饲粮中添加硒对母羊发情周期生殖激素的影响

黎 明，扎拉嘎，满 达，唐和斯，李云鹏，双 金*

（1.内蒙古农业大学，呼和浩特 010018；2.内蒙古圣牧高科牧业有限公司，呼和浩特 010010）

脂肪酸β-氧化在为卵泡细胞成熟和发育提供能量［1］的同时也产生了过氧化物、羟基自由基及过氧化氢等活性氧，生理水平的活性氧有利于卵泡细胞成熟［2］，但大量的活性氧可能会破坏线粒体的DNA和蛋白质，干扰线粒体功能并影响线粒体分布［3］。而且卵母细胞在氧化胁迫（由高浓度的活性氧引起氧化损伤）的情况下将产生大量的氧自由基，可能导致脂肪酸的过氧化反应，产生脂质过氧化氢、活泼醛类等过氧化产物。有研究认为，过氧化产物会破坏细胞的生物膜和核酸［2］。牛羊等大家畜卵泡细胞内脂肪酸含量较高，脂肪酸β-氧化仅能消耗部分脂肪酸，而剩余脂肪酸容易受到过氧化的影响［3］。硒是谷胱甘肽过氧化物酶的组成成分，体内适当含量时可消除脂质过氧化物的毒性作用，消除对卵泡细胞的迫害，促进卵泡发育。同时，黄体生成激素（LH）和卵泡生成激素（FSH）有利于卵泡的发育，即卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞层的形成［4］。雌激素（E2）和孕酮（P）是由卵泡颗粒细胞与卵泡膜细胞层共同参与完成的［4］。部分E2进入血液循环，丘脑下部和脑垂体对E2的低浓度产生反馈，分泌更多的FSH，刺激颗粒细胞，使得E2的分泌持续增加，最终达到排卵前的峰值，启动LH分泌，触发排卵。试验将小球藻活性硒和蛋氨酸硒、亚硒酸钠制成的富硒饲料添加剂添加于母羊饲粮中，探讨硒对母羊发情周期生殖激素的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 硒添加剂的制备

硒源：由有机硒和无机硒提供，其中有机硒由小球藻硒和蛋氨酸硒组成。小球藻硒元素净含量为2 000 mg／kg；蛋氨酸硒由L-硒代蛋氨酸提供，分子式为C5H11NO2Se，硒元素净含量为1 210.00 mg／kg；无机硒为亚硒酸钠，分子式为Na2SeO3，硒元素净含量为1.00%。

矿物质原料：其中有钙、硫、铜、锌等4种矿物质。钙由磷酸氢钙提供，分子式为CaHPO4·2H2O，钙元素净含量为23.26%；硫由元明粉（即无水硫酸钠）提供，硫元素净含量为22.53%；铜由硫酸铜提供，分子式为CuSO4·5H2O，铜元素净含量为24.94%；锌由硫酸锌提供，分子式为ZnSO4·H2O，锌元素净含量为36.00%。

维生素原料：由维生素E和维生素B7组成。

其他原料：其他原料由抗氧化剂、稀释剂和载体等组成。其中抗氧化剂为乙氧基喹啉，稀释剂为碳酸钙，载体为玉米面。

根据母羊繁殖需要选择硒源，确定矿物质原料和维生素原料添加量，制成富硒饲料添加剂，在母羊全价料中按1%比例添加。

1.2 试验动物

2～3岁蒙古羊母羊20只，体重为（40±3）kg，健康，膘情达到繁殖要求。将20只母羊随机分为2组，组间体重差异不显著。

1.3 试验设计

按照NRC标准（2007版）配制饲粮。对照组饲喂基础饲粮（要求把母羊饲粮营养水平进行计算调整）［5］，试验组饲喂含有1%富硒饲料添加剂的饲粮。试验期为36 d，其中预试期为15 d、正试期为21 d。饲粮组成及营养水平见表1。

表1 饲粮组成及营养水平（干物质基础）Tab.1 The com position and nutritional level of the base diet（DM）

1.4 饲养管理

母羊全期舍饲，每组一栏。每天上午和下午定量饲喂全混合饲粮（TMR）各1次，自由饮水。并认真观察母羊采食、反刍情况，发现异常羊只要查找原因并及时处置，做好记录。

1.5 样品的采集与制备

5 d的预饲期后给每只母羊肌内注射1 mL氯前列腺烯醇（PG），隔8 d再注射PG 1mL，6 d后给每只羊安装阴道栓，11 d后撤阴道栓并肌内注射孕马血清促性腺激素（PMSG）400 IU。每组随机选取6只母羊，在撤栓前1天及发情周期第1，10，20天采血。3 500 r／min离心10 min，分离出血清，置于-20℃冰箱中保存，待测。

1.6 测定项目

测定指标包括FSH、LH、E2和P，均用放射免疫分析法测定（试剂盒来自宝信生物科技有限公司）。

1.7 数据的统计分析

数据采用单因子方差分析（期间）和配对重复观察值相等t检验（组间），均值的多重比较用邓肯氏法。

2 结果与分析

母羊发情周期内生殖激素测定结果见表2。

2.1 日粮中添加硒对母羊血清中E2含量的影响

见图1。

由表2、图1可知：日粮中添加硒的试验组母羊血清E2含量除了撤栓前1天显著高于对照组母羊（P＜0.05）外，其余时期组间均差异不显著（P＞0.05）。不同时期2个组E2含量均呈先降低后略升高的趋势。对照组血清E2含量在撤栓前1天最高，显著高于其他三个时期（P＜0.05），在发情周期第1天显著高于发情周期第10天（P＜0.05）；试验组血清E2含量在撤栓前最高，极显著高于其他三个时期（P＜0.01），在发情周期第1天极显著高于发情周期第10，20天（P＜0.01）。

图1 硒对母羊血清中E2含量影响趋势Fig.1 Effect of selenium on E2 content in ewe serum

表2 母羊发情周期生殖激素测定结果Tab.2 Effect on reproductive hormones in ewe during oestrus cycle

2.2 日粮中添加硒对母羊血清中P含量的影响

见图2。

图2 硒对母羊血清中P含量影响趋势Fig.2 Effect of selenium on P content in ewe serum

由表2、图2可知：日粮中添加硒的试验组母羊血清P含量除了发情周期第10天显著高于对照组（P＜0.05）外，其余时期略高于对照组，但组间均差异不显著（P＞0.05）。不同时期2个组P含量均呈先降低后升高的趋势。对照组血清P含量在发情周期第20天最高；发情周期第1天最低，显著低于其他时期（P＜0.05）；试验组血清P含量在发情周期第10天最高；在发情周期第1天最低，显著低于其他时期（P＜0.05）。

2.3 日粮中添加硒对母羊血清中LH含量的影响

见图3。

图3 对母羊血清中LH含量影响趋势Fig.3 Effect of selenium on LH content in ewe serum

由表2、图3可知：日粮中添加硒的试验组母羊血清LH含量除了撤栓前1天显著高于对照组（P＜0.05）外，其余时期组间均差异不显著（P＞0.05）。不同时期2个组LH含量均呈降低趋势。对照组血清LH含量在撤栓前1天最高，显著高于发情周期第10，20天（P＜0.05）；试验组血清LH含量也是在撤栓前1天最高，显著高于发情周期第1，10天（P＜0.05），而与发情周期第20天之间差异不显著（P＞0.05）。

2.4 日粮中添加硒对母羊血清中FSH含量的影响

见图4。

图4 硒对母羊血清中FSH含量影响趋势Fig.4 Effect of selenium on FSH content in ewe serum

由表2、图4可知：日粮中添加硒的试验组母羊血清FSH含量除了撤栓前1天显著高于对照组（P＜0.05）外，其余时期组间均差异不显著（P＞0.05）。不同时期2个组FSH含量均呈下降趋势。

3 讨论

本试验中，试验组血清E2、LH和FSH含量在撤栓前1天均显著高于对照组，发情第10天血清P含量显著高于对照组。动物卵母细胞发育所需能量主要来自于葡萄糖和脂肪酸，葡萄糖经过三羧循环提供ATP，脂肪酸则通过β-氧化和三羧循环提供比葡萄糖更多的ATP［1］。脂肪酸β-氧化在为卵泡细胞成熟和发育提供能量的同时也产生了过氧化物、羟基自由基及过氧化氢等活性氧，生理水平的活性氧有利于卵泡细胞成熟［2］，但大量的活性氧可能会破坏线粒体的DNA和蛋白质，干扰线粒体功能并影响线粒体分布，从而影响卵泡生长［3］。而且卵母细胞在氧化胁迫（由高浓度的活性氧引起氧化损伤）情况下，将产生大量的氧自由基，可能导致脂肪酸的过氧化反应，产生脂质过氧化氢、活泼醛类等过氧化产物。有研究认为，过氧化产物能破坏细胞的生物膜和核酸［4］。牛羊等大家畜卵泡细胞内脂肪酸含量较高，脂肪酸β-氧化仅能消耗部分脂肪酸，而剩余脂肪酸容易受到过氧化的影响［1］。硒是谷胱甘肽过氧化物酶的组成成分，体内含量适宜时可消除脂质过氧化物的毒性作用，消除对卵泡细胞的迫害，促进卵泡发育。同时，LH和FSH有利于卵泡的发育，即卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞层的形成［5］。E2和P是由卵泡颗粒细胞与卵泡膜细胞层共同参与完成的［5］，部分E2进入血液循环，丘脑下部和脑垂体对E2的低浓度产生反馈，分泌更多的FSH，刺激颗粒细胞，使得E2的分泌持续增加，最终达到排卵前的峰值，启动LH分泌，触发排卵。

其次，由发情周期内生殖激素含量的变化看，母羊血清E2浓度在撤栓前1天和发情第1天浓度较高，符合母羊排卵直前血清E2浓度最高的生理变化规律［5］；血清P浓度在发情周期第10～20 d进入高位态势，说明早期胚胎已由囊胚期进入着床并结束赋植过程，同时卵巢进入黄体期；血清LH和FSH已完成卵泡成熟与排卵的任务，随之进入下降阶段。

4 结论

饲粮中添加活性硒使母羊血清生殖激素上升，尤其是撤栓前1天效果更明显；在发情周期内，血清E2含量在发情初期最高，P含量由发情周期第10天进入高位态势，血清LH和FSH含量也是初期高、后进入下降态势。说明饲粮活性硒可以促进母羊生殖激素的分泌。