木屑培养基对传代金针菇菌种的复壮效果探究

王 雷 刘 晖 景雪梅 苟登科 淡媛媛 刘 亮 陶 军

（天水众兴菌业科技股份有限公司，甘肃 天水 741000）

金针菇（Flammulina velutipes）又名构菌、冬菇、毛柄金钱菌等[1,2]，属木腐菌类，是我国重要的栽培食用菌之一，工厂化栽培规模已稳居世界首位[3]。金针菇在工厂化栽培过程中，常出现菌丝老化、出菇不整齐、出菇延迟、产量严重下降等现象，这些现象大多是由菌种种性退化造成的[4]。造成菌种退化的原因较多，包括核型改变、基因突变、菌株无性繁殖体感染病毒、细胞内酶合成能力下降等；还有受菌种自身遗传多样性、营养不良、无限传代、长期低温保藏等因素的影响[5,6]。为保持菌种的稳定性，生产上多采用蒸馏水、液氮等保藏技术来抑制菌丝的无性生长；如果保存操作不当，也会对菌种造成损伤，导致种性退化[7-9]。

目前，金针菇菌种一般采用PDA 培养基进行传代培养，虽然方便省时，成活率高，但成本较高。与PDA 培养基相比，木屑培养基含有木腐菌所必需的纤维素、半纤维素和木质素等营养物质，对菌丝各种酶的活性有保持和促进作用，能减缓菌丝老化，有利于保持菌株原有的特性和活力[10]。木屑培养基还具有较强的保水能力，使得菌丝在保藏过程中不会因失水而降低活性。食用菌菌种复壮的方法主要有传统的组织分离法、菌丝尖端分离法、原生质体再生法等[4]。关于木屑培养基传代培养保持金针菇菌种稳定性的方法研究较为少见。本研究以选取的11 个白色金针菇菌株为对象，采用木屑培养基对其菌种进行复壮培养，通过测定其菌丝生长速度、子实体农艺性状及子实体品质等指标，探究木屑培养基对传代金针菇菌种的复壮效果。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

供试白色金针菇菌株共11 个（表1），均由天水众兴菌业科技股份有限公司研发中心提供。

1.2 培养基配方

木屑培养基：木屑48 g，葡萄糖5 g，麸皮45 g，米糠5 g，蛋白胨 5 g，KH2PO40.5 g，MgSO40.5 g，豆粕8 g，维生素B10.067 g，水130 mL。每试管（20 mL）装7 g。母种培养基：PDA 培养基（来源于日本）39 g，水1 000 mL。液体培养基：白砂糖12.8 g，豆粕2.11 g，MgSO40.42 g，KH2PO40.42 g，水640 mL，pH 6.3～7.3。每三角瓶（1 L）装640 mL。栽培料（干料）配比：玉米芯34.5%，麸皮8.1%，米糠36.1%，大豆皮5.1%，棉籽壳5.1%，啤酒糟5.1%，贝壳粉1.7%，甜菜渣3.6%，碳酸钙0.7%，含水量为66%～67%。

1.3 液体菌种的制作

从长满菌丝的PDA 培养基上切取6 块边长为4 mm 的菌种块，接入三角瓶液体培养基中，在黑暗、19 ℃、150 r/min 条件下振荡培养7 天。

1.4 测定指标及方法

（1）菌丝生长速度。参考杨慧等[11]的方法，稍作修改。从母种试管中切取边长为2 mm 的菌种块转接至木屑培养基（试验组）和PDA 培养基（对照组）上，在19～20 ℃、空气相对湿度60%～70%下避光培养10 天，定时观察试验组与对照组的菌丝生长情况并测量菌落半径。每个菌株设3 次重复，每重复4 个平板。计算菌丝日平均生长速度。

（2）子实体农艺性状。将试验组和对照组的11 个菌株按照工厂化瓶栽模式栽培，栽培瓶容积为1 500 mL，每瓶装培养料1 120～1 190 g（以湿料计）。经121 ℃高压灭菌，待瓶体冷却至低于20 ℃后，采用液体菌种发酵罐培养8 天后进行接种，接种量为40 mL，每个菌株接种3 筐，每筐16瓶。于14～18 ℃、空气相对湿度70%～80%条件下避光培养23 天后搔菌，移入育菇房。按照常规工厂化调控方法进行培育，经过菌丝恢复期、出芽期、抑制期、生长期，共27 天左右采收。分别测定试验组与对照组的单瓶产量、菌盖直径、干爽度、切根面白度、根部紧实度和菌柄硬度等。

1.5 数据分析

利用SPSS 26 进行数据统计分析。

2 结果与分析

2.1 木屑培养基培养的菌株菌丝生长特性

11 个供试菌株在木屑培养基复壮培养下的菌丝生长速度测定结果见表1。1225③、816-1S、CF-2、Q10、Q19-1D、Q2004-1S、Q2004-2S、T-0415②等8 个菌株的菌丝生长速度均有不同程度的提高，Q30、ZY-10、ZY-14 在处理前后无明显变化。其中，菌株1225③和T-0415②经木屑培养基复壮的3 次重复的菌丝生长速度均显著高于对照；CF-2、Q19-1D、Q2004-1S 等3 个菌株有2 次重复显著高于对照；菌株816-1S、Q10、Q2004-2S 仅有1 次重复显著高于对照。

表1 不同处理11 个白色金针菇菌株的菌丝生长情况

从菌丝长势方面看，经木屑培养基复壮后，菌株Q10 和Q30 的各重复菌丝长势均优于对照；菌株816-1S 和Q2004-2S 有2 次重复优于对照；而菌株Q19D 有2 次重复的长势比对照差；其余6 个菌株在培养前后菌丝长势差异不明显。

综上，木屑培养基复壮培养能显著提高大部分菌株的菌丝生长速度，但对菌丝长势的促进作用不明显，仅对个别菌株有效果。

2.2 木屑培养基处理的子实体农艺性状表现

11 个菌株的单瓶产量和菌盖直径测定结果见表2。其中，1225③、Q2004-1S 和Q2004-2S 等3个菌株经木屑培养基复壮后，3 次重复的单瓶产量均显著高于对照，菌盖直径为4.0～10.0 mm，与对照比差异不明显；CF-2、Q19-1D、Q30 和ZY-10等4 个菌株的平均单瓶产量有2次重复显著高于对照，菌盖直径为4.0～12.0 mm，与对照相比也无明显差异；其余的菌株816-1S、Q10、T-0415②和ZY-14 仅有1 个重复的平均单瓶产量显著高于对照。

表2 11 个白色金针菇菌株经木屑培养基复壮后的子实体农艺性状

综上，木屑培养基复壮处理能够显著提高大部分菌株的子实体产量，但对菌盖直径的影响不明显。

一般认为，白色金针菇子实体的菌盖越小，菇体越干爽，切根面越白，根部越紧实，菌柄越硬，则农艺性状越佳。由表3 可知，11 个白色金针菇菌株经木屑培养基复壮后，以菌株T-0415②的菌盖较大，切根面白度稍差，为较白净，其总体栽培农艺性状较差，但也能达到采收标准；其余菌株的子实体菌盖大小、干爽度、切根面白度、根部紧实度及菌柄硬度均表现较好。表明木屑培养基复壮处理对绝大多数菌株的子实体品质有明显的改善作用。

表3 11 个金针菇菌株经木屑培养基复壮后的子实体品质

3 结论与讨论

在金针菇工厂化生产中，一个菌株需要多次的传代培养才能满足生产需求，现有菌种培养工艺多采用PDA 培养基进行传代培养。虽然PDA 培养基营养丰富，但长期单一营养配方不利于促进菌丝胞外酶的分解。此外，继代培养时菌种一直处于活跃的细胞生长和复制状态，菌丝细胞需要经历染色体复制、细胞核迁移、粉孢子形成、体细胞单核化等一系列生理活动，这些生理活动均会影响金针菇菌种的种性[12]。而金针菇母种的稳定性直接影响其品质和单产，因此，如何减缓菌种种性退化是金针菇产业发展中急需解决的问题。

本试验结果显示，经过木屑培养基复壮后，菌株1225③和T-0415②的菌丝生长速度显著高于对照，且大多数菌株的菌丝生长速度均能提高，但仅对个别菌株的菌丝长势有促进作用；菌株1225③、Q2004-1S 和Q2004-2S 的平均产量显著高于对照，大部分菌株的单产都得到提升，但对菌盖直径没有明显的作用；大部分菌株的子实体农艺性状表现较好，表明复壮效果明显。

试验中还发现，个别菌株经过木屑培养基复壮后，与对照相比，出菇的畸形菇数量较少，说明在同一栽培瓶内的菌种一致性较好。因此，木屑培养基可使金针菇菌种达到一定的复壮效果，且能使大多数菌株保持较好的稳定性，可在生产中推广应用。