GOLPH3与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性研究

郝 琳 康 娟 宋 英

非小细胞肺癌是源自支气管黏膜、支气管腺体以及肺泡上皮累的恶性肿瘤，在显微镜下主要表现为细胞浆大和胞浆丰富，是我国较为多见的肿瘤[1]。尽管近些年，对于肺癌的治疗方案有了较大的提升，但是肺癌的发生机制仍不明确，更需要进一步进行探索[2]。上皮间质转化是在生理和病理的基础下出现上皮细胞表型细胞丧失极性后活动性升高，能够在细胞间质活动，自上皮样细胞到间充质细胞转变为特点的变化[3]。研究认为上皮间质转化与癌细胞的转移和迁徙等有关。高尔基磷酸化蛋白3(golgi protein phosphorylation 3,GOLPH3)属于高尔基体基质蛋白的一种，是一种新型癌基因，主要分布于高尔基体反面网络机构内，能够对雷帕霉素靶蛋白信号通路进行调控，从而影响肿瘤的分化和增生[4-5]。研究认为，GOLPH3与癌组织上皮间质转化存在一定相关性[6]。因此本研究选取我院2019年10月至2021年10月收治的72例非小细胞肺癌患者临床资料进行分析，以研究GOLPH3与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性研究。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院 2019年10月至2021年10月收治的72例非小细胞肺癌患者作为研究对象。纳入标准：①患者符合《肺癌诊断治疗学》[7]中非小细胞肺癌诊断标准；②患者术后经病理学明确非小细胞肺癌诊断；③患者入院前未接受治疗；排除标准：①患者合并其他部位恶性肿瘤；②患者合并严重肝肾功能衰竭；③患者合并颅内感染、全身感染以及心血管疾病；④患者临床资料不完整；⑤患者合并其他传染性疾病。

1.2 方法

采用免疫组化法对患者肺癌组织和癌旁正常组织中GOLPH3蛋白进行检测，其中试剂主要选取上海一研生物科技有限公司的GOLPH3抗体系多克隆抗体，北京中山金桥公司的即用型SP试剂盒、二苯甲、PBS以及DAB显示液。将获取的组织标本石蜡以4 μm 厚连续切片，摊片，并在60 ℃的烤片箱内连续烘烤60 min，在常规二甲苯脱蜡后，以梯度酒精水化，采用蒸馏水连续冲洗3次，每次3 min；将获得的切片浸泡在pH为7.0的柠檬酸缓冲液内，放于高压锅中对抗原连续修复20 min，随后放于室温内冷却，在用蒸馏水以及PBS冲洗2次，每次3 min；清晰PBS液体，随后加入50 μl牛血清在各个切片上，封闭后在室温内孵育5 min，将血清去除后，滴入第一抗体兔抗人GOLPH3多克隆抗体，放于湿盒内部，在室温中静置45 min，再次采用PBS连续冲洗3次，注入第三抗体，湿盒内在室温下静置45 min，PBS连续冲洗3次后将PBS去除，滴入50 μl DAB显色液显色，显微镜下反应时间3.5 min，采用自来水冲洗并终止反应，苏木精复染后，采用盐酸酒精分化，以自来水西返蓝，随后脱水封片，在显微镜下读片。评定标准：GOLPH3阳性细胞质主要为棕黄色或者黄色，染色强度评分:未着色以及阳性细胞数<10%记为0分；着色低于背景色，阳性细胞数在10%～50%记为1分；中度着色，且明显深于背景色，阳性细胞数在51%～75%记为2分；强着色，主要表现为棕黄色，阳性细胞数>75%记为3分。阴性为0～1分，阳性为≥2分。E-cadherin和vimentin以同样方式进行切片和染色，E-cadherin评定标准：细胞膜或者细胞质发现棕黄色颗粒状为阳性，细胞数<10%记阴性，≥10%记为阳性。Vimentin：评定标准：胞质染色发现棕黄色则记为阳性，每个切片内可观察阳性细胞数目<10%记阴性，≥10%记为阳性。

1.3 观察指标

对比患者肺癌组织和癌旁正常组织GOLPH3表达、上皮间之转化标志物E-cadherin以及vimentin；对比患者不同临床特征(病理类型、分化程度、淋巴结转移情况)GOLPH3、E-cadherin以及vimentin表达情况，同时分析GOLPH3与E-cadherin和vimentin相关性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 肺癌组织和癌旁正常组织GOLPH3、E-cadherin以及vimentin表达情况对比

肺癌组织GOLPH3和vimentin阳性率均显著高于癌旁正常组织，E-cadherin阳性率显著低于癌旁正常组织，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 肺癌组织和癌旁正常组织中GOLPH3表达情况对比/例

2.2 不同临床特征GOLPH3表达情况

不同病理类型患者GOLPH3表达阳性差异无统计学意义(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同TNM分期患者GOLPH3阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床特征患者GOLPH3表达情况/例

2.3 不同临床特征E-cadherin表达情况

不同病理类型患者E-cadherin表达阳性差异无统计学意义(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同TNM分期患者E-cadherin表达阳性差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同临床特征患者E-cadherin表达情况/例

2.4 不同临床特征vimentin表达情况

不同病理类型患者vimentin表达阳性差异无统计学意义(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同TNM分期患者vimentin表达阳性差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同临床特征患者vimentin表达情况/例

2.5 非小细胞肺癌患者GOLPH3与E-cadherin和vimentin表达相关性分析

经过相关性分析得出：GOLPH3阳性表达与E-cadherin表达呈负相关，与vimentin表达呈正相关(P<0.05)，见表5。

表5 非小细胞肺癌患者GOLPH3与E-cadherin和vimentin表达相关性分析

3 讨论

肺癌是全球较为常见的恶性肿瘤，其中更是以非小细胞肺癌较为多见，且发病率和死亡率正逐年升高[8]。虽然近些年对于肺癌的治疗已取得了较大的进步，但患者的生存率仍不高，且术后容易出现转移[9-10]。上皮间质转化是完全分化的上皮细胞转变的过程，主要以上皮细胞失去活性为特点，导致与周围细胞接触以及细胞的粘附力降低[11]。有研究发现，非小细胞肺癌的侵袭和转移与上皮间质转化存在一定相关性[12]。因此本研究选取我院收治的42例非小细胞肺癌患者临床资料进行分析，以研究GOLPH3与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性。

GOLPH3是一种全新致癌基因，负责囊泡转运的肿瘤蛋白。与PI4-P相结合，能够保持高尔基囊泡的转运，以MY0184和肌动蛋白骨架连接能够稳定高尔基形态以及转运，同时在囊泡运输、蛋白糖基化以及线粒体功能中也发挥重要的作用[13]。GOLPH3能够以mTORC1和mTORC2对mTOR信号通路进行刺激，引起细胞内部S6K1升高，促进了蛋白合成、细胞的分裂，对细胞的凋亡进行抑制[14-15]。本研究发现，患者肺癌组织GOLPH3阳性率均显著高于癌旁正常组织。这说明，GOLPH3在非小细胞肺癌的发生发展中发挥着重要的作用。非小细胞肺癌难以治疗的原因也是因为容易出现转移和侵袭。上皮间质转化不仅能够增强肿瘤细胞自身的侵袭能力，还能够对癌细胞所处患者进行改变，诱发癌细胞躲避机体免疫的监视，进而增强侵袭能力[16-17]。本研究发现，患者肺癌组织vimentin阳性率均显著高于癌旁正常组织，E-cadherin阳性率显著低于癌旁正常组织。说明，上皮间质转化在非小细胞肺癌中发挥着重要的作用。本研究发现，不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同TNM分期患者GOLPH3阳性表达率差异具有统计学意义。这是因为，分化程度较高、存在淋巴结转移以及TNM分期较高的患者往往存在明显的癌细胞扩散以及增殖，其中GOLPHS的突变都能够引起正常调控细胞增殖途径出现异变，导致细胞增生异常进而促进肿瘤的发生和发展[18-19]。上皮间质转化能够赋予肺癌细胞干细胞特性，增强肺癌干细胞的生成[20]。本研究发现，不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同TNM分期患者E-cadherin和vimentin阳性表达率差异具有统计学意义。这是因为肺癌干细胞在上皮表型以及间质表型的转换能力，这也是肺癌转移和增生的基础。本研究发现，GOLPH3阳性表达率与E-cadherin表达呈负相关，与vimentin呈正相关。这说明，GOLPH3与非小细胞肺癌上皮间质转化存在明显的相关性。本研究发现，GOLPH3与患者上皮间质转化存在关系，能够作为患者预后的评估指标，临床价值较高。但本次研究可能因为病例收集较少等因素，导致实验存在一定偏差。

综上所述，GOLPH3与非小细胞肺癌患者E-cadherin表达呈负相关，与vimentin呈正相关，与患者上皮间质转化存在明显的相关性。