太子参须对禽Ⅰ型副黏病毒疫苗的增强作用

陈 珍，张炎达，施少华,，黄翠琴，潘慧青，杨荣平，赵 齐，刘荣昌，黄 瑜

(1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福建 福州 350013；2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所动物生物安全三级实验室，福建 福州 350013；3.福建贝迪药业有限公司，福建 宁德 355300；4.龙岩学院生命科学学院，福建 龙岩 364012)

太子参为石竹科植物孩儿参的干燥块根，富含氨基酸、多糖、皂苷、环肽、黄酮和挥发物等成份，具有降血糖、抗氧化、抗皮炎、增强免疫力和改善肺功能等作用[1-4]。太子参须与太子参块根基础物质一致，功效相似，太子参须约占太子参块根干重的14.93%，其太子参须皂苷总量约为0.25%[5-7]。吴建华等[8]研究证明，太子参须提取物能够促进仔猪免疫系统调控，提升仔猪免疫功能；本课题组前期研究发现，太子参须提取物还具有显著的鸡源乳酸菌和饲用枯草芽孢杆菌的体外益生功能[9-10]。目前为止，尚未见太子参须在水禽上的应用报道。本试验通过研究太子参须制剂对水禽I型副黏病毒疫苗的作用效果，为其在水禽上的应用提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 主要材料 1日龄健康番鸭，购自莆田某家禽有限公司，经采集血清检测禽I型副黏病毒抗体为阴性；太子参须针剂、太子参须颗粒、太子参须提取干粉，均由福建贝迪药业有限公司提供。以葡萄糖为标准品，通过苯酚-浓硫酸法测得太子参须针剂、太子参须颗粒、太子参须提取干粉多糖含量分别为25%、30%和60%。禽I型副黏病毒灭活疫苗是以分离鉴定的鸭源禽I型副黏病毒FP1/02株经灭活后制备的油乳剂疫苗。

1.2 动物分组 将270只1日龄健康番鸭按常规饲养方法网上平养，以全价配合饲料饲喂，自由采食及饮水，于4日龄时挑取240只雏番鸭并随机分成4个组，分别为太子参须针剂组、太子参须颗粒组、太子参须提取干粉组和未给药免疫组，每组60只，并按照表1方案进行给药，连用7 d。在7日龄时，各组番鸭均颈背部皮下注射禽I型副黏病毒灭活疫苗，0.3 mL/羽，于不同时间点采集血清，进行血清抗体检测，并进行体重测定、免疫器官指数测定。

表1 试验分组及给药方案

1.3 体重测定 于免疫后7、14、21、28 d和35 d从各组随机选取10只番鸭，分别空腹称重，记录数据，以计算免疫后的体重变化。

1.4 血清抗体检测 于免疫后7、14、21、28、35、42、49 d和56 d从各组随机选取20只番鸭，按常规方法翅下静脉采血0.5 mL，置于1.5 mL离心管中，室温放置2 h后于4 ℃冰箱过夜，然后以3 000 r/min离心10 min分离血清，采用微量法测定禽Ⅰ型副黏病毒抗体[11]。

1.5 免疫器官指数测定 于免疫后5、7、14 d和21 d从各组随机选取3只番鸭，空腹称重后处死，取胸腺、脾脏和法氏囊，去除表面的脂肪后分别称重，记录数据，计算各免疫器官指数。

免疫器官指数=免疫器官重(mg)/宰前空腹体重(g)

1.6 数据处理 数据均采用SPSS 19.0统计处理软件进行单因素方差分析，结果用平均数±标准差(Mean±SD)表示，以P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 体重测定 结果如表2所示，免疫后7 d时，未给药免疫组的番鸭体重为(44.25±3.51)g，太子参须针剂组、太子参须颗粒组和太子参须提取干粉组番鸭平均体重与未给药免疫组相比差异不显著(P>0.05)；免疫后14 d时，与未给药免疫组相比，太子参须提取干粉组番鸭体重显著增加(P<0.05)；至免疫后21 d，太子参须针剂组、太子参须颗粒组和太子参须提取干粉组番鸭体重均显著高于未给药免疫组(P<0.05)，到免疫后35 d，太子参须提取干粉组番鸭的体重仍显著高于未给药免疫组(P<0.05)。

表2 不同药物对番鸭体重的影响

2.2 血清抗体检测 结果如表3所示，免疫后7 d时，未给药免疫组的禽I型副黏病毒抗体水平为(3.03±0.51)Log2，太子参须针剂组、太子参须颗粒组和太子参须提取干粉组的禽I型副黏病毒抗体水平均高于未给药免疫组，但差异不显著(P>0.05)；但免疫后14 d时，太子参须提取干粉组抗体水平显著提高(P<0.05)，且这个现象一直持续到免疫后35 d；而太子参须颗粒组的抗体水平虽比未给药免疫组高，但除免疫后35 d外，其余时间点均差异不显著(P>0.05)；除免疫后21、28 d和35 d外，其余时间点太子参须针剂组与未给药免疫组相比差异不显著(P>0.05)。

表3 不同药物对禽I型副黏病毒抗体水平的影响

2.3 免疫器官指数测定 结果如表4所示，免疫后5 d和7 d时，未给药免疫组的番鸭平均胸腺指数为(3.58±0.58)mg/g和(4.56±0.26)mg/g，与未给药免疫组相比，太子参须提取干粉组、太子参须针剂组、太子参须颗粒组番鸭的平均胸腺指数均显著增高(P<0.05)，且太子参须针剂组在免疫后14 d和21 d番鸭的平均胸腺指数也显著高于未给药免疫组(P<0.05)。免疫后5 d时，未给药免疫组的番鸭平均脾脏指数为(1.05±0.17)mg/g，太子参须提取干粉组番鸭的平均脾脏指数与未给药免疫组相比差异显著(P<0.05)，而太子参须针剂组、太子参须颗粒组番鸭的平均脾脏指数与未给药免疫组相比差异不显著(P>0.05)；免疫后7 d时，太子参须针剂组、太子参须提取干粉组番鸭的平均脾脏指数与未给药免疫组相比差异显著(P<0.05)，且太子参须提取干粉组继续保持对番鸭脾脏强烈的刺激作用，于免疫后14 d和21 d时，太子参须提取干粉组番鸭的平均脾脏指数均显著高于未给药免疫组(P<0.05)，而免疫后14 d和21 d时，太子参须针剂组与未给药免疫组的平均脾脏指数差异不显著(P>0.05)。免疫后5、7、14 d和21 d，太子参须提取干粉组番鸭的平均法氏囊指数与未给药免疫组相比差异显著(P<0.05)，而太子参须针剂组、太子参须颗粒组番鸭的平均法氏囊指数与未给药免疫组相比差异不显著(P>0.05)。

表4 不同药物对番鸭免疫器官指数的影响

3 讨论

太子参含有苷类、多糖类和人体必需的氨基酸和微量元素，具有增强机体免疫的功效，同时在抗炎症方面具有显著作用[12-13]。黄文哲等[14]研究发现，太子参中的苷类和多糖等是提高机体免疫功能的有效物质，而太子参多糖具有抗应激和免疫增强作用。刘训红等[15]利用太子参多糖进行抗应激和免疫增强药理试验，结果表明太子参多糖具有抗疲劳、耐缺氧、耐低温以及抗应激和增强机体免疫功能的作用。钟方晓等[16]通过药理试验发现，太子参多糖与太子参水煎液结果相似，能增加小鼠体力和非特异免疫功能。蔡晶等[17]从免疫器官、免疫细胞水平方面进行研究，结果显示太子参多糖粗提物具有免疫调节作用，能够增强辅助性T细胞(Th)、抑制性T细胞(Ts)活性；能够增加小鼠免疫器官重量，提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数。

本试验结果表明，用药之初太子参须针剂、太子参须颗粒和太子参须提取干粉对禽I型副黏病毒抗体水平促进作用并不明显，免疫后14 d时，用药效果初步呈现，特别是太子参须提取干粉的作用更为明显，且这个现象一直持续到免疫后35 d；但太子参须针剂、太子参须颗粒对抗体水平的促进作用并不明显，排除剂型因素影响外，提示太子参须制剂对禽I型副黏病毒抗体水平的促进作用可能有剂量依赖性，这种现象也可反映在太子参须剂量对番鸭体重的影响上，下一步可进行太子参须多糖浓度梯度试验加以验证。

胸腺、脾脏、法氏囊为机体的免疫器官，它们是T、B细胞定居、抵御抗原剌激所产生免疫应答的场所。动物免疫力的高低一定程度上直接受免疫器官的发育状况的影响，多糖对动物机体的免疫器官具有良好的促进作用，主要表现为其对胸腺、脾脏等免疫器官的改善作用。严胜泽[18]、陈耀金等[19]、宋玉龙等[20]用太子参制剂处理昆明小鼠或BALB/c小鼠，发现太子参制剂可显著提高小鼠胸腺、脾脏的重量。在本试验中，免疫禽I型副黏病毒灭活疫苗后5 d和7 d各太子参须试验组番鸭的平均胸腺指数显著增高，至免疫后21 d，太子参须针剂组番鸭的平均胸腺指数仍显著高于未给药免疫组；免疫后5、7、14 d和21 d，太子参须提取干粉对番鸭的脾脏和法氏囊具有刺激作用，而太子参须针剂、太子参须颗粒对番鸭脾脏的刺激作用不明显，这些可能是因为三者的太子参须多糖的含量不同，导致其效果有所差异，太子参须多糖含量与其免疫指数的相关性还需进一步加以确定。

综上所述，本试验结果表明，太子参须提取干粉对禽I型副黏病毒抗体水平、番鸭体重、免疫器官指数均具有显著的促进作用，可作为未来疫苗佐剂的潜在剂型产品进行开发。