结直肠腺瘤合并Hp阳性者血清GAS、炎症因子和肠道菌群分析

冯娟，王晶，陈安

1.西安凤城医院消化内科，陕西 西安 710018；2.空军军医大学第二附属医院普通外科，陕西 西安 710038

结直肠腺瘤是指在结直肠表面向肠腔内突出的各类隆起性病变，属于良性病变。结直肠腺瘤被公认为癌前病变，对于其发生发展过程及机制的研究是预防结直肠癌的重要途径。近年来，多项研究显示幽门螺杆菌(Hp)感染与结直肠腺瘤有较为密切的关系[1-2]。此外，相关研究指出肠道菌群与免疫反应参与了结直肠肿瘤的发生与发展[3-4]。因此，对Hp感染及炎症因子水平和肠道菌群状况进行分析，进而探讨结直肠腺瘤发展成为结直肠癌的机制，成为临床研究的重点[5]。本研究主要分析结直肠腺瘤合并Hp阳性者的血清胃泌素(GAS)、炎症因子水平[白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]和肠道菌群的变化情况，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2019年6月至2021年12月西安凤城医院消化内科收治的125例结直肠腺瘤患者作为研究对象。纳入标准：(1)临床有完整的资料；(2)病理学诊断资料与检测结果明确者；(3)通过胃镜检查确诊为慢性胃炎者；(4)肿瘤部位在升结肠的高分化结肠癌Ⅱ期者；(5)手术前后均没有使用过肠道微生态制剂与抗生素者；(6)无严重疾病者。排除标准：(1)年龄＜18岁者；(2)妊娠期或哺乳期的妇女；(3)存在自身免疫疾病者；(4)曾接受过Hp根除治疗者；(5)克罗恩病癌变者；(6)近4周服用过H2受体拮抗剂等会对检查结果产生影响者；(7)有胃肠道手术史者。按照是否伴有Hp感染分组，其中50例合并Hp阳性者纳入研究组，75例未合并Hp阳性患者纳入对照组。

1.2 检测方法(1)Hp检测：以14C尿素呼气试验结果为标准，其中结果为阳性时即为Hp感染。具体标准为：测量结果≥100 dpm/mmol为阳性，＜100 dpm/mmol为阴性。(2)各炎性细胞因子水平检测：抽取患者5 mL外周静脉血，不做抗凝处理，在3 h内在室温下进行10 min的离心处理，收集血清，-80℃温度设置下保存在冰箱中。采用ELISA法，以3 000 r/min的离心速度进行20 min，收集上清液，保存待测。选择ELISA试剂盒进行操作，计算血清IL-6、IL-1、IL-10和TNF-α水平。(3)血清GAS水平检测：CUSABIO的ELISA试剂盒检测血清GAS水平。(4)粪便中菌群含量检测：收集3～5 g粪便标本，保存在-80℃超低温冰箱中。按照TIANampStool DNA Kit说明书通过Real-time PCR法检测，提取菌株基因组DNA，结合乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠埃希菌基因序列对特异性PCR引物序列进行设定，通过Real-time PCR反应定量检测乳酸杆菌等细菌水平。

1.3 统计学方法应用SPSS20.00统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的一般资料比较两组患者的性别、体质量指数、糖尿病病史、年龄、饮酒率、高血压病史、吸烟率等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 两组患者的一般资料比较[±s，例(%)]

表1 两组患者的一般资料比较[±s，例(%)]

组别研究组对照组χ2/t值P值例数50 75男/女21(42.00)/29(58.00)32(42.67)/43(57.33)0.301 0.614年龄(岁)60.12±13.75 59.64±14.15 0.625 0.243吸烟17(34.00)26(34.67)3.412 0.078饮酒15(30.00)23(30.67)3.605 0.056体质量指数(kg/m2)24.13±5.72 53.98±6.11 2.971 0.735高血压22(44.00)30(40.00)3.537 0.068糖尿病12(24.00)15(20.00)3.659 0.061高血脂14(28.00)15(20.00)1.078 0.299结肠癌家族史9(18.00)8(10.67)1.373 0.241

2.2 两组患者的血清GAS及炎性细胞因子水平比较研究组患者的血清IL-1、IL-6和TNF-α水平明显低于对照组，GAS、IL-10水平明显高于对照组，差异均有统计学有意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组患者的血清GAS及各炎性细胞因子水平比较(±s)

表2 两组患者的血清GAS及各炎性细胞因子水平比较(±s)

组别研究组对照组t值P值例数50 75 GAS(pg/mL)65.87±9.32 51.05±4.94-11.432 0.014 IL-1(ng/L)206.17±54.98 315.09±87.24-2.597 0.012 IL-6(ng/L)40.56±11.94 101.72±31.84-2.701 0.004 IL-10(ng/L)110.93±25.78 86.74±18.51-2.931 0.005 TNF-α(pg/mL)403.65±104.96 527.59±139.87-2.804 0.006

2.3 两组患者的肠道菌群含量比较两组患者粪便中大肠埃希菌、嗜酸乳杆菌含量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；研究组患者粪便中长双歧杆菌的含量明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 两组患者的肠道菌群含量比较(±s，个/100 g)

表3 两组患者的肠道菌群含量比较(±s，个/100 g)

组别研究组对照组t值P值例数50 75嗜酸乳杆菌11.72±2.96 9.24±0.73-2.107 0.054大肠埃希菌9.31±2.59 10.42±1.02-0.174 0.865长双歧杆菌11.67±1.16 10.43±0.54-2.075 0.037

3 讨论

近年来，随着人民生活方式的变化、微生物的传播、饮食方式的改变，我国结直肠癌发病率呈现逐年上升趋势[6]。目前，腺瘤学说在临床上广为流传，有部分学者的研究发现结直肠腺瘤可能与结直肠癌的发生有较为密切的联系[7-9]。因此，研究结直肠腺瘤发生、发展的危险因素，对结直肠癌的早期预防与治疗具有重要意义。

相关研究表明，腺瘤患者的Hp感染率明显高于健康者，HP感染会不同程度上对患者腺瘤的大小与数量产生影响[10-11]。HP感染的发病率在很大程度上提高了结直肠腺瘤的发生率[12-13]。相关研究表明，结直肠肿瘤与血清高GAS水平有关，感染HP后患者的血清GAS水平会出现不同程度的升高，从而对结直肠腺瘤的发生发展产生影响[14]。此外，研究还发现肠道微生物与免疫反应在结直肠腺瘤的发生与发展中扮演着至关重要的角色[15]。本次通过对研究对象血清中炎性细胞因子、粪便中的肠道菌群含量进行测量，结果发现结直肠腺瘤合并Hp阳性患者的IL-10、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌水平明显偏低，IL-1、IL-6、TNF-α和大肠埃希菌的水平明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，与以往相关研究的结果一致。表明Hp感染对结直肠腺瘤患者长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、大肠埃希菌等粪便中肠道菌群和血清中IL-1、IL-6、IL-10及TNF-α等炎性细胞因子影响明显。但本研究病例较少，病例来源单一，仍存在一定的局限性。因此，后期可通过扩大检测细胞因子、增加样本量、提高菌群的种类进一步探讨Hp感染对结直肠腺瘤患者肠道菌群含量以及炎性细胞因子水平的影响，以进一步研究Hp感染在结直肠腺瘤发病机制中的作用。

综上所述，结直肠腺瘤合并Hp阳性的血清GAS水平升高，IL-10、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌水平明显降低，IL-1、IL-6、TNF-α和大肠埃希菌的水平明显升高，可为结直肠癌的早期预防和治疗提供指导。