建昌帮姜制工艺对天麻质量标准的影响研究*

黄文华 罗敏 张青 陈文 王李俊 艾瑛 郭三保

（1 江西省抚州市中医药发展中心 抚州 344000；2 建昌帮药业有限公司 江西抚州 344000；3 江西中医药高等专科学校药学系 抚州 344000）

天麻是我国一种著名的常用中药材，来源于兰科植物天麻（Gastrodia elataBl.）的干燥块茎，临床上主要用于治疗风虚眩晕、头疼等病症，具有平抑肝阳、祛风通络功效[1]。天麻的食用营养价值和药用价值都非常高[2]，已于2019 年纳入国家卫生健康委员会颁布的“按照传统既是食品又是中药材的物质”管理品种。历代本草和医方对天麻的记载描述都非常多。天麻药材的质量和药效与其炮制方法、工艺有密切的关联[3]。目前对天麻品质考察多基于测定天麻素及羟基苯甲醇的含量[4～5]。姜天麻的炮制记载可追溯到《幼幼集成》[6]，天麻的姜制是江西“建昌帮”特色炮制技术之一，早在20 世纪80 年代，江西建昌帮主要传人炮制大师上官贤就呼吁：“天麻姜制法为‘建昌帮’中药传统炮制技术，已濒临失传和湮没之危。亟需有关方面给予关注[7]。”本研究依据《中国药典》（2020 版）方法检测比较建昌帮传统特色姜制天麻工艺炮制品与天麻生品的水分、总灰分、二氧化硫残留量、浸出物、天麻素等指标成分含量，旨在为制定建昌帮姜天麻质量标准提供依据。现报道如下：

1 实验材料

1.1 药物与试剂 天麻药材产地为贵州省（亳州普华药业有限公司提供，批号y132-220104），经鉴定为兰科植物天麻的干燥块茎。天麻素对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号为110807-20201002）；对羟基苯甲醇对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号为111970-20170203）。水为超纯化水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器 安捷伦1260 型高效液相色谱仪、岛津LC-2030 型高效液相色谱仪、电子分析天平（BT253）、电子天平（Sartorius/SQP-224-1）、电热鼓风干燥箱（上海一恒/DHG-9053A）、粉碎机（欣镇企业/6202）、电热恒温水浴锅（上海一恒/HWS-26）。

2 实验方法

2.1 天麻炮制方法

2.1.1 天麻生品 依照《中国药典》（2020 版）中天麻生品的制法，取原药材，洗净、蒸软、切薄片、干燥，即得。

2.1.2 建昌帮姜制天麻 工艺细化根据江西省抚州市南城县发掘整理建昌帮中药传统炮制技术科研小组梅开丰、张祯祥、上官贤等编辑的《建昌帮中药传统炮制法》（86 版）中“姜天麻”项的操作进行。工艺标准依据《江西省中药饮片炮制规范》（2008 版）项下“姜天麻”的相关规定操作。

2.2 水分测定 精密称取样品粉末2 g，平铺于干燥至恒重的扇形称量瓶中，厚度不超过5 mm，打开瓶盖在105℃条件下干燥5 h，将瓶盖盖好转置干燥器中，冷却30 min 至室温，精密称定，再在上述温度条件下干燥1 h，冷却至室温，称重至连续两次干燥称重的差异不超过5 mg 为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。

2.3 总灰分测定 精密称取样品粉末2 g，置炽灼至恒重的坩埚中，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。

2.4 二氧化硫残留量测定 依照《中国药典》2020版四部通则（2331）二氧化硫残留量测定法第一法（酸碱滴定法）测定。

2.5 醇溶性浸出物测定 取95%乙醇263 ml，加入纯化水237 ml，混匀配制成500 ml 稀乙醇备用。将样品粉碎至通过二号筛，混合均匀后，精密称取3 g，置250 ml 锥形瓶中，精密加入稀乙醇100 ml 密塞。称定重量，静置1 h 后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。冷却之后，锥形瓶取下，密塞，再次精确称定重量。用稀乙醇补足减失重量，振摇均匀，用干燥漏斗快速滤过，精密量取该续滤液25 ml，置于干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃条件下干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。

2.6 天麻素和对羟基苯甲醇含量测定

2.6.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（3:97）；流速设定为 1 ml/min，检测波长 λ 为 220 nm；理论塔板数按天麻素峰进行计算，按规定应不低于5 000。

2.6.2 制备混合对照品溶液 取对羟基苯甲醇对照品和天麻素对照品适量，精密称定重量，置于容量瓶中，加乙腈-水（3:97）混合流动相溶液制成每1 毫升含对羟基苯甲醇40.84 μg、天麻素46.95 μg 的混合对照品溶液。

2.6.3 制备供试品溶液 分别取姜天麻和天麻生品样品粉碎，过三号筛。取过筛后的粉末约2 g，精密称定重量，精密加入50 ml 稀乙醇，精密称定总重量，超声（功率120 W，频率40 kHz）提取30 min，放冷，再次称定总重量，用稀乙醇补足减失重量，滤过，精密量取10 ml 续滤液，置水浴上浓缩至无醇味近干，残渣加混合流动相溶液乙腈- 水（3:97），分多次荡洗，转移至25 ml 容量瓶中，加混合流动相溶液乙腈-水（3:97）稀释至刻度，振摇均匀，滤过，取续滤液，即得。

2.6.4 系统适用性试验 取已经制备好的混合对照品溶液和供试品溶液，按2.6.1 中的描述设定色谱条件，进样。色谱图显示，混合对照溶液色谱中的天麻素与对羟基苯甲醇保留时间分别为8.716 min、14.646 min；样品色谱中天麻素与对羟基苯甲醇的保留时间分别为8.837 min、14.814 min；样品中天麻素与对羟基苯甲醇理论板数分别为6 571.605、20 455.531。样品中理论板数按天麻素峰计算，结果为6 571.605，高于5 000。见图1、图2。

2.6.5 测定方法 分别精密吸取混合对照品溶液与姜天麻样品溶液各5 μl，注入液相色谱仪，测定。

2.7 特征图谱检测

2.7.1 色谱条件 迪玛C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱：0～10 min，A 相：3%→10%；10～15 min，A 相：10%→12%；15～25 min，A 相 ：12% →18% ；25～40 min，A 相 ：18% ；40～42 min，A 相 ：18% →95% 。 流 速 ：0.8 ml/min，柱温：30℃，检测波长：220 nm。

2.7.2 参照物溶液的制备 称取天麻对照药材约0.5 g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇25 ml，超声处理30 min，放冷、摇匀，滤过，收集续滤液，作为对照药材溶液。另取2.6.2 项下的混合对照品溶液，作为对照品溶液。

2.7.3 供试品溶液制备 取姜天麻粉末（过四号筛）约0.5 g，置具塞锥形瓶中，超声处理30 min，放冷、摇匀，滤过，收集续滤液，作为供试品溶液。

2.7.4 测定法 分别精密吸取对照药材溶液与姜天麻供试品溶液各5 μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。供试品色谱中共呈现6 个特征峰，与对照药材溶液色谱中的6 个特征峰一一对应，其中峰1、峰2 与天麻素对照品和对羟基苯甲醇对照品色谱峰的保留时间一致。

3 实验结果

3.1 水分、总灰分、二氧化硫残留量 建昌帮姜天麻和天麻生品中水分、总灰分、二氧化硫残留量的含量检测结果。见表1。

表1 水分、总灰分、二氧化硫残留量

3.2 浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇含量 建昌帮姜天麻和天麻生品中浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇的含量检测结果。见表2。

表2 浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇含量（%）

3.3 建昌帮姜制天麻炮制品的特征图谱检测结果供试品色谱峰中共出现6 个特征峰，与对照药材溶液色谱中的6 个特征峰一一对应，其中峰1、峰2 与天麻素对照品和对羟基苯甲醇对照品色谱峰保留时间相一致。见图3～图5，各峰归属见表3。

表3 建昌帮姜制天麻样品特征图谱峰表

4 讨论

本研究结果显示，与天麻生品比较，天麻经建昌帮姜制工艺炮制后，水分和二氧化硫残留量减少，尤其是二氧化硫残留量下降明显，浸出物及天麻素和对羟基苯甲醇总含量增加。中药材中二氧化硫残留带来的危害很多，被吸收进入血液，会对全身产生毒作用，它能破坏酶的活力，从而明显影响碳水化合物及蛋白质的代谢，尤其对肝脏有一定损害。而天麻经姜制后二氧化硫残留量下降，而有效成分天麻素和对羟基苯甲醇总含量增加，起到了很好的增效减毒效果。

目前，在炮制技术方面，业内广泛认可的传承流派主要有樟帮、建昌帮、京帮以及川帮[8～9]。姜制天麻是建昌帮传统特色炮制品之一，以地方区域性使用为主。虽然该炮制品已载入《江西省中药饮片炮制规范》2008 年版[10]和《广东省中药饮片炮制规范》2011年版[11]，但对其姜制工艺和炮制机理的现代研究较少。姜制天麻饮片被列为江西“建昌帮”特色饮片[12]，其炮制的理论依据是“姜制温散”理论，可加强天麻镇静止痛、抗眩晕、止呕等作用。近年来，有一些关于姜制天麻的现代研究报道,如李清等[13]学者分析发现天麻姜制后化学成分含量、性质都有所改变。尤其是乙酸乙酯萃取部位，姜制后出现3 个新特征峰。张霞等[14]研究提示姜制天麻对天麻的功效有增效减毒的效果。陆平等[15]对生天麻、姜制天麻和硫磺熏蒸天麻这三种不同天麻炮制品中的天麻素含量进行了比较，结果表明姜制天麻中的天麻素含量最高。范晖等[16]通过药效学实验研究发现天麻经姜制后，能提高天麻对眩晕小鼠的抗眩晕作用。张霞等[17～18]发现天麻经姜制后可增强天麻抗偏头痛作用能使脑组织中的小胶质细胞增加，对神经保护作用有利。谢宇璐等[19]研究提示姜制天麻后对偏头痛可能的作用机制是：通过Ca2+、cAMP、血管内皮生长因子和花生四烯酸代谢等信号通路，以减少炎症介质和神经递质的产生，缓解偏头痛症状，以达到治疗作用。以上说明，天麻姜制工艺炮制法具有合理性和科学性。

《中国药典》（2020 版）尚未收载姜制天麻炮制品，其收载的天麻饮片（炮制方法为洗净，润透或蒸软，切薄片，干燥）规定水分不得过15.00%、总灰分不得过4.50%、二氧化硫残留量不得过400.00 mg/kg、浸出物15.00%、天麻素和对羟基苯甲醇的总量不得少于0.25%。本项目参考《中国药典》（2020版）天麻饮片标准，测定3 批次建昌帮姜天麻的水分、总灰分、二氧化硫残留量、浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇的总量的平均值分别为10.73%、2.02%、2.67 mg/kg、21.90%、0.56%。均符合《中国药典》（2020 版）天麻饮片标准要求。经测定建昌帮姜制天麻特征图谱也符合《中国药典》（2020 版）天麻饮片标准。说明建昌帮姜制天麻的质量较为稳定可靠。

天麻是我国原卫生部审批通过的第一批药食两用的植物，不仅临床上有着重要的应用，而且作为养生保健品的原料，也具有极大的开发应用价值[20]，因此，值得深入研究。以往的研究多集中在对天麻素等酚类成分变化的分析，对天麻炮制方法的影响研究较少，对姜制等炮制法专属标志物的探索等还需要深入研究。国家特别重视中医药健康产业，尤其是具有地方传统特色优势的中医药产业。本研究可为建昌帮传统特色姜制天麻饮片的炮制工艺建立和完善科学性提供依据，制定姜制天麻质量标准。有填补建昌帮地方特色流派产品质量标准空白的作用，对深入开展建昌帮传统特色炮制方法和工艺的传承和创新发展具有特殊意义，更能为建昌帮深入开展“传承精华、守正创新”工作提供科学依据。