犊牛产气荚膜梭菌感染的诊断及综合防控

唐国超，张 轶，金庭辉，齐亚银，王晨豫，魏 勇

1 沙湾天润生物有限责任公司，新疆沙湾832100 2 新疆天澳牧业有限公司，新疆奎屯 833200 3 石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000

0 引言

产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性厌氧菌，普遍存在于不同环境中，属于条件致病菌，在一定条件下可引起家畜和人类肠道疾病，严重威胁畜牧业健康发展和人类食品安全[1]。产气荚膜梭菌具有7 种毒素型（A、B、C、D、E、F和G），产生6 种主要毒素，即α、β、ε、ι、CPE和NetB[2]，主要影响反刍动物。该病的初步诊断可以根据临床病史、临床体征以及肉眼和显微镜下的变化来确定，但进一步确诊需要细菌的分离鉴定及分型。近年来，随着抗生素残留奶饲喂犊牛以及断奶犊牛全精料饲喂模式的推广，导致犊牛梭菌病的发病率逐渐增加[4，5]，由于其发病快、死亡率高，不仅给兽医临床治疗带来了很大困难，而且给食品安全带来了严重的威胁[6，7]。

2022年7月下旬，新疆塔城地区某规模化牧场的犊牛群出现疑似产气荚膜梭菌的感染，发病率高、死亡快，造成了较大的经济损失。为了查明发病原因，本试验采用现场流行病学调查、病理剖检以及实验室的组织涂片、染色镜检等方法，对本次病例进行确诊，并建立了综合防控方案，有效的控制了该次疫病的蔓延。

1 材料

1.1 牧场情况

本次试验所采样牧场为现代规模化牧场，共舍饲荷斯坦牛共计3000 头左右。本次发病牛群均为6～12月龄育成期公牛，牧场人员使用泌乳牛剩料、窖储对该牛群进行饲喂，每天1～2 次。

1.2 仪器设备和试剂

超净工作台，上海鸿都电子科技有限公司；4 ℃冰箱、-20 ℃冰箱，海信容声冰箱有限公司；移液器，英国Bibby科技有限公司；光学显微镜，日本OLYMPU公司。

革兰氏染液、瑞氏染色液，杭州微生物试剂有限公司；松柏油，深圳市奥斯微光学仪器有限公司；齐佳康疫苗，北京生泰尔科技有限公司；元吉消毒液，广东瑞吉生物科技有限公司；克洛生，美国建明公司。

2 方法

2.1 现场诊断

现场与管理人员沟通，了解牛群发病史、发病年龄、发病特点、往年发病率和发病季节；检查牛群环境情况，包括环境清洁程度、空气质量、温度、病牛隔离情况等；观察感染牛群的症状，包括精神状态、体温、食欲等，跟进治疗情况和效果，并做好记录；解剖病死牛，观察内脏病理变化情况，并采集组织、器官样本。

2.2 实验室诊断

病死牛组织、脏器使用瑞氏染色；剩料进行革兰氏染色，在显微镜下（10×100倍）观察。

3 结果

3.1 现场流行病学调查结果

发病牛群为6～12月龄的荷斯坦育成公牛。发病季节在7月下旬，环境气温在24～38 ℃，该圈舍为简易围栏没有遮阳棚设施，主要饲喂成母牛剩余的饲草料、秸秆等。发病率为16.35%（34/208），病死率为11.76%（4/34），最后淘汰无治疗价值犊牛30 头。结果见表1。

表1 牛群发病情况

3.2 临诊及剖检结果

发病牛群初期具有轻微临床症状，表现为流涎，流泪，结膜潮红，体温略有升高（39.5～40.0 ℃）；发病中期具有明显的临床症状，表现为步态不稳，两后肢或其中一肢行走困难，有可见的后肢皮下气肿，触诊有捻发音，见图1；发病后期表现为卧地不起，发病至死亡时间短3～10 h不等，见图2。剖检变化可见后腿部位皮下气肿，局部肌肉溶解发黑，肺气肿充血，肺泡溃疡变化等。

图1 病牛后肢皮下气肿

图2 病牛倒地不起

3.3 病死牛脏器镜检结果

将病死牛肝脏、肺脏、心脏、肠组织、肠道内容物、肠系膜淋巴结等脏器进行瑞氏染色镜检。镜检结果如图3-8。镜检结果中均可观察到革兰氏染色阳性的粗大杆菌，两端钝圆，具有明显的荚膜，为典型的产气荚膜梭菌形态。

图3 肝脏

图4 肺脏

图5 心脏

图6 肠组织

图7 肠道内容物

图8 肠系膜淋巴结

3.4 饲草料的涂片染色镜检结果

将牛群吃剩饲料中加入适量的超纯水，充分混匀，取上清液涂在盖玻片上进行革兰氏染色后镜检。镜检结果如图9和图10。在饲喂发病牛群的剩料中可观察到疑似的菌株。

图9 发病牛群剩料

图10 窖储

3.5 综合防控

紧急免疫接种：对同群牛群进行紧急免疫接种齐家康疫苗。

停喂剩草剩料：停止饲喂所有的剩草剩料，改为新鲜的TMR日粮。

加强消毒：所有运动场地面采用2%火碱喷洒消毒，采食通道采用过硫酸氢钾喷洒，饮水采用元吉消毒。

治疗：使用头孢、青霉素400 万/头·次，肌内注射，8 h一次，一天3 次，连续3 天，配合氟尼辛葡甲胺肌注，有一定的缓解。

添加剂拌料：对发病牛群日粮中添加克洛生，20 g/头。连用1 周。

4 讨论

产气荚膜梭菌可引起家畜和人类肠道疾病，严重威胁畜牧业健康发展和人类食品安全。群体免疫是反刍动物梭菌病的重要预防措施[8～10]。具有多重耐药性的反刍动物传播的产气荚膜梭菌分离株在中国新疆普遍存在，具有明显的遗传多样性，新疆产气荚膜梭菌反刍传播菌株分为A型和D型[1]。本实验因病程紧急，还未进行后续分型，只在镜检中观察到不同形态的梭菌。此次治疗过程中，使用大剂量抗生素，效果不理想，紧急免疫后动物机体抗体效价达到具有保护力的水平需要一定时间。本次育成公牛发病原因初步怀疑和饲养密度过于拥挤，气温炎热没有遮阳防暑设施，饲喂剩草剩料、质量欠佳的裹包玉米青贮等饲料有关。建议犊牛在3月龄进行首次免疫，每半年进行免疫1 次，以免造成损失。