母驴妊娠期胚胎超声变化

冯晓天，王时伟，许非帆，何良军

（塔里木大学 动物科学与技术学院，新疆 阿拉尔 843300）

驴性情温驯，耐粗饲，适应性强，抗病力强，且易于管理。目前人们逐渐意识到了驴产品的营养价值。国内外市场上对驴肉、驴皮、驴乳的需求越来越火爆［1-3］，导致驴的屠宰量越来越大，驴存栏量却不断下降［4］。

直肠B超作为一种安全、迅速、准确、直观的技术被广泛应用于动物繁殖中。妊娠检查通常也是驴规模化养殖场工作人员重要的工作内容之一，直肠检查和超声波检查是目前马属动物常用的妊娠检查手段，直肠检查一般需在配种60 d后进行；超声检查准确率较高［5］，确诊时间较晚。同时，由于经济和技术水平的影响，我国兽用B超并没有在规模化驴场普遍应用，也缺少相关专业人技术人员，对该方面诊断技术的研究也开展得比较少，尤其是在驴繁殖方面。通过B超检查能够有效判断母驴是否妊娠及准确的妊娠时间、是否患有子宫疾病等情况，从而及时进行治疗或者淘汰，以便于母驴科学化养殖管理，进一步提高母驴的繁殖效率和饲养效益［6-9］。

1 材料与方法

1.1 试验动物

5岁疆岳驴母驴2头，来源于塔里木大学动物科学与技术试验站。两头驴体高分别为125，130 cm，体质健康，营养状况良好，通过人工授精（具体步骤参考文献［10］）使母驴妊娠，采用直肠检查判断母驴的排卵时间。一头母驴排卵日期约为2021年9月1日，分娩时间为2022年8月12日；另一头排卵日期约为2021年8月25日，分娩时间为2022年8月6日。

1.2 主要仪器、设备

RKU10型全数字B型超声诊断仪（兽用），徐州市凯信电子设备有限公司制造，采用6.5 MHz直肠线性探头。

1.3 检查方法

与直肠检查方法类似，将直肠探头送入直肠至盆骨口，向下呈45°～90°，从子宫体分别向两侧子宫角滑行检查，缓慢移动并不断调整角度观察，探查到有清楚的图像为止。用手将B超放在母驴子宫上照射，对两侧子宫角和子宫全部进行扫描，观察B超影像中的妊娠特征。第一、二阶段每3 d检查一次，第三阶段每7 d一次，第四阶段每10 d一次。

2 结果与分析

2.1 第一阶段胚胎直径变化

母驴排卵后第14天，B超检查结果显示2头母驴均怀孕。排卵日记为第0天。从排卵后第14天开始，每3 d用B超观测胚胎的变化。妊娠母驴早期子宫超声图像宽度见表1，14～63 d胚胎B超图像见图1。

测量长度用两点直线法，子宫体横断面距离代表子宫体宽度，如图1C中的a、b。由于检查时图像常常不规则，宽度是在B超显示器上显示，利用B超仪本身的标尺对待测图像纵向最长距离进行测量（B超图片中可以看见测量部位和距离）。

由表1、图1可以看出胚胎14～63 d的变化。在第14天（13～15 d）首次检测到胚胎囊泡，1，2号母驴分别为26.3，24.4 mm，并且在第15.5天（14～17 d）胚胎囊泡固定之前是可移动的。在14～17 d，囊泡呈球形，平均生长速率为3.74 mm／d。17～23 d，囊泡呈三角型，平均生长速率为0.72 mm／d，然后以中等速率1.83 mm／d生长到第53天。在第21.5天（20～23 d）检查到胚胎，胚胎总是位于卵黄囊的腹侧，第24.5天（23～26 d）形成尿囊，并于第35.5天完成（32～38 d），在第36.5天（35～38 d）形成脐带。之后胚胎开始下降，在第42.5天完成（41～45 d）。在53～62 d子宫的生长速率继续提高，达到8.09 mm／d。

表1 妊娠母驴第一阶段子宫超声图像宽度Tab.1 W idth of early uterine u ltrasound images of 2 pregnant female donkeys mm

妊娠囊是超声首先观察到的妊娠标志。妊娠最初的图像表现为在增厚的子宫内见到一个无回声结构，即妊娠囊。在14～17 d妊娠囊检测到的形状为圆形，图1A、图1B代表第14，17天的卵黄囊，其直径分别为26.3，30.0 mm。20～23 d，图1C、图1D形状进一步发生改变，圆形的孕体囊（妊娠囊）进一步发育，形状从圆形或椭圆形变成不规则的三角形。这时由于孕体背部子宫壁增生，压迫孕囊，导致孕体囊呈三角形，孕体囊呈三角形时腔囊内可以隐约在囊泡底部看到胚胎，随后胚胎逐渐变大，并且始终位于卵黄囊的腹侧半球。卵黄囊的特点是一个亮回声环状结构，中间为无声回声区，位于妊娠囊内。图1的D～I小图代表尿囊变化的过程，尿囊大约在第24.5天（23～26 d）可以观察到，并于第35.5天完成（32～38 d），图1I表示的是在第36.5天（35～38 d）脐带（u）形成后的图像（第39天）。在尿囊发育的同时，胚胎本身从腹侧迁移到胚胎囊泡的背极，开始腹侧下降，同时也是脐带形成的开始。图1K表示胚胎（e）位置靠近腹面的底部，脐带（u）明显。图1的L～Q小图表示胚胎（e）进一步发育，发生迁移。所有这些方面的发展特征都与母马类似。

平均而言，在第14天左右可以检查到妊娠囊，最大直径为30 mm，检测到的形状为圆形，由于子宫张力的原因，在16～19 d时形状会进一步发生改变。在第21天左右，圆形的孕体囊（妊娠囊）进一步发育，形状会从圆形或椭圆形变成不规则的三角形。尿囊大约在第24天左右可以观察到，在第36天左右完成，在尿囊发育的同时胚胎本身从腹侧迁移到胚胎囊泡的背极。在第39天左右卵黄囊几乎退化，在第40天左右胚胎到达腹侧，60 d后胚胎发生迁移。

2.2 第二阶段胚胎变化

母驴胚胎66～99 d胚胎变化见图2。

图2 妊娠母驴69～99 d子宫B超图像Fig.2 B-ultrasound images of uterus on days 69-99 of pregnancy

在第60天后胚胎缓慢正常发育，胚胎开始从骨盆腔向着腹腔移动，在第69天左右每3 d 1次的B超检查往往观察不到胎儿影像，胎儿只能偶尔出现。从图2A和图2C可以看出，B超只能扫描出子宫上部，子宫底部的少部分区域没在B超影像中显示。为此对观察到次数与未观察到次数进行统计，结果见表2。在检查过程中，2只母驴此阶段的发育进行时间长度不一样，其中1号驴此阶段持续28 d，2号驴持续31 d。由于胎儿在子宫底部运动，有时能够进入B超的观测视野。由表2可以了解到，2号驴未观察到次数是14次，1，2号驴观察到的次数相差不大，约是未观察到次数的1／2。母驴妊娠B超图像常常观察不到胎儿的时间持续30 d左右。当可以连续观察到胎儿影像后，在第100天以后选择每7 d进行一次B超检查。

表2 母驴妊娠第二阶段胚胎观察次数统计Tab.2 Embryo observation times at stage 2 of pregnancy

2号驴在90 d后通过B超检查，可以明显观察到一些显著的特征，为说明显著特征，选择肋骨、头部、眼部，脐带、羊膜、脊椎等明显的B超影像。

2.3 第三阶段胚胎变化

母驴妊娠第二、三阶段胚胎特征见图3。

图3 母驴妊娠第二、三阶段胚胎特征Fig.3 Embryologic characterization at stage 2 and stage 3 of pregnancy

在第60天后胚胎发育缓慢，子宫开始从骨盆腔向着腹腔移动，从第100天开始，到第190天结束，大约持续90 d。此时期由于子宫扩张，整个子宫充满液体，胎儿附着的子宫角体积急剧增大，随着子宫生长，部分子宫角进入腹腔。在这个阶段，胎儿处于子宫角底部，B超图像显示，子宫角上部液体为黑色，无超声反射物。在子宫角的底部有灰色阴影，表面这里有一些超声反射物。

B超由于频率原因无法明显观察到影像，第75天时胎儿在子宫壁的底部，运动范围小，胎儿这个期间子宫缓慢移向腹腔底部，B超检查时探测深度不强，无法看到胎儿图像，如图2C。待子宫完全进入腹腔底部，直肠检查时可以感觉到子宫内胎儿的头部。

2.4 第四阶段胚胎变化特征

见图4。

图4 母驴妊娠第四阶段胚胎特征Fig.4 Embryonic characteristics at stage 4 of pregnancy

从子宫完全进入腹腔底部开始到母驴分娩结束，大约持续150 d。胎儿在子宫内继续发育生长，母驴腹部缓慢增大，在第250天左右胎儿的蹄部会在骨盆腔出现，直肠检查时可以清楚感受到胎儿的前肢。待胎儿进入骨盆腔，对母驴进行直肠20 cm检查时轻轻向下触摸就可以感受到胎儿的头部和前肢，也会明显感受到胎动。

3 讨论

目前在我国，兽用B超妊娠检查多用于牛、羊、猪等且技术较为成熟。2020年，陈童等［11］采用B超仪对羊进行妊娠检查，妊娠羊在（20～25 d）可以探查到子宫内的胚囊，30 d以后胚囊、胎体、胎心都较为明显，妊娠40～60 d容易观察到子叶结构。同时也能通过B超检查判断羊是否患有子宫积液和子宫蓄脓等常见的子宫疾病，这对提高羊繁殖效率具有重要意义。贾国慧等［12］采用B超仪检查奶牛早期胚胎的大小、子宫变化等，同时对奶牛妊娠诊断B超假象经典图例做出了较为详细的介绍，为奶牛的生产实践过程提供了借鉴。2014年意大利学者首次利用超声研究观测驴胚胎和胎盘在整个妊娠期的正常生长和发育，共测7头阿米塔驴，首次观察到胚胎，并对眼眶和主动脉直径进行了测定［13］。多数母驴在排卵后第11天若成功妊娠就可以观察到胚胎囊泡；但一般不建议过早进行检查，以防操作不当造成流产。检测到胚胎的概率随着第11天囊泡直径的增加而增加，在母马的另一项研究中，首次发现胚胎囊泡的时间从第11天到第14天不等［14］。在母马早期妊娠诊断上已证明，在妊娠第16天前胚胎囊泡具有很强的流动性，这种宫内运动可以增强子宫内膜和胚胎之间的代谢交换［3］，这似乎是维持母马妊娠所必需的，但在母驴上的研究尚未得到类似的结果。本次观测中在第15.5天（14～17 d）检测到囊泡减少流动，附着在子宫角，而母马子宫中同样情况通常发生在15～17 d［14］，母马在极少数情况下在第13天就会发生固定，膀胱直径和最大子宫张力的增加可能是固定的重要因素，从而阻止了囊泡的持续运动。

胚胎囊泡在早期生长速率非常迅速，在15.5天（14～17 d）胚胎囊泡固定之前，平均生长速率为3.74 mm／d；17～23 d平均生长速率为0.72 mm／d，相对缓慢；然后以中等速率1.83 mm／d生长到第53天。这与C.Meira等［15］的研究结果基本相似。母马妊娠第15.6天，囊泡呈球形，16～18 d囊泡呈椭圆形，第28天囊泡变得不规则。本研究中，母驴妊娠14～17 d囊泡呈球形，17～23 d囊泡呈三角形，第28天囊泡变得不规则，这与母马妊娠情况类似。

驴胚胎从腹侧到胚胎囊泡背极的上升发生在妊娠23～38 d，并且总是与尿囊的发育和卵黄囊的消退有关，与在母马上的报道［16］基本一致。随后胎儿下降到囊泡腹侧极（约在第42.5天完成）与脐带的形成相关，平均在排卵后36.5～42.5 d发生。以上这些妊娠发育方面的变化都类似于母驴［17］和母马［16］以前的报道。

母驴妊娠常常有一段时间不能通过B超检查到胚胎，在妊娠第一阶段的后期可以看到，胎儿位于子宫的底部，因为B超没有显示子宫底部，所以观测不到胎儿。这个阶段偶尔可见胎儿，并且观测到的胎儿都位于子宫底部，还在不停运动。猜测胎儿此时期从子宫底部的B超盲区进入了B超的可视范围。由于胎儿的运动，同一天观察同一只驴也会存在观察到和观察不到图像的情况；同时两只母驴第二阶段的持续时间不一样长，并且由于个体差异，导致观察次数不一致。另一个原因是本研究使用的B超探头频率为6.5 MHz，穿透力较低，超出探测极限，无法观察到胚胎；而且胚胎图像容易与子宫积液或者蓄脓混淆，易造成误判。贾国慧等［12］认为，奶牛妊娠期部分图像出现许多不规则黑色暗区或暗区，内有散在等回声光点（光斑），暗区也位于子宫角。导致此现象出现的原因主要是奶牛子宫炎或者是奶牛子宫积水，还有部分假象图主要是挤压空腔或者血管形成。孙学良［18］对患子宫疾病的母驴进行B超检查发现，子宫积液变成了无规则液性结构。郑艳玲等［19］也认为，通过B超诊断驴子宫积液时可见子宫角内有斑点状不规则强回声。因此，用B超仪检查时需要辨别此时期子宫积液与妊娠的区别。首先从大小上进行分辨，通过B超检查此时子宫宽度有110.0 mm左右，子宫积液常常比子宫宽度小。其次，通过B超检查液性暗区是圆形或近圆形强回声区（一般为纯黑色），在暗区周围有白亮的环形，子宫积液是无规则回声结构，上下无回声亮点。妊娠时只有孕侧子宫角变大，另一侧子宫角不会发生改变，母驴患有子宫积液时在两侧子宫角都会感觉有液体存在且大小不变。