.5(C-5),158.2(C-9),148.8(C-4'),148.0(C-2),146.2(C-3'),137.2(C-3),124.2(C-1'),121.7(C-6'),116.2(C-2'),116.0(C-5'),104.5(C-10),99.3(C-6),94.4(C-8)。以上光谱数据与文献[20]报道的基本一致，因此，鉴定化合物7为槲皮素。

化合物8：白色针状结晶,m.p:199-201℃,ESIMSm/z:155[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.46(1H,d,J=1.2 Hz,H-2),7.45(1H,dd,J=8.1,1.2 Hz,H-6),6.82(1H,d,J=8.1 Hz,H-5);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:170.3(C-7),151.6(C-4),146.1(C-3),123.9(C-6),123.1(C-1),117.8(C-2),115.8(C-5)。以上光谱数据与文献[21]报道的基本一致，因此，鉴定化合物8为原儿茶酸。

化合物9：无色油状物,ESI-MSm/z:434[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.05(1H,m,H-3),3.76(1H,brs,H-1),1.99,1.68(2H,m,H-4),1.99,1.18(2H,m,H-12),1.84,1.67(2H,m,H-2),1.66,1.44(2H,m,H-6),1.59(H,m,H-14),1.57(1H,m,H-25),1.55,1.39(2H,m,H-16),1.52(1H,m,H-8),1.47,1.09(2H,m,H-15),1.42,1.33(2H,m,H-7),1.42,0.97(2H,m,H-22),1.42,0.94(2H,m,H-23),1.41(1H,m,H-20),1.35,1.33(2H,m,H-11),1.25(1H,m,H-9),1.19(1H,m,H-24),1.18(3H,s,H-19),1.16(1H,m,H-5),1.10(H,m,H-17),0.91(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.84(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.78(3H,d,J=6.6 Hz,H-28),0.77(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.70(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-1),67.7(C-3),56.2(C-17),55.4(C-14),45.8(C-9),42.8(C-13),41.9(C-4),39.9(C-12),39.1(C-24),38.8(C-8),38.0(C-10),35.9(C-5),35.5(C-20),33.7(C-22),32.4(C-7),30.7(C-23),30.7(C-2),30.3(C-25),28.2(C-16),28.2(C-6),24.1(C-15),21.2(C-11),20.2(C-26),18.7(C-27),18.4(C-21),18.3(C-19),15.4(C-28),12.2(C-18)。以上光谱数据与文献[22]报道的基本一致，因此，鉴定化合物9为(24R)-甲基胆甾-3β,5α,6β-三醇。

化合物10：1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.06(1H,m,H-3),3.84(1H,m,H-6),2.25,1.68(2H,dd,m,H-4),1.93,1.09(2H,m,H-12),1.82,1.57(2H,m,H-2),1.82,1.17(2H,m,H-16),1.68(1H,m,H-8),1.67(2H,m,H-28),1.66,1.31(2H,m,H-1),1.53,1.68(2H,m,H-7),1.51,1.02(2H,m,H-15),1.45,1.32(2H,m,H-11),1.42(1H,m,H-9),1.33,1.11(2H,m,H-22),1.27(3H,s,H-19),1.26(1H,m,H-20),1.22,1.26(2H,m,H-23),1.16(1H,m,H-25),1.08(H,m,H-17),1.04(H,m,H-14),0.90(3H,d,J=6.9 Hz,H-21),0.86(1H,m,H-24),0.84(3H,t,J=7.2 Hz,H-29),0.83(3H,d,J=6.9 Hz,H-27),0.81(3H,d,J=6.9Hz,H-26),0.70(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:76.9(C-5),67.7(C-6),63.8(C-3),56.1(C-17),55.4(C-14),45.8(C-24),45.8(C-9),42.7(C-13),41.9(C-4),39.9(C-12),39.1(C-10),36.2(C-22),36.2(C-20),35.5(C-7),33.9(C-1),33.0(C-2),30.7(C-8),30.1(C-28),29.1(C-16),28.2(C-25),26.1(C-15),24.1(C-23),23.1(C-11),21.2(C-26),19.8(C-21),19.0(C-27),18.4(C-19),12.2(C-18),12.0(C-29)。以上光谱数据与文献[23]报道的基本一致，因此，鉴定化合物10为3,5,6-三羟基-谷甾烷。

近年来，我国高层建筑抗震设计实例中也广泛应用基于性能考虑的抗震设计方法，且目前已取得了显著的成绩，这对提高我国高层建筑的抗震设计的可靠性有很大的推动。随着我国建筑行业的不断发展，大量研究工作的不断深入和工程实例的不断应用，基于性能考虑的抗震设计方法也会变得日趋完善，我国高层建筑的抗震能力又会上到一个新的台阶。

化合物11：白色结晶,m.p:240-241℃,ESI-MSm/z:430[M-H2O]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:4.32(1H,m,H-3),3.95(1H,m,H-6),2.04,1.75(2H,m,H-4),1.90,1.08(2H,m,H-12),1.84,1.18(2H,m,H-16),1.82,1.55(2H,m,H-2),1.69(2H,m,H-28),1.68(1H,m,H-8),1.66,1.54(2H,m,H-7),1.65,1.30(2H,m,H-1),1.50,1.00(2H,m,H-15),1.48,1.30(2H,m,H-11),1.41(1H,m,H-9),1.32,1.26(2H,m,H-22),1.28(3H,s,H-19),1.27,1.22(2H,m,H-23),1.25(1H,m,H-20),1.15(1H,m,H-25),1.09(H,m,H-17),1.01(H,m,H-14),0.91(3H,d,J=6.9 Hz,H-21),0.85(1H,m,H-24),0.84(3H,t,J=7.2 Hz,H-29),0.83(3H,d,J=6.9 Hz,H-26),0.81(3H,d,J=6.9Hz,H-27),0.68(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:84.3(C-5),75.7(C-6),67.9(C-3),56.1(C-17),55.8(C-14),46.1(C-24),45.8(C-9),42.7(C-13),39.8(C-7),39.8(C-4),36.2(C-10),34.1(C-12),33.9(C-20),33.7(C-2),30.5(C-28),30.5(C-22),30.4(C-1),29.2(C-25),28.2(C-8),26.1(C-16),24.1(C-15),23.1(C-11),21.3(C-23),19.8(C-26),19.1(C-27),18.8(C-21),18.2(C-19),12.2(C-29),12.0(C-18)。以上光谱数据与文献[24]报道的基本一致，因此，鉴定化合物11为(24S)-24-乙基胆甾-3β,5a,6a-三醇。

化合物12：淡黄色粉末,m.p:232-234℃,ESI-MSm/z:162[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:8.09(1H,d,J=7.5 Hz,H-4),7.94(1H,s,H-2),7.42(1H,d,J=7.5 Hz,H-7),7.28(1H,m,H-6),7.27(1H,m,H-5);13CNMR(CDCl3,150 MHz)δ:170.5(C-10),137.8(C-9),133.7(C-2),126.2(C-8),123.3(C-5),122.1(C-4),115.7(C-7),111.5(C-6),108.8(C-3)。以上光谱数据与文献[25]报道的基本一致，因此，鉴定化合物12为3-吲哚甲酸。

化合物13：淡黄色粉末,m.p:112-116℃,ESI-MSm/z:123[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:9.86(1H,s,H-7),7.80(1H,d,J=8.3 Hz,H-6),7.80(1H,d,J=8.3 Hz,H-2),6.96(1H,d,J=8.3 Hz,H-5),6.96(1H,d,J=8.3 Hz,H-3);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:191.1(C-7),165.8(C-4),132.4(C-6),132.4(C-2),130.2(C-1),116.0(C-5),116.0(C-3)。以上光谱数据与文献[26]报道的基本一致，因此，鉴定化合物13为4-对羟基苯甲醛。

化合物14：无色液体,m.p:18-20℃,ESI-MSm/z:242[M+Na]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:3.66(3H,s,H-15),2.29(2H,t,J=7.6 Hz,H-2),1.63(2H,m,H-13),1.26(20H,brs,H-3-12),0.88(3H,t,J=6.8 Hz,H-14);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:174.3(C-1),51.4(C-15),34.1(C-2),32.0(C-12),25.0(C-3),29.7(C-11),29.7(C-10),29.7(C-9),29.6(C-8),29.5(C-7),29.4(C-6),29.3(C-5),29.2(C-4),22.7(C-13),14.1(C-14)。以上光谱数据与文献[27]报道的基本一致，因此，鉴定化合物14为肉豆蔻酸甲酯。

化合物15：无色油状液体,ESI-MSm/z:242[MH]-;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.36(2H,m,H-12,13),5.36(2H,m,H-9,10),2.78(2H,dd,J=6.4,6.6 Hz,H-11),2.30(2H,t,J=7.6 Hz,H-2),2.05(2H,m,H-14),2.05(2H,m,H-8),1.25(6H,brs,H-15-17),1.25(10H,brs,H-3-7),0.89(3H,t,J=6.7 Hz,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:174.3(C-1),130.2(C-13),130.1(C-9),128.1(C-12),128.0(C-10),34.1(C-2),31.6(C-16),29.7(C-8),29.6(C-7),29.4(C-15),29.2(C-6),29.2(C-5),29.1(C-4),27.2(C-14),25.7(C-11),24.9(C-3),22.6(C-17),14.1(C-18)。以上光谱数据与文献[28]报道的基本一致，因此，鉴定化合物15为亚油酸。

化合物16：白色无定形粉末,ESI-MSm/z:209[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:7.20(1H,d,J=16.4 Hz,H-7),6.11(1H,d,J=16.4 Hz,H-8),4.01(1H,m,H-3),2.44(2H,dd,J=16.4,8.0 Hz,H-4eq),2.30(3H,s,H-10),2.08(2H,dd,J=16.4,10.0 Hz,H-4ax),1.79(2H,ddd,J=12.0,3.9,2.0 Hz,H-2eq),1.78(3H,s,H-13),1.50(2H,t,J=12.0 Hz,H-2ax),1.12(3H,s,H-12),1.10(3H,s,H-11);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:198.6(C-9),142.4(C-7),135.7(C-6),132.4(C-8),132.3(C-5),64.6(C-3),48.4(C-2),42.8(C-4),36.9(C-1),30.1(C-11),28.6(C-12),27.3(C-10),21.6(C-13)。以上光谱数据与文献[29]报道的基本一致，因此，鉴定化合物16为(+)-3-羟基-β-紫罗兰酮。

化 合 物17：ESI-MSm/z:415[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.35(H,brs,H-6),4.96,4.82(2H,brs,H-26),3.52(1H,m,H-3),2.00,1.84(2H,m,H-16),1.99,1.63(2H,m,H-4),1.99,1.16(2H,m,H-12),1.84,1.55(2H,m,H-2),1.84,1.25(2H,m,H-7),1.74(3H,s,H-27),1.56,1.44(2H,m,H-1),1.54,1.06(2H,m,H-15),1.40(2H,m,H-23),1.38,1.34(2H,m,H-11),1.38(1H,m,H-20),1.38(1H,m,H-8),1.30(3H,s,H-28),1.25(1H,m,H-9),1.14(H,m,H-17),1.08(1H,m,H-14),1.00(3H,s,H-19),0.92(3H,d,J=6.36 Hz,H-21),0.88(2H,m,H-22),0.67(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:150.6(C-25),140.8(C-5),121.7(C-6),109.5(C-26),75.6(C-24),71.8(C-3),56.8(C-14),55.8(C-17),50.1(C-9),42.3(C-22),42.3(C-13),42.3(C-4),39.8(C-12),37.3(C-23),36.5(C-1),35.9(C-10),35.8(C-20),31.9(C-7),31.9(C-2),31.7(C-8),29.7(C-16),29.6(C-28),24.3(C-15),21.1(C-11),19.4(C-27),19.4(C-19),18.8(C-21),11.8(C-18)。以上光谱数据与文献[30]报道的基本一致，因此，鉴定化合物17为麦角甾-5,25-二烯-3β,24ζ-二醇。

化合物18：白色粉末,ESI-MSm/z:295[M+H]+;1HNMR(CDCl3,600 MHz)δ:5.62(1H,m,H-13),5.62(1H,m,H-10),5.51(1H,m,H-12),5.51(1H,m,H-9),3.67(3H,s,H-1'),2.30(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),1.25-1.61(8H,m,H-14-17),1.25-1.61(12H,m,H-3-8),0.89(3H,t,J=7.0 Hz,H-18);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:174.3(C-1),135.1(C-13),134.8(C-9),128.2(C-12),128.0(C-10),51.5(C-1'),34.1(C-16),34.1(C-2),29.1(C-15),29.1(C-7),29.0(C-5),28.9(C-6),28.9(C-4),24.9(C-14),24.9(C-8),24.9(C-3),22.5(C-17),22.5(C-11),14.0(C-18)。以上光谱数据与文献[31]报道的基本一致，因此，鉴定化合物18为十八烷二烯酸甲酯。

化合物19：黄色粉末,m.p:253-254℃,ESI-MSm/z:511[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:6.88(1H,ddd,J=9.96,4.7,2.5 Hz,H-3),5.81(1H,dd,J=10.0,2.1 Hz,H-2),5.59(1H,d,J=5.8 Hz,H-6),4.57(1H,t,J=3 Hz,H-22),3.62(2H,d,J=13.0 Hz,H-27),3.28(2H,brs,J=23.3 Hz,H-4b),2.93(1H,m,H-9),2.87(H,d,J=4.0 Hz,H-25),2.86(1H,s,H-16),2.18(2H,m,H-12),2.15(2H,m,H-11),2.15(H,m,H-8),2.10(2H,dd,J=23.3,4.7 Hz,H-4a),1.95(2H,brs,H-23),1.93(2H,m,H-7),1.78(3H,s,H-21),1.16(3H,s,H-28),1.09(3H,s,H-19);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:209.8(C-15),203.0(C-1),172.3(C-18),167.8(C-26),146.7(C-3),136.0(C-5),127.4(C-2),123.9(C-6),106.8(C-14),81.2(C-17),80.8(C-20),78.7(C-13),76.8(C-22),61.1(C-27),54.6(C-16),52.4(C-10),49.9(C-25),40.7(C-8),33.6(C-9),32.8(C-4),31.9(C-23),31.0(C-24),26.1(C-12),24.9(C-28),24.9(C-11),24.6(C-7),22.3(C-21),17.2(C-19)。以上光谱数据与文献[32]报道的基本一致，因此，鉴定化合物19为酸浆苦味素B。

化合物20：无色针状晶体,m.p:114-115℃,ESIMSm/z:247[M+Na]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.90(1H,brs,H-4),5.88(1H,dd,J=15.7,5.1 Hz,H-8),5.79(1H,d,J=15.7 Hz,H-7),4.39(1H,m,H-9),2.22,2.43(2H,d,J=16.8 Hz,H-2),1.90(3H,brs,H-13),1.29(3H,d,J=6.4 Hz,H-10),1.01(3H,s,H-12),1.00(3H,s,H-11);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:198.7(C-3),163.9(C-5),135.7(C-7),129.0(C-8),126.6(C-4),79.0(C-6),67.9(C-9),49.7(C-2),41.2(C-1),24.0(C-12),23.7(C-10),22.9(C-11),19.1(C-13)。以上光谱数据与文献[33]报道的基本一致，因此，鉴定化合物20为布卢门醇A。

化合物21：白色晶体,mp 211-213℃,ESI-MSm/z:179[M-H]-;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:7.55(1H,d,J=15.9 Hz,H-7),7.06(1H,d,J=1.2Hz,H-2),6.95(1H,dd,J=8.1,1.2 Hz,H-6),6.80(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),6.24(1H,d,J=15.9 Hz,H-8);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:171.1(C-9),149.5(C-4),147.1(C-7),146.8(C-3),127.8(C-1),122.9(C-6),116.5(C-8),115.6(C-5),115.2(C-2)。以上光谱数据与文献[34]报道的基本一致，因此，鉴定化合物21为咖啡酸。

化合物22：白色晶体，m.p:330-332℃,ESI-MSm/z:409[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:6.02(H,s,H-12),4.86(H,s,H-10),4.85(1H,d,J=7.2 Hz,H-2),4.78(1H,t,J=7.6 Hz,H-6),3.12(1H,q,J=7.2 Hz,H-14),2.79(2H,dd,J=15.5,7.2 Hz,H-1),2.20(2H,m,H-7),2.09(2H,dd,J=15.5,8.2 Hz,H-1),1.90(1H,dd,J=14.0,4.8 Hz,H-8),1.24(3H,d,J=7.2 Hz,H-16),1.11(9H,s,H-18-20);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:178.9(C-15),175.9(C-11),173.4(C-13),111.7(C-12),102.4(C-4),89.8(C-6),88.0(C-5),87.8(C-2),70.4(C-10),70.2(C-3),68.9(C-9),50.6(C-8),42.2(C-14),38.0(C-7),37.4(C-1),33.3(C-17),29.6(C-18-20),8.6(C-16)。以上光谱数据与文献[35]报道的基本一致，因此，鉴定化合物22为银杏内酯A。

化合物23：白色晶体,m.p:295-297℃,ESI-MSm/z:425[M+H]+;1H-NMR(MeOD,600 MHz)δ:6.07(H,s,J=7.0 Hz,H-12),5.39(1H,d,J=4.1 Hz,H-6),5.10(H,s,H-10),4.57(1H,d,J=7.8 Hz,H-2),4.18(1H,d,J=7.8 Hz,H-1),3.02(1H,q,H-14),2.25(2H,dd,J=13.7,4.8 Hz,H-α),2.10(2H,dd,J=14.0,4.3 Hz,H-β),1.90(1H,dd,J=14.3,4.7 Hz,H-8),1.22(3H,d,J=7.1 Hz,H-16),1.12(9H,s,H-18-20);13C-NMR(MeOD,150 MHz)δ:178.4(C-15),175.2(C-11),172.7(C-13),111.9(C-12),100.2(C-4),93.3(C-2),84.7(C-3),80.7(C-6),75.5(C-1),73.5(C-5),70.7(C-10),69.2(C-9),50.5(C-8),43.3(C-14),38.2(C-7),33.3(C-17),29.5(C-18-20),8.1(C-16)。以上光谱数据与文献[35]报道的基本一致，因此，鉴定化合物23为银杏内酯B。

化 合 物24：ESI-MSm/z:397[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.35(1H,brd,H-6),5.06,5.07(2H,d,J=1.1 Hz,H-28),4.94,4.96(2H,brs,H-26),3.53(H,m,H-3),2.23,1.70(2H,m,H-4),1.93(2H,m,H-12),1.90(3H,s,H-27),1.84,1.58(2H,m,H-2),1.82,1.18(2H,m,H-16),1.68,1.53(2H,m,H-7),1.61(H,m,H-8),1.60,1.32(2H,m,H-1),1.50,1.02(2H,m,H-15),1.45,1.32(2H,m,H-11),1.41(H,m,H-9),1.32,1.1(2H,m,H-22),1.26,1.21(2H,m,H-23),1.26(H,m,H-20),1.08,1.05(H,m,H-14),1.08(H,m,H-17),1.01(3H,s,H-19),0.97(3H,d,J=6.56 Hz,H-21),0.68(3H,s,H-18);13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:142.8(C-24),140.8(C-5),121.7(C-6),112.4(C-28),111.7(C-26),71.8(C-3),56.8(C-14),55.9(C-17),50.1(C-9),42.4(C-13),42.3(C-4),39.8(C-12),37.3(C-1),36.5(C-10),36.0(C-20),35.5(C-25),31.9(C-23),31.9(C-8),31.7(C-7),30.5(C-2),29.7(C-22),28.2(C-16),24.3(C-15),21.2(C-27),21.1(C-11),19.4(C-19),18.7(C-21),11.9(C-18)。以上光谱数据与文献[36]报道的基本一致，因此，鉴定化合物24为麦角甾-5,24,25-三烯-3β-二醇。

化 合 物25：ESI-MSm/z:385[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.36(1H,brd,H-6),5.10,4.78(2H,brs,H-27),3.53(H,m,H-3),2.22,1.68(2H,m,H-4),2.21(2H,m,H-25),1.91,1.07(2H,m,H-12),1.84,1.17(2H,m,H-16),1.82,1.57(2H,m,H-2),1.69,1.53(2H,m,H-7),1.61,1.33(2H,m,H-1),1.61(H,m,H-8),1.51,1.03(2H,m,H-15),1.46,1.31(2H,m,H-11),1.43(H,m,H-9),1.32,1.12(2H,m,H-22),1.26(H,m,H-20),1.22,1.24(2H,m,H-23),1.09(H,m,H-17),1.05(H,m,H-14),1.01(3H,s,H-19),0.97(3H,d,J=6.52Hz,H-21),0.78(3H,t,J=6.2 Hz,H-26),0.69(3H,s,H-18);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:155.8(C-24),139.7(C-5),120.7(C-6),108(C-26),105.6(C-27),70.8(C-3),55.7(C-14),54.9(C-17),49.1(C-9),41.3(C-13),41.3(C-4),38.7(C-12),36.2(C-1),35.5(C-10),34.9(C-20),34.5(C-25),30.9(C-23),30.9(C-7),30.6(C-2),28.7(C-22),28.3(C-8),27.2(C-16),23.3(C-15),20.1(C-11),18.4(C-19),17.8(C-21),13.1(C-18)。以上光谱数据与文献[37]报道的基本一致，因此，鉴定化合物25为印度小酸浆醇A。

化合物26：浅黄色油状液体,mp 202-204℃,ESIMS m/z:297[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.08(1H,m,H-2),5.07(2H,m,H-1),2.20(2H,m,H-4),1.48(3H,s,H-20),1.47,0.99(19H,m,H-5-15),0.78(12H,m,H-16-19);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:142.0(C-3),113.5(C-2),49.0(C-1),39.0(C-4),38.9(C-14),38.3(C-10),36.5(C-6),36.4(C-12),36.2(C-8),31.8(C-11),31.7(C-7),28.7(C-15),27.0(C-5),23.8(C-13),23.4(C-9),21.7(C-17),21.6(C-16),20.3(C-18),20.1(C-18),18.7(C-18)。以上光谱数据与文献[38]报道的基本一致，因此，鉴定化合物26为叶绿醇。

化合物27：白色蜡状物,mp 48-50℃,ESI-MSm/z:339[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:1.21(44H,brs,H-2-23),0.79(3H,m,H-24),0.79(3H,m,H-1);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:30.9(C-13),30.9(C-12),28.7(C-21),28.7(C-20),28.7(C-19),28.7(C-18),28.7(C-17),28.7(C-16),28.7(C-15),28.7(C-14),28.3(C-22),28.3(C-11),28.3(C-10),28.3(C-9),28.3(C-8),28.3(C-7),28.3(C-6),28.3(C-5),28.3(C-4),28.3(C-3),21.7(C-23),21.7(C-2),13.1(C-24),13.1(C-1)。以上光谱数据与文献[39]报道的基本一致，因此，鉴定化合物27为正二十四烷。

化合物28：无色油状物,ESI-MSm/z:285[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:3.57(3H,s,H-19),2.21(2H,t,J=7.6 Hz,H-2),1.53(2H,m,H-3),1.16(28H,m,H-4-17),0.78(3H,t,J=7.0 Hz,H-18);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.4(C-1),51.4(C-19),34.1(C-2),31.9(C-16),29.7(C-14),29.7(C-13),29.7(C-12),29.7(C-11),29.7(C-10),29.7(C-9),29.7(C-8),29.7(C-7),29.6(C-15),29.5(C-6),29.3(C-5),29.2(C-4),25.0(C-3),22.6(C-17),14.1(C-18)。以上光谱数据与文献[40]报道的基本一致，因此，鉴定化合物28为(甲基(Z)-10-(2-己基环丙烷基)-辛酸酯。

化合物29：无色油状,mp 82-84℃,ESI-MSm/z:319[M+Na]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.34(1H,m,H-2),4.08(2H,dd,J=7.0 Hz,H-1),3.42(3H,s,H-21),1.92(2H,t,J=7.1 Hz,H-4),1.60(3H,s,H-20),1.47,0.99(19H,m,H-5-15),0.78(12H,m,H-16-19);13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ:140.3(C-3),123.1(C-2),59.4(C-1),50.9(C-21),39.9(C-14),39.4(C-4),37.4(C-10),37.4(C-8),37.3(C-12),36.7(C-6),32.8(C-7),32.7(C-11),28.0(C-15),25.1(C-5),24.8(C-13),24.5(C-9),22.7(C-17),22.6(C-16),19.8(C-19),19.7(C-18),16.2(C-20)。以上光谱数据与文献[41]报道的基本一致，因此，鉴定化合物29为反式植醇。

化合物30：无色油状物,m.p:253-254℃,ESI-MSm/z:479[M+H]+;1H-NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.07(H,m,H-2'),2.23(2H,t,J=7.0 Hz,H-2),2.15(2H,m,H-4'),1.59(2H,m,H-7),1.53(3H,m,H-11),1.43(2H,m,H-9),1.38(H,m,H-8),1.38(H,m,H-6),1.28(2H,m,H-3),1.25(20H,s,H-5'-14'),1.23(2H,m,H-15'),1.21(2H,m,H-4),1.14(2H,s,H-1'),1.13(2H,m,H-5),1.06(2H,m,H-10),0.80(3H,d,J=6.6 Hz,H-15),0.78(3H,t,J=6.8 Hz,H-16'),0.77(3H,t,J=6.8 Hz,H-14),0.77(3H,d,J=6.6 Hz,H-12),0.76(3H,d,J=6.6 Hz,H-13);13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.4(C-1),143.0(C-3'),114.6(C-2'),77.4(C-1'),40.0(C-4'),39.4(C-15'),37.4,29.2(C-5'-14'),37.3(C-9),36.6(C-10),34.1(C-2),32.8(C-8),32.8(C-6),31.9(C-4),27.9(C-11),24.8(C-7),24.5(C-3),22.7(C-14),22.6(C-5),21.1(C-13),19.8(C-12),19.7(C-15),14.1(C-16')。以上光谱数据与文献[42]报道的基本一致，因此，鉴定化合物30为balansenate I(6,8,11-三甲基月桂酸-(2E)-3-甲基十六碳-2-乙酯)。

3.2 粗分片段抗胃溃疡活性筛选

结果见表1。9组粗分片段中，Fr G、Fr K和Fr OPQR三组药物表现出显著的抗胃溃疡活性(P＜0.05,P＜0.01)，抑制率分别为55.3%、74.5%和93.8%，与之相比较，法莫替丁组的抑制率为89.3%；其余6组均未显示出明显的抗胃溃疡作用，与控制组相比结果无统计学意义。实验结果表明，Fr G、Fr K和Fr OPQR三个粗分片段具有较强的胃黏膜保护作用。

表1 不同粗分片段对乙醇诱导大鼠胃溃疡损伤的作用（平均值±SEM.n=6）

3.3 酸浆苦味素B和木犀草苷抗小鼠胃溃疡面积的测定

结果表明，酸浆苦味素B和木犀草苷三个剂量组均能显著减少胃溃疡面积，且随剂量增加作用增强，强弱依次为酸浆苦味素B高剂量＞酸浆苦味素B中剂量＞木犀草苷高剂量＞法莫替丁。其中，酸浆苦味素B 25 mg/kg剂量组对胃溃疡的抑制率高达74.6%，相比较阳性药物法莫替丁40 mg/kg对胃溃疡的抑制率为61.8%，说明酸浆苦味素B具有较强的抗胃溃疡活性，结果见表2。

表2 酸浆苦味素B和木犀草苷对乙醇诱导小鼠胃溃疡损伤的作用（平均值±SEM.n=6）

3.4 透射电镜观察主细胞和壁细胞超微结构

3.4.1主细胞超微结构变化

在8000倍透射电镜下（见图1），正常组主细胞未见内质网扩张或间隙增宽，线粒体未见肿胀；模型组主细胞内质网明显扩张且间隙增宽，线粒体有明显肿胀；酸浆苦味素B低剂量内质网有扩张，间隙增宽但明显低于模型组，线粒体有肿胀，中剂量内质网未见扩张，间隙有轻微增宽，线粒体轻微肿胀，高剂量内质网未见扩张，未见间隙扩展，线粒体也无肿胀。实验结果表明，酸浆苦味素B可改善乙醇刺激引起的主细胞超微结构改变。

图1 酸浆苦味素B对乙醇诱导小鼠胃黏膜主细胞超微结构改变的影响

3.4.2壁细胞超微结构变化

在12000倍透射电镜下（见图2），正常组壁细胞线粒体未见肿胀，内质网丰富无扩展；酸浆苦味素B低剂量组线粒体有肿胀，内质网有扩张，中剂量组线粒体稍有肿胀，内质网轻微扩张，高剂量组线粒体有轻微肿胀，内质网未见扩张；模型组内质网扩张，线粒体肿胀。实验结果表明，酸浆苦味素B可改善乙醇刺激引起的壁细胞超微结构改变。

图2 酸浆苦味素B对乙醇诱导小鼠胃黏膜壁细胞超微结构改变的影响

4 讨论

本课题组前期研究发现，酸浆乙酸乙酯部位具有显著的生物活性，为探索其药效物质基础，本实验继续对酸浆的化学成分进行深入研究。通过分离纯化，获得30个化合物，包括11个甾体化合物，4个萜类化合物，3个黄酮类化合物，8个脂肪酸类化合物和4个苯环衍生物。其中化合物3、4、12、24和30为首次从酸浆中分离得到。

本实验对粗分片段进行活性筛选时，选择15个片段中重量较大的9个片段（＞5 g）进行实验。结果显示，Fr G、Fr K和Fr OPQR三个粗分片段具有显著的抗胃溃疡活性。通过分析发现，山奈酚、槲皮素和木犀草苷等黄酮类物质均来自Fr G片段，此前已有文献报道山奈酚和槲皮素显著的抗炎[43-46]、抗胃溃疡[47-48]和抗幽门螺旋杆菌[49]活性，以及来源于蛇根草（Ophiorrhiza mungosLinn.）的木犀草苷显著的抗胃溃疡作用[50]，因此，Fr G片段所含的黄酮类物质可能是其抗胃溃疡活性的物质基础；对于Fr K片段，其中分离出大量的酸浆苦味素B（约68 mg），初步测定其含量约为13.61 mg·g-1；将Fr O、Fr P、Fr Q和Fr R四个片段合并为片段Fr OPQR，因其含有大量的色素，并未对其进行系统的分离纯化，但通过薄层色谱和LC-MS测定发现，除了大量色素外，Fr OPQR还含有大量的酸浆苦味素B成分，初步测定其含量约为39.68 mg·kg-1。具有显著抗胃溃疡活性的Fr K和Fr OPQR两个片段均检测出大量的酸浆苦味素B，且通过文献报道发现，酸浆苦味素B具有显著的体内外抗炎作用[51-52]，因此，推测酸浆苦味素B可能是两个片段抗胃溃疡活性的物质基础。通过对活性片段的分析，推测槲皮素、山奈酚、木犀草苷和酸浆苦味素B均可能是酸浆乙酸乙酯部位抗胃溃疡活性的物质基础。由于Fr G片段中槲皮素和山奈酚产率太低，不足以进行体内动物实验，因此，选择木犀草苷和酸浆苦味素B进行小鼠体内抗胃溃疡活性测定。

通过活性追踪，发现酸浆苦味素B是酸浆发挥药效的物质基础之一，具有较强的抗胃溃疡活性。酸浆苦味素（physalins）是存在于酸浆属植物锦灯笼及其他相近茄科植物中的一类高氧化水平的13，14-裂环-16,24-环麦角甾烷类化合物，其占了酸浆所含甾体类化合物的90%以上。1969年，Matsuura等[53]从酸浆中分离得第一个酸浆苦味素，命名为酸浆苦味素A，到目前为止，已从酸浆中分离得到50种physalins[11]。其中，酸浆苦味素B是酸浆苦味素类最为常见的化合物。现代药理学研究表明，酸浆苦味素B作为酸浆的主要活性物质，具有显著的药理作用，如抗肿瘤[54]、抗癌[55]、抗炎[56]、抗菌[57]、抗疟疾[58]和镇痛[59]等。其抗胃溃疡作用，目前国内外均未见相关文献报道。本研究为深入研究和开发酸浆的药用价值及资源的充分利用提供了理论依据。