生猪疫苗组合应用 “一针多防”的探讨

王海洲 王加众 李 英 司西波 王春平 杜福民

（1日照市畜牧兽医管理服务中心，山东日照 276800；2五莲县畜牧兽医服务中心叩官畜牧兽医站，山东日照 262300；3东港区石臼街道畜牧兽医站，山东日照 276800）

组合免疫,即将生猪的商品疫苗进行模块化组合,混合在一起注射的一种免疫方法。与以往的二价、二联、三联疫苗免疫的概念不同。如口蹄疫O/A二价灭活疫苗等产品不能被称作组合免疫,因为从本质上讲,该疫苗防控的是一种疫病；而猪三联(猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌)疫苗本身就是一种联苗,也不能被称作组合免疫。非洲猪瘟疫病在我国发生前,受疫苗生产设备及工艺的影响,多种不同疫苗组合使用会产生较为严重的副反应,不同疫苗之间的相互作用也不是很清楚,制约了疫苗组合免疫的推广应用。当前,基于疫苗厂家设备的提升和疫苗制备工艺的改进,统一工艺标准生产的疫苗品质越来越高,为疫苗之间的联合使用提供了可能。目前根据疫苗的性状、免疫程序、疫苗间的相互作用及猪场的实际情况,将不同的活疫苗和灭活苗混合注射,既不影响疫苗免疫抗体的产生,又大大减少了疫苗免疫次数及抓猪的劳动强度,将“一针多防”灵活地应用于生猪养殖的免疫,是对传统免疫方法的颠覆性突破。

1 生猪疫苗组合免疫应用的背景

1.1 减少免疫次数的需要

生猪养殖过程中,需接种的常规基础疫苗有猪瘟疫苗、口蹄疫疫苗、猪伪狂犬病疫苗、猪繁殖障碍与呼吸综合征(猪蓝耳病)疫苗等,每年每种疫苗均需进行3～4次免疫、一共需要免疫12～16次；再加每年需免疫猪乙型脑炎疫苗1次、猪传染性胃肠炎疫苗和猪流行性腹泻病疫苗各2次。依此计算,母猪群普免疫苗基本在15～21次/年。每次疫苗免疫仅抓猪,都需要耗费大量的人力,并会对猪群造成很大程度的应激。马睿麟[1]开展猪多种疫苗不同组合免疫的研究发现,猪O型口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病和猪流行性腹泻三联等4种疫苗分点同时注射,疫苗间相互不影响免疫抗体的产生。通过对40余万头次生猪疫苗混合免疫的追踪调查发现,几种疫苗同时免疫未增加免疫副作应,临床使用安全。疫苗的分点注射虽然减少了免疫次数,但具体工作量并没有减少,迫切需要突破技术壁垒将疫苗混在一起进行组合免疫。

1.2 降低疫病风险的需要

近年来,生猪养殖饱受非洲猪瘟疫情的威胁,非洲猪瘟病毒是一种高度接触性的病原,通过有效隔断的方法可以将其拒之门外,但对于生猪养殖来说,口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病等常规疫病的防控也很重要[2]。这些病原可以通过空气飞沫、气溶胶传播,即便养猪场采取了如隔离非洲猪瘟病毒那样的生物安全措施,也不能杜绝猪群发病。但每次免疫抓猪会增加人与猪的接触机会,增加猪的应激,增大非洲猪瘟病毒通过接触传播的风险。因此,以前高频次的免疫程序和方法需要改变,而唯一的办法就是将一些可以组合的免疫针剂变为“一针多防”。不断优化免疫程序,在不影响免疫效果的前提下,尽量减少免疫次数。

1.3 组合免疫对疫苗工艺改进及佐剂研发提出更高要求

生猪组合免疫的各种疫苗需做到注射后无副反应,且每批次疫苗的质量必须保证其稳定性和可靠性。一般采用鸡胚培养工艺生产的疫苗,在使用中存在生物安全隐患、副反应大、质量不稳定等问题[3,4]；采用兔源组织工艺生产的猪瘟脾淋苗和乳兔组织苗,产量小、成本高、易污染,且每头份猪瘟组织苗不低于150 RID含毒量是每头份猪瘟细胞苗不低于750 RID含毒量的1/5,试验验证细胞苗的免疫效果优于脾淋苗[5,6]；贴壁细胞培养工艺生产疫苗,存在非批量生产、容易导致产品质量不均匀及难以对同批生产的疫苗进行生产和质量控制等难题。利用血清培养的细胞疫苗进行组合免疫副反应会增强,副反应可能会有叠加效应[7]。综上分析,生猪传统的鸡胚疫苗、脾淋苗和乳兔组织苗以及近年来使用的转瓶贴壁细胞培养疫苗生产工艺都无法满足组合免疫对疫苗的高质量要求。生猪组合免疫的各种灭活疫苗需做到具有组合免疫活疫苗稀释液的功能,且不会对活疫苗造成干扰。采用普通油佐剂制作的灭活疫苗不能稀释组合疫苗的活疫苗,且油佐剂副作用引起的刺激,能够引发生猪机体炎症反应[8]。要想实现生猪疫苗组合免疫,必须改进生产工艺,提高疫苗质量,消除疫苗副反应,研发猪灭活疫苗辅助抗原应答、调节免疫反应的新型佐剂。并使新的疫苗佐剂既能作为活疫苗的稀释液使用,又不会对组合疫苗造成不良影响。

2 生猪疫苗组合免疫的研究进展

2.1 不同疫苗的混合注射

传统防疫猪病的方法是每种疫苗都须单独注射,且有的疫苗还配备专用稀释液,免疫日期一致的也须同时分点注射。组合免疫颠覆了传统的防疫观念,生猪免疫用活苗和活苗、灭活苗和灭苗活、活苗和灭活苗都可根据需要混在一起一针注射。张莉[9]用圆环病毒2型和猪肺炎支原体灭活疫苗同时分点联合免疫和混合免疫14日龄和28日龄仔猪,结果表明,圆环病毒2型和猪肺炎支原体灭活疫苗既可单独使用,也可联合或混合免疫,其相应抗体产生速度、2种疫苗之间相互干扰程度低,且安全有效,免疫效果与分开免疫的差异均不显著。朱子健等[10]用猪瘟活疫苗(细胞源) 和PCV2灭活疫苗(LG株)混合,分点注射和混合注射35日龄仔猪,结果表明,2种疫苗可以同时注射或采用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗进行免疫,均不影响各自免疫抗体的产生。熊忠良等[11]对猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病以及猪喘气病等5种猪场常见猪病的疫苗按照不同组合采用混合注射、分点注射以及单苗注射等接种方式进行免疫试验。通过田间16轮(次)的重复试验和效果观察发现,3种不同免疫方式对猪群不同时期的抗体水平、日增重以及育成率等没有显著差异。刘国民[12]采用商业口蹄疫疫苗、猪瘟疫苗、猪伪狂犬病疫苗混合,并对混合疫苗的物理性状、疫苗毒价变化进行测定,对保育猪、后备母猪、经产母猪进行免疫。结果表明,混合疫苗物理性状稳定,免疫猪群产生了较高的抗口蹄疫、抗猪瘟、抗猪伪狂犬病的特异性抗体,特别是二免后抗体效价更高,且免疫持续期不受影响。大量的试验表明生猪疫苗组合免疫,疫苗混合后“一针打”,免疫副反应率比较低,免疫效果良好。一针多防,对上游疫苗企业的研发实力、产品品控提出了更高的要求。国内现有部分疫苗生产厂家生产的猪瘟活疫苗采用耐热冻干保护技术。同时,改进的灭活工艺及纯化技术,实现了活苗与灭活苗的联合免疫,并可实现2～8℃等温稀释猪瘟疫苗,避免了灭活苗与活疫苗的保存、运输时温差对病毒效价的影响[13]。

2.2 疫苗生产工艺改进及佐剂的研发为疫苗组合提供了保障

随着我国疫苗市场的迅速发展,疫苗生产技术正经历着从大规模转瓶培养动物细胞疫苗工艺向生物反应器培养动物细胞疫苗工艺的转变。生物反应器悬浮培养工艺,具有综合成本低、批量大、批次间差异小、所获得病毒抗原含量高等优点[14]。悬浮培养细胞法生产的疫苗组合起来唯一的安全隐患在于血清培养的疫苗副反应可能会增强。如用小牛血清培养的疫苗,单独使用副反应很小,但几种疫苗混合在一起,副反应可能会有叠加效应。崔龙萍等[15]采用低血清培养PK-15细胞和猪圆环病毒2型的方法对猪圆环病毒2型灭活疫苗的抗原效价进行了研究。结果表明,低血清培养的PK-15细胞生长更快且收获的抗原效价更高。马忠仁等[16]将贴壁培养型的细胞驯化成了全悬浮培养型细胞,在生物反应器中完成了无血清高密度培养工艺优化。低血清培养和无血清悬浮培养细胞生产的疫苗减少了因血清引起的被接种动物的过敏反应,极大地提升了兽用疫苗产品质量稳定性。疫苗除了主要成分的抗原外,通常还包括辅料、培养基残留等,而能够辅助抗原应答、调节免疫反应的佐剂更是其中重要的组成部分。景志忠[17]研发了一种水溶性复合免疫佐剂以及含有该佐剂的疫苗组合物,其中水溶性复合免疫佐剂获得了国家专利,用该佐剂稀释疫苗,可增强细胞免疫。刘月[18]发明了一种水溶性复合免疫佐剂,将口蹄疫油佐剂疫苗改为复方水佐剂灭活疫苗,为口蹄疫复方水佐剂灭活疫苗和冻干疫苗联合免疫的应用提供了保障。生猪疫苗生产工艺的改进和新型佐剂的研发打破了疫苗之间不能一起混用的技术壁垒,为疫苗的组合应用提供了技术保障。

3 生猪疫苗组合免疫的效果评价

3.1 组合免疫的优势

组合免疫能够减少猪的应激从而缩短出栏时间,节约饲料,还可以减少劳动力。此外,还可以减少疫病感染的压力。刘国民等[19]研究发现用口蹄疫疫苗直接稀释猪瘟疫苗和猪伪狂犬病疫苗,可以使猪伪狂犬病毒的抗体快速提升,保护率提高,猪瘟疫苗和猪伪狂犬病疫苗混合免疫有协同作用,油佐剂兼具抗原缓释的同时有免疫增强的作用。

3.2 组合免疫的禁忌

灭活疫苗的制备大部分用甲醛灭活工艺,可能甲醛会有残留,与活疫苗联用可能会使活疫苗失效；2种疫苗佐剂不同的,不能随意组合,建议疫苗企业采用水包油、油包水的双向佐剂,最外层是水相,可溶解冻干疫苗。疫苗佐剂作为稀释液与疫苗混合后不可改变疫苗和自身的理化性质。细菌性疫苗和病毒性疫苗混合要慎重,细菌疫苗可能会存在一些内毒素和杂蛋白,组合应用会引起免疫副反应,不能随意组合。不是所有的疫苗都能混在一起注射,要考虑科学性、合理性和安全性,有些疫苗的免疫时间不同,不能强行混在一起。

3.3 组合免疫不是越多越好

目前常用的疫苗免疫组合为“一针三防”,3种疫苗有猪瘟疫苗、猪伪狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗,也有支原体疫苗、猪瘟疫苗和猪伪狂犬病疫苗；“一针四防”是在前3个疫苗的基础上又加入了猪蓝耳病疫苗,目前临床使用的猪瘟疫苗、猪伪狂犬病疫苗和猪蓝耳病疫苗基本都是活疫苗,而猪蓝耳病毒属于典型的免疫抑制病毒,即使是减毒疫苗依然会对猪群的免疫系统造成损伤。猪瘟疫苗虽然效果非常好,但是作为活病毒进入猪体内依然会对猪群造成一定的损伤,一味地为了减少免疫次数而叠加疫苗免疫种类,可能会对疫苗的免疫效果造成影响。“一针多防”确实可以减少猪群的交叉感染,减少工作人员的工作量,但是也需要根据实际情况而定,如果当地疫病情况稳定,还应按以前的免疫程序和方式进行,只有当地猪群疫病不稳定的时候才考虑使用“一针多防”,而且多防也应该尽量以灭活苗混合为主,减毒活疫苗越少混合越好。

4 生猪的组合免疫程序

近年来,生猪需要免疫的疫苗越来越多,要想给生猪疫苗切实做“减法”,就必须在生猪基础免疫基础上做免疫程序的重构。即采取组合免疫,减少免疫次数,力求为生猪养殖科学减负,减少接触机会、降低免疫成本。进一步减少猪群应激及感染其他疫病的风险。

4.1 仔猪、育肥猪的免疫程序

口蹄疫疫苗和猪伪狂犬病疫苗的母源抗体持续时间很接近,都能达到9～10周,对于母猪没有使用组合免疫或者母猪免疫次数低造成猪伪狂犬病的母源抗体持续不到60～70日龄的猪只,需要在30～50日龄之间监测抗体水平,抗体水平不达标的需要把首免时间提前。推荐的仔猪、育肥猪免疫程序：28～35日龄首免猪瘟疫苗,60～70日龄二免猪瘟疫苗+首免口蹄疫苗+首免猪伪狂犬病疫苗,90～100日龄二免口蹄疫苗疫苗+二免猪伪狂犬病疫苗。

4.2 母猪的免疫程序

猪瘟疫苗、口蹄疫疫苗、猪伪狂犬病疫苗、猪蓝耳病疫苗均需免疫3～4次/年,常规疫苗免疫需要12～16次,此外再加猪流行性乙型脑炎疫苗、猪流行性腹泻病疫苗免疫等,母猪群普免基本在15～21次/年。而使用组合免疫,母猪群1年普免4次即可,全部可使用“一针三防”,至少可减少8次免疫。

5 小结

组合免疫是在尊重科学免疫程序的基础上,在田间一线应用层面对疫苗进行了二次开发,创新之处在于在使用层面上进行模块化组合。随着疫苗生产技术的进步,新型疫苗佐剂的研发应用,使更多的相同免疫时间的疫苗可以组合使用,猪场联合应用疫苗的趋势将会不断得到加强和发展。