多囊卵巢综合征患者血清miR-194-3p、miR-296-3p和AMH水平及其诊断价值

唐振香，余丽金，平玉珍，王艳蕊

(海南现代妇女儿童医院妇科，海南 海口 571700)

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS) 是一种常见的女性内分泌疾病，不仅可引起女性生殖功能障碍，还可造成代谢综合征和心脑血管疾病等相关并发症，严重影响妇女的生理和心理健康[1]。既往研究表明，PCOS的发生发展与胰岛素抵抗、血脂异常、肥胖、代谢紊乱、基因突变、表观遗传及生活环境有关[2]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类内源性非编码的RNA单链小分子，可通过调控基因水平表达参与PCOS的发生发展[3]。有研究表明，miR-194-3p及miR-296-3p在PCOS中异常表达，通过调节颗粒细胞的增殖、凋亡对卵泡发育产生影响，这可能为PCOS的诊断和治疗提供新的策略[4-5]。抗苗勒管激素(anti-mullerian hormone，AMH)是一种二聚糖蛋白激素，参与卵泡的发育和调节，能有效反映卵泡数量、卵巢储备及卵巢功能，对PCOS的诊断具有较好的临床应用价值[6]。基于此，本研究通过检测PCOS患者血清miR-194-3p及miR-296-3p的表达情况，分析其联合AMH诊断PCOS的价值，旨在为PCOS的诊疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2018年1月至2021年9月我院收治的137例PCOS患者为PCOS组研究对象，年龄23～39岁，平均(29.16±4.75)岁。纳入标准：①符合《多囊卵巢综合征中国诊疗指南》中PCOS的诊断标准[7]；②年龄>18岁，且未经治疗的初诊患者；③配偶生育能力正常。排除标准：①存在性腺发育不全、生殖道畸形及高泌乳素血症；②近1个月服用影响激素类药物。另选取因男方因素不孕而接受检查的50例健康女性作为对照组，年龄25～37岁，平均(28.62±3.64)岁。

1.2 分组方法

根据胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR)，将137例PCOS患者分为胰岛素抵抗组(n=90，HOMA-IR≥2.69)和非胰岛素抵抗组(n=47，HOMA-IR<2.69)；根据体质量指数(body mass index，BMI)将PCOS患者分为肥胖组(n=43，BMI≥28kg/m2)和非肥胖组(n=94，BMI<28kg/m2)；根据睾酮水平将PCOS患者分为高雄激素组(n=76，睾酮≥0.7ng/mL)及非高雄激素组(n=61，睾酮<0.7ng/mL)。

1.3 观察指标

抽取所有研究对象的空腹静脉血5mL，离心分离血清，在ABI 7500型荧光定量PCR仪检测miRNA水平。PCR总反应体系为20μL：1μL引物及探针Mix(20×)，10μL TaqMan通用混合物溶液(2×)，1.33μL反向转录脱氧核糖核酸，7.67μL双蒸馏水；反应条件:95℃变性15s，60℃退火60s，72℃延伸60s。采用2-△Ct法计算miR-194-3p及miR-296-3p表达水平。采用罗氏全自动电化学发光分析仪检测血清AMH、黄体生成素(luteinizing hormone，LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，FSH)及睾酮水平；采用贝克曼DXC600全自动生化分析仪检测高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)及空腹血糖(fasting blood glucose，FPG)水平。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 PCOS组和对照组患者基线资料的比较

PCOS组患者的LDL、HOMA-IR、LH、LH/FSH和睾酮水平均明显高于对照组，而FSH水平明显低于对照组，差异有统计学意义(t值分别为3.513、6.872、4.176、6.713、5.938、3.905，P<0.05)，其余基线特征差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2 PCOS组和对照组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较

PCOS组患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(t值分别为15.284、19.360、14.608，P<0.001)，见表2。

2.3 PCOS肥胖组和非肥胖组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较

肥胖组PCOS患者的血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明显高于非肥胖组和对照组，差异有统计学意义(P<0.001)；而非肥胖组和对照组患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表1 PCOS组和对照组患者基线资料的比较Table 1 Comparison of baseline data of the patients between the PCOS group and the control

表2 PCOS组和对照组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较Table 2 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the patients between the PCOS group and the control

表3 肥胖组和非肥胖组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较Table 3 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the POCS patients between the obese subgroup and the non obese

2.4 PCOS高雄激素组和非高雄激素组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较

高雄激素组PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明显高于非高雄激素组和对照组，差异有统计学意义(P<0.001)；非高雄激素组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.001)，见表4。

表4 高雄激素组和非高雄激素组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较Table 4 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the PCOS patients between the hyperandrogen subgroup and the non hyperandrogen

2.5 PCOS胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较

胰岛素抵抗组PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明显高于非胰岛素抵抗组和对照组，差异有统计学意义(P<0.001)；非胰岛素抵抗组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.001)，见表5。

表5 胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比较Table 5 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the POCS patients between the insulin resistance subgroup and the non insulin resistance

2.6 血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平对PCOS的诊断价值

血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平诊断PCOS的最佳截值分别为1.30、2.45及6.93ng/mL。单项检测中，miR-296-3p 的敏感度和特异度较好，分别为86.2%和78.4%；联合检测中，三项指标联合诊断的敏感度最高(96.5%)；miR-296-3p与AMH联合诊断的特异度最高(84.6%)。三项指标联合对PCOS的诊断价值最大(AUC=0.917，95%CI：0.855～0.976)，其敏感度为96.5%，特异度为81.4%，详见表6。

表6 血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平对PCOS诊断价值Table 6 Diagnostic values of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels for PCOS

项目最佳截断值AUC95%CI敏感度(%)特异度(%)阳性预测值(%)阴性预测值(%)miR-194-3p+AMH—0.8250.767～0.88785.076.379.581.7miR-296-3p+AMH—0.8660.807～0.92888.284.681.891.3miR-194-3p+miR-296-3p—0.8430.784～0.90187.579.677.589.6三项指标联合—0.9170.855～0.97696.581.484.293.0

2.7 血清miR-194-3p、miR-296-3p表达水平与AMH的相关性

Pearson相关分析显示，PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p表达水平与AMH均呈正相关(r值分别为0.807、0.863，P<0.001)，见图1。

图1 血清miR-194-3p、miR-296-3p表达水平与AMH的相关性Fig.1 Correlations of serum expression levels of miR-194-3p and miR-296-3p with serum expression level of AMH

3 讨论

3.1 miRNA及AMH在PCOS中的应用

PCOS是一种好发于育龄期女性的内分泌紊乱疾病。在PCOS患者的颗粒细胞、脂肪组织、卵泡液、血清和外周血中可检测到miRNA的异常表达，且与PCOS的发生发展有关，这将为PCOS的诊疗提供新的思路与方法[8]。研究表明，miRNA的异常表达与卵泡发育或功能障碍、卵巢激素的调节、颗粒细胞增殖和凋亡等有关，在PCOS的病理生理过程中发挥重要作用，可能是一种潜在的生物标志物[9]。Butler等人[10]研究发现，PCOS患者的miRNA表达水平与正常人相比存在明显差异，推测miRNA异常表达可能在基因水平参与PCOS的发病机制。AMH是一种二聚糖蛋白激素，其水平变化与卵泡生长发育、排卵障碍及代谢异常密切相关，广泛应用于PCOS的诊断和疗效评估，指导治疗方案的选择[11]。

3.2 miR-194-3p、miR-296-3p及AMH与PCOS发生发展的关系

本研究发现PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明显高于对照组，提示miR-194-3p、miR-296-3p及AMH在PCOS中呈高表达，可能参与PCOS的发病过程。Jiang等人的[12]研究也发现，miR-194在PCOS患者中表达上调，其高表达与PCOS患者卵泡发育、胰岛素抵抗和糖代谢紊乱有关，可能参与了PCOS的病理生理过程。Du等人[13]研究证实，PCOS患者早期卵泡发育存在明显障碍，与AMH水平升高密切相关，AMH有可能被用作PCOS诊断的生物标志物。

肥胖、高雄激素血症和胰岛素抵抗是PCOS发生发展的主要病理基础：高水平的雄激素可拮抗雌激素，促进卵巢颗粒细胞凋亡，进而导致卵泡闭锁，最终引起排卵功能障碍；肥胖的PCOS患者更易发生胰岛素抵抗，高胰岛素可抑制卵巢颗粒细胞增殖，引起颗粒细胞功能失调，导致卵泡无法正常生长和排卵。本研究显示，PCOS肥胖组、高雄激素组和胰岛素抵抗组患者的血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明显高于非肥胖组、非高雄激素组和非胰岛素抵抗组，且血清miR-194-3p、miR-296-3p表达水平与AMH呈正相关，提示miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三者共同影响卵泡的正常发育。Sørensen等人[14]研究表明，miRNA在PCOS患者颗粒细胞和卵泡液中异常表达，可能在PCOS高雄激素、卵泡异常发育或功能障碍的发病机制中起着关键作用。Fu等人[15]研究显示，血清AMH水平在高雄激素 PCOS患者中较非高雄激素患者显著升高，AMH水平与激素水平异常、排卵障碍及胰岛素抵抗密切相关，可能参与PCOS的发生发展过程。

3.3 miR-194-3p、miR-296-3p及AMH对PCOS诊断价值

本研究ROC分析显示，miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三项指标联合诊断PCOS的AUC最大，敏感度和特异度相对较好；相关分析也显示，PCOS患者miR-194-3p、miR-296-3p表达水平与AMH呈正相关，表明miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三项联合检测对PCOS的诊断效能较高，有望作为PCOS诊断的临床辅助指标。Chen等人[16]研究认为，miRNA在PCOS病理过程中发挥关键作用，与健康女性相比，PCOS患者miRNA表达的改变可能作为PCOS的非侵入性生物标志物和新的治疗靶点。另有研究表明，PCOS患者血清AMH水平较正常女性升高，在评价女性卵巢功能及预测促排卵过程中有着重要价值，有望成为PCOS诊断的可靠指标[17]。

综上所述，血清miR-194-3p及miR-296-3p表达水平在PCOS患者中明显升高，其高表达可能参与了PCOS患者肥胖、高雄激素和胰岛素抵抗，二者联合AMH检测对PCOS具有较高的诊断价值。