IGF1、miR-148b在非小细胞肺癌患者血清中的表达及其与预后的相关性

田红伟 李慎柯 李训东

非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)具有较高的发生率，早期无明显症状，且易向远处转移，大多数患者经临床诊断时已处于中晚期，从而导致生存率较低，预后较差[1-2]。积极的寻求与NSCLC发生发展与预后相关的分子标志物，以此指导临床施行更具个体化的治疗，对于延长患者的生存周期意义重大[3-4]。胰岛素样生长因子1(IGF1)可通过与其受体进行特异性的结合，参与肿瘤细胞的分化。而微小RNA-148b(miR-148b)能够调节转录水平过后的基因翻译。临床有关研究显示，IGF1、miR-148b在肿瘤的发生发展过程中扮演重要角色[5-6]。但临床关于两者在NSCLC患者血清内的表达与临床意义的研究报道较为缺乏。本研究主要探究IGF1与miR-148b在NSCLC患者血清内的表达与临床意义。报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取本院2018年6月至2020年6月诊治的78例NSCLC患者为研究对象，同时选择同期于本院治疗的71例良性肺部病变患者作为对照组，研究经医学伦理委员会批准。纳入标准：所有NSCLC患者均经胸部影像学与组织病理学检查确诊；近期未接受放化疗等辅助治疗；患者的病历资料齐全；所有患者的选择均遵循自愿原则，签署知情同意书。排除标准：有感染性疾病者；合并免疫系统病症者；伴有血液系统疾病者；有视听或语言障碍，无法进行正常沟通者；合并其他恶性肿瘤者；存在凝血功能异常者；妊娠或哺乳期者；存在精神疾病患者。对照组男性37例，女性34例；年龄40～71岁，平均年龄(59.48±3.67)岁；体质量指数18.7～28.4 kg/m2，平均体质量指数(24.25±1.35)kg/m2。观察组男性40例，女性38例；年龄41～72岁，平均年龄(59.63±3.71)岁；体质量指数18.5～28.7 kg/m2，平均体质量指数(24.33±1.29)kg/m2。

1.2 方法

IGF1检测：采集2组的晨起空腹静脉血5 ml，置清洁干燥试管中室温下静置4 h后，以3000 r/min的速率进行15 min的离心，分离出血清1.5 ml，放于1.5 ml聚丙二醇脂试管内，放入-60 ℃冰箱保存，之后以放射免疫法检测2组的IGF1水平；以观察组血清IGF1中心值为基点，在中心值水平之上为高表达，中心值水平之下为低表达，将其分为高表达组(n=52)与低表达组(n=26)。miR-148b检测：同样抽取2组的清晨静脉血5 ml，放于无菌采血管内10 ml，在室温环境下静置30 min，之后以4500 r/min的速率施行10 min的离心处理获取血清过后，于-70 ℃环境下留存待检，检测miR-148b mRNA浓度与纯度，设计待测基因位点的聚合酶链式反应(PCR)扩增引物和单碱基延伸引物，依据20 μL模板以及50 μL反应液构建PCR反应体系，扩增程序：97 ℃、92 ℃、63 ℃分别进行6 min、14 s、40 s，共持续开展50个循环，63 ℃时采集荧光；反应体系：2×μBry一步法RT-qPCR缓冲液，5 μL、正向引物10 μm，0.4 μL、反向引物，10 μm，0.4 μL、超级酶混合物，0.2 μL RNA模板，0.6 μL、无核糖核酸酶水，3.4 μL，实时荧光定量PCR仪测定其表达水平；miR-148b mRNA水平表达定义：观察组血清miR-148b mRNA相对表达量/对照组miR-148b mRNA相对表达量≥0.5为miR-148阳性，反之则为阴性，分别纳为阳性组(n=35)、阴性组(n=43)。

1.3 观察指标

(1)2组IGF1与miR-148b mRNA表达水平对比。(2)IGF1、miR-148b mRNA表达水平与临床病理特征的关系，病理特征包括年龄、性别、吸烟史、肿瘤部位等，探究两者与NSCLC患者各项病理特征的关系。(3) IGF1、miR-148b 表达水平与NSCLC患者预后的关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 2组IGF1与miR-148b mRNA表达水平对比

观察组IGF1表达水平高于对照组，miR-148b mRNA表达水平低于对照组，有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 2组IGF1与miR-148b mRNA表达水平对比

2.2 IGF1、miR-148b mRNA表达水平与临床病理特征的关系

NSCLC患者IGE1、miR-148b表达与性别、年龄、吸烟史、肿瘤部位无关，与淋巴结转移、TNM分期、组织分化程度、肿瘤大小有关(P<0.05)。见表2。

表2 IGF1、miR-148b mRNA表达水平与临床病理特征的关系/例

2.3 IGF1、miR-148b表达水平与NSCLC患者预后的关系

IGF1高表达患者3年生存率低于IGF1低表达者，miR-148b阴性表达患者的3年生存率低于miR-148b阳性表达者，有统计学差异(P<0.05)。见图1。

图1 IGF1和miR-148b表达与患者生存关系的曲线分析

3 讨论

NSCLC在临床的发病率处于较高水平，具有极高的致死率[7-8]。NSCLC的发病机制较为复杂，与肺部慢性疾病、环境、家族史等密切相关。由于NSCLC在发病早期无典型表现，加之极易出现远处转移等情况，从而导致早期诊断较为困难，致使大部分患者经临床确诊时已处于中晚期，已失去根治性手术治疗机会，整体生存率较低[9-10]。因此，临床需探寻一快速鉴别诊断NSCLC的手段，以提高早期诊断率，指导临床进行规范化治疗，延长患者生存周期。

IGF1多作为一种生长激素，在几乎所有细胞内发挥生物学作用，广泛表达于多种类型的细胞表面，可通过调节癌细胞对内皮的粘附性与血管生成，进而影响肿瘤的侵袭能力[11-12]。而当IGF1过度表达时，细胞会向恶性表型转化，当IGF1与靶细胞上的受体结合后，将会引发下游信号的级联反应，触发蛋白合成等通路，在不同的肿瘤疾病的发生发展中扮演重要角色。miR-148b在调节细胞基因表达层面存在重要功能，且在肿瘤的发生发展中亦至关重要[13]。本研究结果显示，观察组IGF1表达水平高于对照组，miR-148b mRNA表达水平低于对照组，提示NSCLC患者机体内IGF1呈高表达，miR-148b呈低表达。闫明等[14]研究显示，非小细胞肺癌组IGF1蛋白高表达率高于癌旁对照组，与本研究结果类似。分析原因在于IGF1表达水平较高将会增加肿瘤发生的易感性，并会促使肿瘤过度生长；而miR-148b基因对启动细胞增殖发挥重要抑制作用，并可促使细胞凋亡，故呈低表达水平[15]。本研究结果显示，NSCLC患者IGE1、miR-148b mRNA表达与淋巴结转移、TNM分期、组织分化程度、肿瘤大小有关，提示临床需对以上病理特征予以高度重视。本研究结果还显示，IGF1高表达患者3年生存率低于IGF1低表达患者，miR-148b阴性表达患者的3年生存率低于miR-148b阳性表达患者，提示IGF1高表达与miR-148b阴性表达与患者预后联系密切。其原因在于高水平的IGF1会增加细胞内有丝分裂信号传导，增加细胞内DNA损伤，从而增加恶性转化发生风险，进而加快患者病情发展，不利于预后。而miR-148b的阴性表达将无法发挥阻断肿瘤血管生成的生物学作用，故患者预后较差。同时，仍需注意的是，本次研究尚存在纳入样本量较少等不足，可能会对本次研究结果的可信度造成一定的影响。因此，后续临床还需不断的完善试验设计，继续扩大样本量的纳入，以此进行更深层次的探究。

综上所述，IGF1与miR-148b表达水平与NSCLC患者的预后密切相关，临床需予以高度重视，IGF1与miR-148b可作为早期诊断NSCLC的重要参考。