一例猪蓝耳病、传染性胸膜肺炎与猪瘟混合感染的诊治分析

●张孝忠（青岛市即墨区农业农村局 山东 青岛 266200）

1 发病情况

即墨市某生猪养殖场于2021年10月发现经产母猪染病症状，据养殖户反映，10月下旬母猪出现发热畏寒症状，养殖户对其进行体温测定，温度达41℃，病猪呼吸急促，被毛粗乱，出现便秘和腹泻交替，养殖户对其进行强力霉素、恩诺沙星口服用药，连续用药3 d 症状有所缓解，但病猪皮肤出现红色斑点，随后耳尖部、腹部、肢蹄末端出现青紫色斑块，而保育猪舍也有类似发病症状，养殖户对其进行板蓝根注射液治疗，效果不佳，经产母猪出现一例死亡。遂前来就诊。

2 临床症状

病猪精神沉郁，嗜睡，食欲锐减，出现厌食症状，体温升高到41.5℃，感染的病猪出现明显的气喘、畏寒、发抖、扎堆现象。发病初期，粪便干燥有便秘症状，随后出现腹泻，粪便中夹杂黏液，伴有明显的恶臭味。部分病猪有呕吐症状，口腔内有泡沫样分泌物，夹杂血液。病猪卧地不起，驱赶时发现无法正常行走，伴有痛苦呻吟，四肢运动失衡，出现共济失调，病情不严重的生猪呈犬坐姿势。感染病猪被毛粗乱，其耳尖、耳根、背部、臀部、四肢皮肤出现红色出血点，并有紫色斑块，眼睑肿胀，鼻腔内黏性分泌物增多，病猪消瘦[1]。

3 病理解剖

剖检3 例病死猪，病死猪的内脏组织病理变化相似。病猪胸腔内有积液，下颌淋巴结、腹股沟淋巴结均出现肿大、出血症状，切面如黑白相间的大理石花纹。病猪胃底黏膜有出血症状，直肠黏膜内有许多溃疡病变，呈纽扣状，回肠和盲肠内有坏死组织。膀胱黏膜有弥散性出血症状。肾脏表面有许多出血斑，肾盂出血。病猪脾脏肿大，质地变软，表面有出血点，类似丘疹，也有病猪脾脏上有暗紫色出血点。病死猪的喉头黏膜有许多出血点，肺部体积变大，充血明显，颜色呈暗紫色，病变肺部和健康部位分界明显，病变肺部质地变脆，切面颜色呈紫红色，肺间质内有许多血色胶状物质渗出，气管和支气管内有许多出血样渗出物，夹杂大量泡沫。肝脏肿大、充血。

4 实验室诊断

4.1 涂片镜检

无菌条件下采集病死猪肺脏或肝脏组织，制作涂片，结晶紫溶液染色60 s，水洗，碘液染色60 s，水洗，95%乙醇脱色15～30 s，直至无紫色脱落，水洗，沙黄复染液染色60 s，水洗，染色结束后置于显微镜下观察。镜下发现病原微生物呈红色，两极染色的杆菌，呈单个或成对存在。因此，病猪存在革兰氏阴性细菌感染。

4.2 分离培养

无菌条件下采集病死猪心肌、肺脏或脾脏组织，接种到普通琼脂平板和血琼脂平板上，置于37℃ 10%二氧化碳培养箱内培养16～24 h，发现血琼脂平板上长出乳白色的菌落，并在周边有溶血症状，而普通琼脂平板上无任何菌落。然后从血琼脂平板选取单菌落，再接种到巧克力琼脂平板上，相同培养条件下发现培养基表面长出圆形、灰白色的菌落。

4.3 生化鉴定

4.3.1 糖发酵试验不同细菌的产酸产气特点不同，可以作为诊断依据。

在pH 7.4 的酚红肉汤基础培养基内分别加入葡萄糖、果糖、麦芽糖、甘露醇、鼠李糖、山梨醇，然后加入适量的菌源（培养24 h），在35℃条件下培养2 h 后若细菌可产酸，培养基颜色会从粉红色变为淡黄色，若细菌产气，液体培养基内会有气泡，葡萄糖、果糖、麦芽糖、甘露醇的鉴定结果均为阳性，而鼠李糖、山梨醇为阴性。

4.3.2 VP 试验将菌液（培养24 h）接种到葡萄糖蛋白胨溶液内，35℃条件下培养6 h 后加入适量的VP 试液甲液，再混入乙液，摇匀发现试剂颜色不变色，35℃条件下培养4 h 后仍无颜色变化，表明VP 试验为阴性。

4.3.3 ONPG 试验将菌液（培养24 h）接种到ONPG 肉汤内，35℃条件下培养20 h 后鉴定结果显示肉汤颜色为亮黄色，表明ONPG 试验结果为阳性。

4.3.4 尿素酶试验将菌液（培养24 h）接种到含尿素酶的培养基内，35℃条件下培养2 h 后鉴定结果显示培养基颜色为粉红色，表明尿素酶试验结果为阳性。

4.3.5 甲基红试验将菌液（培养24 h）接种到葡萄糖磷酸盐蛋白胨溶液内，35℃条件下培养48 h后加入几滴甲基红指示剂，试剂颜色为桔黄色，表明甲基红试验结果为阴性。

上述生化试验可推测该病原菌为阴性，与猪传染性胸膜肺炎病原菌的生化鉴定结果相符。

4.4 PCR 检测

根据诊断经验来看，猪瘟是一种不受生猪品种、年龄和性别的病毒性疾病，临床上以发热、抽搐、运动失调、皮肤表面有多处红色出血点或出血斑为主[2]。猪蓝耳病是一种主要感染哺乳仔猪和妊娠母猪的病毒性疾病，临床上以发热、腹泻、运动失调、耳尖和体表多处皮肤有紫色斑块为主[3]。从病猪发病症状和病理解剖特点来看，病猪可能存在病毒感染，需要进一步的检测提高诊断准确率。

无菌条件下采集病猪心肌、肺脏等病变组织，在液氮条件下加入Trizol 研磨成匀浆，加入适量氯仿分层后置于12 000 g 离心15 min，将上层水溶液转移到新离心管内，加入等量的异丙醇，颠倒混匀，12 000 g 离心10 min 弃上清，加入适量75%酒精，悬浮沉淀，12 000 g 离心10 min 弃上清，吸弃干净后彻底干燥，加入少量DEPC 水溶解沉淀，-80℃条件下保存。病猪RNA 提取后需要及时反转录，然后分别通过猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒进行RT-PCR 扩增，试验过程中同时做好阴性和阳性扩增。猪瘟病毒单重荧光PCR 检测试剂盒、猪蓝耳病病毒单重荧光PCR 检测试剂盒结果若Ct值为0 则为阴性，Ct 值≤35 为阳性，35 ＜Ct 值≤40 为可疑样本。试验检测结果显示为猪瘟阳性、猪蓝耳病阳性。

鉴于涂片镜检结果为革兰氏阴性，结合病猪临床上的发热、呼吸困难、气喘、皮肤发绀症状，病猪可能存在胸膜肺炎放线菌感染，可通过猪传染性胸膜肺炎放线杆菌单重荧光PCR 检测试剂盒进行检测，采集病料，提取病料DNA，加入荧光PCR 反应液，进行RT-PCR 扩增，若Ct 值为0 则为阴性，Ct 值≤35 为阳性，35 ＜Ct 值≤40为可疑样本，试验检测结果显示为猪传染性胸膜肺炎阳性。

通过RT-PCR 检测结果显示，病猪存在猪瘟、猪蓝耳、猪传染性胸膜肺炎混合感染。

4.5 药敏试验

采用纸片扩散法将分离纯化的病原菌均匀涂布在三糖琼脂平板上，将不同药敏纸片分布到平板上方，置于37℃培养箱内孵育14 h，结果显示，该病原菌对强力霉素、庆大霉素、恩诺沙星、四环素4 种抗菌药物存在耐药性，对阿莫西林、氯霉素、链霉素3 种抗菌药为中度敏感，对氟苯尼考、头孢噻肟钠2 种药物高度敏感。

5 药物治疗

由于猪瘟病毒的传播快，病猪可以先停用所有药物，紧急免疫高效猪瘟细胞苗，肌肉注射剂量为预防的3 倍，建议使用一次性注射器或一猪一针，以防不合理使用注射针头造成交叉污染。

根据药敏试验结果显示，病原微生物对氟苯尼考、头孢噻肟钠具有高敏性，肌肉注射氟苯尼考注射液，注射量为0.1～0.2 mL/kg·bw，每日1～2次，连续注射2～3 d。同时健康猪群内拌入头孢噻肟钠粉末，每1000 kg 饲料添加量为100 g，连续饲用3～5 d。

病猪和健康猪群饮水中分别添加适量的电解质和维生素C，连续饮用1 周。

6 防控措施

6.1 严格人员车辆进出

猪场出入口设立专门的人员、车辆消毒区域，人员可采用紫外消毒方式，车辆使用喷淋+地表消毒池的方式进行消毒，司机未消毒前若下车需要佩戴好一次性鞋套。

6.2 规范引种

猪场最好采用自繁自养的方式，若需引种，切勿从疫区引种，引种前需要做好流行病和血清学调查，生猪引种后需要进行至少30 d 的隔离，然后健康检疫、疫苗免疫、消毒驱虫后才可进入生产区。

6.3 控制生物媒介

夏季做好蚊蝇预防，猪舍周边可以种植薄荷来驱蚊，并在出入口和窗口下方点蚊香驱蚊，或放置紫外线灭蚊灯。

6.4 科学防疫消毒

采用全进全出管理方法，猪场入口、生产区、管理区、生活区、隔离舍做好定期消毒工作，可选用2%烧碱、3%来苏儿、10%石灰乳等消毒液进行每周1次的消毒。

6.5 定期接种免疫

猪瘟防治：每年春、秋季分别肌肉接种猪瘟兔化弱毒疫苗，1 mL/头，注射后96 h 可产生免疫力。猪场有发病时可以在仔猪断奶后接种、驱虫，母猪产前45 d 接种1次。

猪蓝耳病防治：仔猪23 日龄、28 日龄分别接种高致病性蓝耳病疫苗，2 mL/头，母猪产前30 d 接种1次，4 mL/头。

猪传染性胸膜肺炎防治：仔猪35 日龄、63日龄分别接种猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，2 mL/头，母猪产前30 d、15 d 分别接种1次，2 mL/头。

7 总结

猪群中如有病猪有精神和食欲不振，发热，嗜睡，腹泻或呕吐，眼睑和鼻腔分泌物增多等症状，养殖人员需要及时对病猪进行隔离，这就要求中小规模或散养户在猪场布局中设有隔离舍，发病过程中要做好闭群和消毒管理，防止病原微生物扩散传播。对于猪瘟、猪蓝耳病这类致死率较高的病毒性疾病，建议猪场进行至少6个月的闭群管理，同时定期对生猪进行实验室检测和疫苗接种，建立阴性后备母猪群。无论是发病还是日常管理期间，养殖户都需要制定科学的生物安全防治措施，以预防为主，切勿随意用药加剧细菌耐药性。