Xpert MTB/RIF 检测技术在肺结核实验室诊断中应用价值探析

周艳艳

（河南省南阳市第六人民医院检验科 南阳 473000）

肺结核为常见呼吸疾病，是由结核分枝杆菌感染所致，可引起咳嗽、咯血、胸痛及乏力等一系列症状。肺结核具有较强传染性，治疗不及时不仅会持续损害患者肺功能，还可增加疾病传播风险[1～2]。临床对于肺结核的防控管理较为严格，对于确诊患者需及时开展抗结核治疗，并做好日常防护工作，避免疾病传染造成的重大社会经济损失。但治疗及防控工作开展的前提在于早期明确诊断，故寻找准确度高、检测便捷的早期筛查方式尤为重要。临床诊断肺结核的常规方式为痰涂片抗酸染色，具有操作简单、取材方便、出结果快、技术要求低等优势，无须需特殊仪器，当天检测即可出结果，适用于临床早期筛查[3～4]。但该方法阳性率偏低，存在较高漏诊风险。结核分枝杆菌及利福平耐药检测（Xpert MTB/RIF）则为新一代结核快速诊断技术，以全自动半巢氏实时PCR 技术为基础，以特定的基因为靶基因，能够实现对结核病的快速诊断[5～6]。但关于Xpert MTB/RIF 在肺结核诊断中的具体价值仍需进一步明确。鉴于此，本研究分析Xpert MTB/RIF 检测技术在肺结核实验室诊断中的应用价值。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2020 年1 月至2022 年1 月收治的118 例疑似肺结核患者作为研究对象，其中男67 例，女51 例；年龄39～73 岁，平均年龄（52.39±5.28）岁；体质量指数 19～28 kg/m2，平均体质量指数（24.39±1.48）kg/m2；临床症状持续时间2～6 周，平均临床症状持续时间（3.58±0.42）周；文化程度：高中及以上40 例，初中及以下78 例。本研究经医院医学伦理委员会审核批准（编号：NYLYLL2022036）。

1.2 入组标准 （1）纳入标准：伴有发热、持续咳嗽或盗汗等症状超过2 周；胸部X 线检查示肺部存在异常阴影；精神状态正常；均开展痰培养、Xpert MTB/RIF、痰涂片染色镜检法检测；临床资料完整；患者及家属签署知情同意书。（2）排除标准：存在结核病史；合并恶性肿瘤；有严重肝肾衰竭；明确存在其他肺部疾病；处于妊娠或哺乳期。

1.3 检测方法 所有疑似患者均开展痰培养、痰涂片抗酸染色、Xpert MTB/RIF 检测，均于清晨漱口后，用力咳出深部痰液，将其收集于无菌杯内，及时送检。（1）痰培养：严格参照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》进行痰培养操作，阳性质控菌株为卡介菌株D2BP302S11，将大肠埃希菌ATCC25922 作为阴性质控，质控有效前提下，长期观察可见菌落生长，且经抗菌染色法验证为阳性。（2）痰涂片抗酸染色法：于载玻片上滴加1 滴无菌蒸馏水，将待染色菌挑选完成后置于无菌蒸馏水中，涂布均匀后，自然风干涂片并加热固定；于涂片上放置玻片滤纸，滴加1 滴石碳酸复红染液，置于酒精灯上加热，冒蒸汽后移开火焰静置5 min，去除滤纸，自来水冲洗，一边摇动一边开展脱色处理，至无染色液浮出，确保完全脱色；再以自来水冲洗，滴加复染液进行20～30 s 复染，清洗后风干，油镜下观察，分枝杆菌颜色为红色，并以大肠埃希菌为对照，大肠埃希菌为蓝色。（3）Xpert MTB/RIF 检测：先将痰液标本按要求配比加入Xpert MTB/RIF 样品处理液中，涡旋振荡器上振摇20 s，静置15 min，之后以无菌吸管吸取2 ml 处理好的标本，将其缓慢加入Xpert MTB/RIF 试剂盒内，放入仪器内开展检查，经2 h 反应结束后，由仪器自动生成检测报告。结果判断：若循环阈值（Ct）值≤38 则可判断为阳性，并可参考Ct值半定量结核分枝杆菌，若Ct 值不足16 为高含量，16～22 则为中含量，若处于22～28 则为低含量，超过28 则为极低含量；利福平耐药性检测则基于结核分枝杆菌特异性分子信标早期Ct 值和晚期Ct 值之差（△Ct 值），当△Ct 值超过3.5 则为利福平耐药，反之则为利福平敏感；在结核分枝杆菌阳性的情况下方进行利福平检测。质量控制：所有标本采集及检测操作均需按照规范化标准开展，其中痰涂片抗酸染色需进行盲法复检及室内质控；Xpert MTB/RIF 检测需定期对每个检测匣开展样品处理质量控制及探针质量控制，确保检测系统合格。最终结果以痰培养为金标准，分析两种检测方法的诊断效能。

1.4 观察指标 （1）肺结核检出情况：以痰培养为最终金标准，统计痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF 检测法肺结核检出的情况。（2）诊断价值：以痰培养为最终金标准，分析痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF 检测诊断肺结核的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值，灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%，特异度=真阴性/（假阳性+真阴性）×100%，准确度=（真阳性+真阴性）/（真阳性+真阴性+假阳性+假阴性）×100%，阳性预测值=真阳性/（真阳性+假阳性）×100%，阴性预测值=真阴性/（真阴性+假阴性）×100%。（3）一致性分析：采用kappa 检验验证痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF 检测诊断肺结核与痰培养的一致性。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0 软件分析数据，计数资料以%表达，行χ2检验，计量资料以（）表示，采用t检验；一致性采用kappa 检验（kappa＞0.75 表明一致性极好，0.4～0.75 表明一致性尚可，＜0.4 表明一致性差）。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺结核检出情况 118 例疑似患者痰培养检出92 例，其中痰涂片抗酸染色法检出80 例，检出率为 86.96%（80/92）；Xpert MTB/RIF 检测检出 90 例，检出率为 97.83%（90/92）；Xpert MTB/RIF 检测检出率高于痰涂片抗酸染色法，差异有统计学意义（χ2=7.731，P=0.005）。

2.2 诊断价值 Xpert MTB/RIF 检测诊断肺结核的 灵 敏 度 [96.74 %（89/92）]、 准 确 度 [96.61%（114/118）]及阴性预测值[89.29%（25/28）]高于痰涂片抗酸染色法 [84.78%（78/92）、86.44%（102/118）、63.16%（24/38）]，差异有统计学意义（P＜0.05）；kappa 检验显示，Xpert MTB/RIF 检测与痰培养一致性极好（kappa 值 =0.904，P=0.000）；痰涂片抗酸染色法与痰培养一致性尚可（kappa 值=0.661，P=0.000）。见表 1、表 2。

表1 肺结核检出情况比较（例）

表2 诊断一致性比较[%（例/ 例）]

3 讨论

正常情况下结核分枝杆菌入侵后会被机体免疫系统消灭，若机体免疫力欠佳，结核分枝杆菌侵入机体后则难以被免疫系统清除，会于肺部大量繁殖，进而引起肺结核，损伤肺组织并降低肺部正常功能，诱发咳嗽、咳痰、咯血等症状，甚至出现大咯血等严重并发症，威胁生命[7～8]。同时，肺结核具有较强传染性，结核分枝杆菌耐干燥、酸、冷等能力较强，即使处于阳光直射下，痰液内该病菌也需2～7 h 才会被杀死，疾病发生后若控制不及时，会传染与患者有过直接或间接接触的其他人群，造成较大社会经济损失[9～10]。

痰培养为当前肺结核诊断金标准，通过采集标本开展培养能够准确鉴别疾病，但操作较为复杂，周期较长，在疾病早期筛查中存在一定局限性，仍需寻找更为简便、准确的早期筛查方式[11～12]。痰涂片抗酸染色在早期筛查中应用较为广泛，具有操作简单、取材便捷等优点，由于结核分枝杆菌细胞壁内脂质含量较高，充分包裹于肽聚糖外围，使得该病菌着色困难，需长时间加热、染色方可着色，且病菌内分枝菌酸结合染料后难以被酸性脱色剂脱色，故通过染色后结核分枝杆菌可呈红色，区别于其他细菌及背景的蓝色，便于疾病鉴别诊断。但痰涂片抗酸染色易受操作者主观性、操作过程中误差等因素影响，存在较高漏诊风险。本研究结果显示，Xpert MTB/RIF 检测诊断肺结核的灵敏度、准确度及阴性预测值高于痰涂片抗酸染色法，差异有统计学意义（P＜0.05）；kappa 检验显示，Xpert MTB/RIF 检测与痰培养一致性极好（kappa 值 =0.904，P=0.000）；痰涂片抗酸染色法与痰培养一致性尚可（kappa 值=0.661，P=0.000）。提示Xpert MTB/RIF 检测诊断肺结核检出率较高，能够提高诊断灵敏度、准确度，便于肺结核早期治疗及防控。究其原因为Xpert MTB/RIF 检测为新一代检测技术，是一个将定量PCR 扩增、样品准备及荧光检测等集为一体的核酸扩增检测系统，具有操作简单、检测时间短、核酸污染低等特点[13～14]。该方法在检测过程中以全自动半巢式实时PCR 技术作为基础，检测重点为肺结核分枝杆菌DNA，检测过程中可排除非结核分枝杆菌的干扰，确保结果的准确性。针对病菌RopB 基因81bp 利福平耐药决定区设计引物、探针，通过检测其是否出现突变，2 h 内即可获得检测报告，从而判断患者是否患有结核病，明确对利福平是否发生耐药性，为临床诊治提供可靠指导。相较于常规检查，Xpert MTB/RIF 检测在整个检测过程中可将样品所需的试剂一次性提前装入其中，避免操作过程中的污染，确保试验结果的精准性，且对于结核分枝杆菌的临床检出阈值偏低，仅需131 CFU/ml 即可获得阳性结果，故诊断效能更高，值得广泛推广[15]。

综上所述，Xpert MTB/RIF 检测在肺结核诊断中的灵敏度、准确度较痰涂片抗酸染色更高，与痰培养结果存在较高的一致性，且操作简单、快速，能够同时对利福平耐药性进行检查，更好协助临床早期疾病诊疗及预防隔离。