乙肝表面抗原定量与HBV⁃DNA相关性的研究进展

王光彦 慕晓琼 曾昭杰 庞建丽 李春燕

当前，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus）感染已经成为威胁人们生命健康的一个重要疾病，成年人乙肝病毒感染中，约90%～95%患者为急性病毒性肝炎患者，仅5%～10%是因宿主免疫功能缺陷而出现慢性感染［1⁃2］。慢性HBV 感染传染性强弱与HBV DNA 水平高低相关，而且随着HBV DNA复制水平变化，乙肝疾病也会发生发展，且临床可根据HBV DNA 水平评估疾病预后情况。［3］HBsAg定量检测在疾病诊治、治疗方案、预后评估中具有重要指导意义［4⁃5］。本文通过分析HBsAg 定量检测与HBV DNA 相关性，对其研究进展综述分析。

1 乙肝表面抗原的定量检测技术及临床意义

1.1 乙肝表面抗原定量检测技术

HBsAg 为HBV S 基因表达的包膜蛋白质，包括不同相对分子质量组分，包括大蛋白（L 蛋白）、中蛋白（M 蛋白）、小蛋白（S 蛋白）。HBsAg 合成与HBV DNA 复制分属不同通路，其形成、分泌过程比较复杂，当前临床尚未明确［6］。HBV 感染者的血液中有三种不同形式的HBsAg，三种最终形成HBsAg 复合体，HBsAg 是具有完整病毒颗粒包膜化表面蛋白的主要组成部分，也为大量球状或丝状亚病毒颗粒基本成分［7⁃8］。高病毒载量的乙肝e 抗原阳性感染患者中，其中完整病毒颗粒亚病毒颗粒比例更高。而在低病毒载量的HBeAg 阴性慢性感染患者中，其中完整病毒颗粒亚病毒颗粒比例相对较少。血清HBsAg 水平下降，这表明完整病毒复制下降，亚病毒颗粒减少表明mRNA 翻译水平与HBVcccDNA 转录水平下降。

世界卫生组织定义中，慢性乙肝病毒感染是患者血清中HBsAg持续存在至少超过6个月的状态，急性HBV感染为血中一过性出现HBsAg［9］。HBV感染者血液中可检查中三种不同形态HBsAg，分别存在于长度各异宽度20 nm 的杆状亚病毒颗粒表面的HBsAg、直径20～22 mm 球形亚病毒颗粒表面HBsAg、直径42 nm的完整病毒颗粒表面的HBsAg［10］。

上世纪90年代，我国医学检验技术得到快速发展，多项新检验技术被临床用于HBsAg 检测中，而且HBsAg 检测的特异度、灵敏度水平也得到明显提高［11］。其中应用最广泛的是酶联免疫吸附试验，虽然该实验仅能做半定量或定性，但具有特异性强、灵敏度高的特点，对HBsAg 检测灵敏度可达到0.5 ng/mL，而且操作中不需要应用昂贵设备，操作简单方便，该方法仍为临床实验室普遍应用的检测方法。当前临床应用的HBsAg 检测方法中微粒子酶免疫分析法、化学发光微粒子分析法应用可提高检测准确性，这些方法也是当前临床用于HBsAg 定量检测的先进技术，被临床广泛应用［12］。蛋白质芯片检测表面抗原定量结果基本与酶联免疫吸附法检测结果一致，但该检测方法操作简单方便、快捷。而且研究结果显示，直接通过软件计算抗原含量，可以做到定性定量，适合用于患者疾病治疗效果的观察［13］。液相芯片技术检测HBsAg 方法灵敏度高、准确度高，而且具有可重复性、灵活性好的特点，仅采用微量样品检测，最高检测浓度可达到16 000～32 000 pg/mL。

1.2 定量检测HBsAg 的临床意义

欧洲肝脏研究学会研究指出，慢性乙型肝炎最佳治疗效果：乙型肝炎e 抗原阳性及e 抗原阴性的慢性乙型肝炎患者，实施有效抗病毒治疗后，持续HBsAg 转阴或血清学转变，不论接受哪种抗病毒治疗后代偿性肝病病情治愈，并停止治疗。这表明定量检测HBsAg 可用于慢性乙肝抗病毒治疗疗效、决定疗程及预测评估血清学转换［14］。张晓艳等［15］研究中，研究组患者经恩替卡韦结合长效干扰素α 治疗乙型肝炎e 抗原阳性慢性乙肝后，HBsAg 转阴率为6.00%，血清学转阴率4.00%，HBV DNA 转阴率86.00%，证实HBV DNA 水平监测评估恩替卡韦结合长效干扰素α 治疗乙型肝炎e 抗原阳性慢性乙肝效果具有显著意义。此外，临床还可根据HBsAg 水平及转阴率对用药治疗效果进行评估，有利于尽早发现耐药菌株。

2 HBV DNA 定量检测技术和临床意义

2.1 HBV DNA 定量检测技术

HBV⁃DNA 定量为乙肝的检查项目之一，其检测是主要检测乙肝病毒在血液中的含量。从分子水平研究是当前临床现金技术，DNA 重组技术发展，获取大量高纯度DNA 片段供应制备探针，杂交检测待检样品，尤其应用于病毒性肝炎检验中临床意义显著。HBV⁃DNA 分子杂交斑点试验为adr 亚型HBV—DNA 做探针与病人血清中的HBV—DNA 或片段实施分子杂交，最后实施放射自显影计算，检测血清中HBV⁃DNA 先进技术。其具有检测结果可靠、准确、敏感度高的特点。

2.2 HBV DNA 定量检测技术的临床意义

一方面，可以弥补定性检测不足。临床中HBeAg 阳性患者往往被认定为传染性强，但部分的HBeAg 阴性的乙肝患者是因乙肝病毒前C 区变异而导致，会导致HBeAg 表达缺失，感染不表达HBeAg 的HBV 突变，或野生型HBV 在体内突变为优势株而产生严重后果，容易出现暴发性肝炎。此时采用ELISA 等定性检测抗原或抗体，不能准确反映病毒水平，也不能评估传染性大小，对于临床治疗，可决定是否需要抗病毒治疗就无指导意义。而核酸定量技术可敏感检测肝炎患者病毒血症水平，评估机体病毒感染情况，具有重要临床意义。

二方面，提供抗病毒治疗的依据及判断疗效。乙肝抗病毒治疗为乙肝防治的根本措施，临床常用的干扰素、拉米夫定。传统疗效判断多依据肝功能、临床表现、HBV DNA 转阴、肝脏病理学变化，而病毒定量可客观反映病毒血症水平，指导抗病毒治疗效果，乙肝经抗病毒治疗后，血清中病毒数目<50/μL 时，相应症状消失，可以认为病情显著改善。这表明定量检测用于评估抗病毒治疗效果显著。

3 HBsAg 与HBV DNA 定量关系

3.1 HBsAg 与HBV DNA 相关性

王涛等［16］研究表明，慢性乙型病毒性肝炎患者血清HBsAg 水平越高，HBV DNA 水平高，肝功能水平差。辛菊梅［17］研究中，分析慢性乙型活动性肝炎患者、代偿期肝硬化患者、失代偿期肝硬化患者的HBsAg 水平与HBV DNA 水平。随着肝硬化程度恶化加重，HBsAg 水平与HBV DNA 下降，三组HBsAg 水平与HBV DNA 正相关，HBsAg 水平和HBV DNA 与肝硬化严重程度负相关。

HBV⁃DNA 为病毒复制的基础，是乙肝病毒复制最直接的指标。只要查到HBV⁃DNA，即可证实被检样本中存在HBV，有临床症状者为乙肝，无临床症状者为乙肝病毒携带者［18］。慢性乙肝患者血清HBV⁃DNA 载量水平直接体现体内病毒血症水平。HBV DNA 水平是评估HBV 复制活动的一个重要标志物，临床研究发现慢性HBV 感染者肝细胞中小球形颗粒输出与血清HBV⁃DNA 基本一致。HBsAg 水平会随着HBV⁃DNA 变化而变化，一般HBeAg 阴性的慢性肝炎低复制患者，HBsAg 水平会明显高于基线值，这表明存在慢性乙型肝炎再激活情况［19］。但也有研究指出，血清中HBsAg 与HBV复制水平不一定存在一致性。一般临床研究中提出，HBV 感染时，外周血中HBV DNA 为病毒复制最直接的体现，可用于评估病毒水平与病毒传染的强弱性［20］。而HBsAg 作为HBV 感染标志，关于HBsAg 与病毒复制的相关性研究较少，而且临床尚无明确定论。当前临床研究中提出，血清中HBsAg与HBV DNA 之间为正相关，HBsAg 水平可作为病毒复制情况评估的一个直接指标。刘杨等［21］研究中提出，分析慢性乙肝病毒不同分阶段血清HBsAg水平与HBV DNA 载量的相关性，结果表明，慢性乙肝病毒感染患者血清HBsAg 水平与HBV DNA 载量水平呈正相关性，因此临床可在治疗前后监测HBsAg 水平，评估临床疗效。

也有研究［22］提出，血清HBsAg 水平与HBV DNA 无相关性，临床分析可能是因HBV 复制周期中，HBsAg 合成复杂、持续感染的积累、变异等。慢性HBV 感染患者体内，HBsAg 合成量明显高于需要组装完整病毒量，血清中HBsAg 中主要为不含病毒核酸的管形颗粒、小球形颗粒，浓度水平为50～300 μg/mL。因此，临床根据HBsAg 定量评估慢性HBV 感染者的HBV 复制状态仍存在一定的局限性。

3.2 影响HBsAg 水平与HBV DNA 相关性的主要因素

3.2.1 HBeAg 状态

HBeAg 阳性慢性乙型肝炎患者中，HBsAg 水平与血清HBV DNA 与肝组织中共价闭合环状DNA水平与总HBV DNA 正相关。何龙芳等［23］研究中，HBeAg 阳性患者的HBV DNA 阳性率与平均拷贝数均高于HBeAg 阴性患者，HBsAg 阳性患者的平均拷贝数高于HBsAg 阴性患者，HBeAg 阳性、HBsAg阳性与HBV DNA 水平之间成正相关性，临床可根据HBeAg、HBsAg 水平评估HBV DNA 复制水平，尤其是高水平HBeAg 与HBV DNA 密切相关。

3.2.2 HBV 感染阶段不同

朱霞［24］研究中，1 339 例未经抗病毒治疗慢性HBV 感染患者，根据HBV 感染自然史，分为四组：免疫耐受期、免疫清除期、低复制期、在活动期，分析不同阶段HBsAg 定量之与HBV DNA 载量相关性，结果表明HBV 感染自然史的不同阶段，HBsAg定量与HBV DNA 载量仅免疫清除期间为正相关（r=0.552，P<0.05）。

3.2.3 HBV 基因型不同

HBV 中存在不同基因型，而不同基因型对乙肝患者病程、临床结局、抗病毒治疗效果均具有一定的影响。张欣等［25］研究中，HBeAg 阳性慢性HBV感染孕妇血清HBsAg 滴度与HBV DNA 水平呈正相关（r=0.754，P<0.05）。这表明HBeAg 阳性慢性HBV 感染患者的血清HBV DNA 水平与HBsAg 水平呈正相关。

4 总结与展望

随着HBsAg 定量检测技术进步发展，HBsAg定量检测结果精确性明显提高，高载量HBV DNA与HBsAg 定量水平有直接相关性，可用于评估患者体内病毒复制、传染情况。将其作为一项重要的乙肝病毒感染疾病诊断指标，对于后期疾病治疗与患者预后改善具有积极意义。