不同温湿度条件下球孢白僵菌对核桃长足象的致病力研究

赵玉雪，朱佳敏，杨 霞，吴柳燕

(贵州省核桃研究所 贵州 贵阳550005)

核桃长足象(AlcidodesjuglansChao)属鞘翅目(Coleoptera)象甲科(Curculionidae)，是核桃树主要害虫种类之一，在我国的核桃产地多有分布，发生十分严重，主要蛀果危害[1]。核桃长足象一年发生一代，成虫在果实里产卵，严重情况下一果达到几十个产卵孔，卵孵化后形成幼虫，其幼虫在果内蛀害时间长且隐蔽，防治困难，早期幼虫会蛀食种仁，导致落果，而后期幼虫会导致核桃青皮腐烂而污染果壳，损害其商品价值[2-5]。

球孢白僵菌是一种广谱性昆虫病原真菌，具有致病力强、杀虫谱广、容易培养及飞扬扩散等特点，因而被普遍应用在农林害虫的防治上[6]。在核桃上，杨世璋等人就球孢白僵菌对核桃长足象成虫的致病性与防治效果做了初步的研究[7]。本文以不同温、湿度条件下球孢白僵菌对核桃长足象的致病力的影响为研究内容，旨在掌握球孢白僵菌施用的最佳温、湿条件，为后续生产上应用球孢白僵菌防治长足象的实践提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

采集受幼虫危害后的落果带回实验室，放入饲养盒中，以纱网封住顶部，待羽化后收集成虫,以新鲜核桃果实和核桃枝条饲养备用。

供试菌株与菌液的制备：供试菌株购买的农保生物生产的100亿/g的球孢白僵菌。将其在(26 ±1) ℃下用PDA培养基培养10 d，待完全产孢后，刮下分生孢子，用0.1%吐温-80无菌水润湿，并用搅拌器搅拌均匀。经血球计数板计数后，配成分生孢子浓度为2．0 ×108个/mL的孢子悬浮液；并以0.1%吐温-80无菌水作对照。

1.2 试验方法

1.2.1 温度对球孢白僵菌致病力的影响

挑选健壮、个头一致的核桃长足象成虫，用无菌水清洗后，浸泡在配制好的球孢白僵菌孢子悬浮液中10 s，后放置在塑料杯中，每3头放一个杯中，杯底垫滤纸，杯中放入新鲜的核桃枝条，并以纱网封住顶部。以0.1%吐温-80无菌水作对照，分别置于5个温度梯度为18 ℃、21 ℃、24 ℃、27 ℃、30 ℃的人工气候箱中，相对湿度为80%±10%，每个温度梯度处理15头，重复3次，后每天定时检查成虫的被侵染情况，并及时更换新鲜核桃枝条，以虫体长出白色菌丝，最后被菌丝包围，产生分生孢子层为死亡虫体，记录死亡数量。

1.2.2 湿度对球孢白僵菌致病力的影响

挑选健壮、个头一致的核桃长足象成虫，用无菌水清洗后，浸泡在配制好的孢子悬浮液中10s，后放置在塑料杯中，每3头放一个杯中，杯底垫滤纸，杯中放入新鲜的核桃枝条，并以纱网封住顶部。以0.1%吐温-80无菌水作对照，分别置于(95±5)%、(85±5)%、(75±5)%、(65±5)%、(55±5)%5个湿度梯度的的人工气候箱中，温度设置为27 ℃，每个湿度梯度处理15头，重复3次，后每天定时检查成虫的被侵染情况，并及时更换新鲜核桃枝条，以虫体长出白色菌丝，最后被菌丝包围，产生分生孢子层为死亡虫体，记录死亡数量。

1.2.3 数据统计与分析

累计死亡率 = 死亡数 / 处理总数 × 100%[8]。数据采用EXCEL和SPSS进行统计学分析。

2 结果与分析

2.1 温度与白僵菌致病力的关系

根据不同温度条件下核桃长足象受球孢白僵菌侵染后的死亡情况，获得死亡曲线及相关回归方程，结果如图1、表1所示。结果显示：在设置的温度范围内，核桃长足象的累计死亡率随着温度变化而有所不同。在18～27 ℃范围内，死亡率随温度的升高而增加，在27 ℃下达到最高84.44%，而致死中时间(LT50)则随着温度升高而降低，并在27 ℃下达到最低10.258 d。在较高温度30 ℃条件下，核桃长足象死亡率却明显低于24 ℃和27 ℃，LT50也较之要高。因此，可以得出结论，在设置的温度范围内，27 ℃最有利于球孢白僵菌对核桃长足象的侵染。

表1 不同温度下感染球孢白僵菌后核桃长足象的毒力回归方程

图1 不同温度下感染球孢白僵菌后核桃长足象的死亡曲线上

2.2 湿度与白僵菌致病力的关系

用浓度为2×108/mL的球孢白僵菌分生孢子悬浮液侵染核桃长足象后，于27 ℃温度条件下进行培养，在设置的湿度范围内，获得核桃长足象的死亡率及相关回归方程结果如图2、表2所示。由此可知，不同湿度条件下，核桃长足象的死亡率随着湿度的增加而增长。试验后期，在湿度为(95±5)%的环境下，核桃长足象的死亡率达86.67%，与湿度为(85±5)%的环境下接近，显著高于其他湿度环境，且其LT50分别为10.285 d与10.572 d，均显著低于其他几组数据。因此，可以判定较高的湿度环境更有利于球孢白僵菌对核桃长足象的侵染。

图2 不同湿度条件下感染球孢白僵菌后核桃长足象的死亡曲线

表2 不同湿度条件下感染球孢白僵菌对核桃长足象的毒力回归方程

3 讨论

球孢白僵菌在侵染寄主时，其致病力通常会受温、湿度、寄主龄期、菌液浓度等因素影响[9-10]，本文就是对不同温、湿度条件下球孢白僵菌对核桃长足象的致病力进行研究。不同昆虫在受白僵菌侵染所需温度不一定相同，研究表明，球孢白僵菌孢子萌发的适宜温度范围一般为18～28 ℃[11]，且在本研究中27 ℃是利于球孢白僵菌侵染核桃长足象的最佳温度，这与菌丝适宜萌发生长的温度相吻合，而温度过高或过低都影响其致死率，尤其是高温条件下，可能会导致球孢白僵菌孢内酶活代谢加快，影响其致病力。同时，湿度也是影响球孢白僵菌侵染寄主的一个因素，在高相对湿度下，寄主昆虫致死率较高，且多数研究认为，在湿度为95%～100%的环境下，白僵菌孢子萌发率最高，萌发速度最快[12]。在本研究以球孢白僵菌侵染核桃长足象时，同样是在高湿度条件下致病力表现为最高，与孢子萌发的湿度一致；而在当相对湿度<70%时，多数昆虫的死亡率会显著减少[13]，与本研究中低湿度环境下球孢白僵菌致病力减弱一致。因此，根据当地的温度、湿度，进行球孢白僵菌的喷施，能够取得较好效果[14]。

4 结论

在一定的范围内，球孢白僵菌对核桃长足象的致病力会随着温湿度的变化而变化，在相同湿度下，温度为27 ℃时，球孢白僵菌致死效果最好，核桃长足象的死亡率最高，LT50最短，温度过高或过低都会降低其致死率；而在相同温度下，湿度为(95±5)%的条件下，球孢白僵菌致死效果最好，核桃长足象的死亡率最高，LT50最短，这也表明高湿条件更利于球孢白僵菌对核桃长足象的侵染。因此，在应用球孢白僵菌防治核桃长足象时，掌握好其温、湿度条件，能更有效的应用好球孢白僵菌，才能获得更好的防治效果。