攀鲈胚胎发育观察

马本贺 李燕华 王海华 王梦杰 余连渭 李左宏

(1 江西省水产科学研究所，南昌市特种水产繁育与健康养殖重点实验室，江西南昌 330039；2 上饶市信州区农技中心，江西上饶 334000)

攀鲈(Anabastestudineus)又名过山鲫、步行鱼，隶属于鲈形目、攀鲈科、攀鲈属，为我国原生鱼类，广泛分布于我国南部以及南亚和东南亚地区[1]。攀鲈具有发达的鳃上器和鳍，依靠鳃上器的辅助呼吸和鳃盖、胸鳍的摆动，能离水运动作短距离迁移。攀鲈肉质鲜嫩，营养丰富，且具有生长快、耐低氧、养殖周期短、风险低等优点，是近年来逐渐兴起的小型经济鱼类，已在海南、广东、福建等地开展养殖。本项目团队从海南引进攀鲈苗种，在江西开展了人工繁育和生态养殖等方面的研究并取得较好进展，为攀鲈“南鱼北养”的顺利实施奠定了前期基础。

胚胎发育是鱼类早期生活史的重要阶段之一，也是其机体器官发生、发展的基础时期，直接关系到鱼类繁殖的成功与否[2]。鱼类胚胎发育研究是开展规模化生产的理论基础。目前国内有关攀鲈的研究较少，且主要集中在生物学[3]、毒力学[1,4]和遗传多样性[5]等方面，未见攀鲈早期发育的报道。本研究系统观察了攀鲈胚胎发育过程，旨在了解其胚胎发育特点及规律，为攀鲈的人工繁殖和苗种生产提供参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

攀鲈繁殖亲本为江西省水产科学研究所自繁自育个体，雌鱼体质量为(254.04±16.18)g，雄鱼体质量为(185.18±18.90)g。催产药物使用绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体素释放激素A2(LHRH-A2)(宁波第二激素厂)，地欧酮(DOM)(宁波三生生物科技有限公司)。

1.2 试验方法

对性成熟攀鲈亲本的腹腔注射催产药物(HCG 667 IU/mL、LHRH-A26.67 mg/mL、DOM 5.0 mg/mL)，注射量为雌鱼0.5 mL，雄鱼用量减半。催产后把亲鱼放入水泥池(5.0 m×1.5 m×1.2 m)中悬挂的网箱(网目孔径4.75 mm)内，流水刺激亲鱼自行产卵受精。亲鱼产卵后将其移出，受精卵在池中用微流水充氧孵化。用筛绢网捞取1 000粒受精卵置于室内小型孵化桶中，孵化过程中，用加热棒控制水温在(27.5±1.0)℃，用微孔气石增氧。在不同时间间隔多次取样，每次取样数量不少于15粒受精卵。用倒置显微镜(OLYMPUS Th4-200)连续观察胚胎发育过程并拍照、记录胚胎各时期的发育时间和形态特征，以50 %以上的个体发育进入某一阶段作为该发育阶段的起始时间。

2 结果

攀鲈受精卵为无黏性的浮性卵，吸水膨胀后出现明显的卵周间隙(见图1-1)，平均膜径(912.92±17.07)μm，卵周间隙平均厚度为(185.18±18.90)μm。参考一般硬骨鱼的胚胎发育阶段划分方法[6]，受精卵在水温(27.5±1.0)℃、溶解氧≥6.5 mg/L、pH 7.6～8.2的环境条件下，历经7个阶段、26个时期，历时17 h 45 min孵化出膜成为初孵仔鱼。胚胎发育时序及各个阶段的主要形态特征如下(见表1、图1)。

2.1 胚盘形成

受精后原生质向动物极移动，28 min后原生质集中于动物极形成半透明的隆起状胚盘(见图1-2)。

2.2 卵裂

攀鲈的卵裂方式为盘状卵裂。受精后43 min，动物极出现第1条横贯胚盘的卵裂沟，将胚盘分成两个大小、形态相似的分裂球，进入2细胞期(见图1-3)。受精后59 min，出现第2条卵裂沟，两条卵裂沟呈垂直状，形成4个卵裂球，进入4细胞期(见图1-4)。受精后1 h 13 min，受精卵进行第3次分裂，胚盘形成2条平行的卵裂沟，8个卵裂球呈两行排列，进入8细胞期(见图1-5)。受精后1 h 26 min，受精卵开始第4次卵裂，形成“4×4”排列的16个卵裂球，进入16细胞期(见图1-6)。受精后1 h 40 min，受精卵开始第5次卵裂，进入32细胞期，此时卵裂球开始变成不规则排列(见图1-7)。随着卵裂的持续进行，受精后1 h 58 min，形成大小不一、重叠排列的多个卵裂球，进入多细胞期(见图1-8)。

2.3 囊胚

受精后2 h 43 min，卵裂球数目继续增多且体积更小，聚集在动物极形成突起状，进入囊胚早期(见图1-9)。卵裂细胞从动物极向植物极移动，受精后3 h 22 min，动物极突起的高度逐渐降低，进入囊胚晚期(见图1-10)。

2.4 原肠胚

囊胚层细胞继续向植物极移动，受精后4 h 27 min出现胚环，进入原肠早期(见图1-11)。胚层细胞沿着胚体扩展，受精后4 h 56 min，胚层细胞继续下包至卵黄大半部分，胚环一端形成胚盾并逐渐增长，进入原肠晚期(见图1-12)。

2.5 神经胚

受精后6 h 4 min，胚层细胞下包至卵黄底部，胚环一端膨大形成头部，进入神经胚期(见图1-13)。受精后6 h 59 min，胚层完全包围卵黄，胚孔闭合，进入胚孔封闭期(见图1-14)，胚体初步形成。

2.6 器官形成

胚体继续发育，受精后7 h 32 min，胚体头部出现两个突起，为眼的原基，进入眼基期(见图1-15)。受精后8 h 17 min，头部进一步隆起，胚体背部出现5～7对体节，进入肌节期，并开始出现零星的黑色素细胞(见图1-16)。体节数量继续增加，受精后9 h 3 min，黑色素逐渐增多，胚体尾部隆起形成尾芽，进入尾芽期(见图1-17)。受精后10 h 14 min，头部的眼原基发育成椭圆形的眼囊，进入眼囊期(见图1-18)。受精后11 h 50 min，头部后方出现椭圆形的耳囊，进入耳囊期，此时尾芽继续发育形成尾部(见图1-19)。受精后12 h 22 min，在眼囊视杯口出现了晶状体，进入晶体期，此时尾部与胚体明显分离(见图1-20)。受精后13 h 51 min，胚体出现轻微抽动，进入肌肉效应期(见图1-21)。受精后14 h 26 min，胚体前端与卵黄囊连接处发育成管状心脏，心脏开始有规律地搏动，周边流动浅红色血液，进入心跳期(见图1-22)，搏动频率在(132.7±7.2)次/min。受精后15 h 57 min，胚体整个尾部与卵黄脱离接触，尾部开始无规则颤动，进入尾颤期(见图1-23)。

2.7 出膜

受精后16 h 43 min，整个胚体在卵膜内翻滚转动，尾部蜷缩在卵膜内，进入将孵期(见图1-24)。受精后17 h 31min，胚体尾部摆动频率和幅度加剧，首先破膜而出，进入出膜期(见图1-25)，尾部首次伸直，头部和身体还在卵膜内，此时心搏率为(145.6±8.8)次/min。受精后17 h 45 min，随着胚体的继续晃动，卵膜破裂，整个胚体摆脱卵膜，成为初孵仔鱼(见图1-26)，完成胚胎发育整个过程。

初孵仔鱼沉于水底，全身分布黑色素，全长(1 915.31±92.21)μm，体宽(673.85±26.99)μm。仔鱼头部与身体前端呈近椭圆形的球体，卵黄囊位于仔鱼腹部，呈圆形或椭圆形，身体后端与尾部细长呈棍状。初孵仔鱼心搏率为(166.9±8.5)次/min，消化道未贯通。

3 讨论

攀鲈1龄即可达到性成熟，其受精卵为无黏性的浮性卵，卵质均匀，卵裂方式为盘状卵裂，胚胎发育历经胚盘形成、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成和出膜7个阶段。攀鲈的胚胎发育与一般硬骨鱼发育规律相似[7]，但在发育过程中有其自身特点。攀鲈受精卵为浮性卵，与同属攀鲈亚目的叉尾斗鱼(Macropodusopercularis)[8]和圆尾斗鱼(M.chinensis)[9]一致，而暹罗斗鱼(Bettasplendens)[10]则为沉性卵。攀鲈受精卵吸水膨胀后膜径为(912.92±17.07)μm，略小于暹罗斗鱼和圆尾斗鱼，而大于叉尾斗鱼。胚胎发育过程中，攀鲈肌节期时在胚体和卵黄囊上开始出现黑色素细胞，且随着器官形成、发育，黑色素逐渐增多。杂交鳢(乌鳢Channaargus×斑鳢C.maculata)[11]在脑泡形成期出现少许黑色素沉淀，圆尾斗鱼则在眼囊期出现色素。攀鲈初孵仔鱼全身及卵黄囊皆分布有黑色素细胞，而大多数鱼类在刚出膜时身体近半透明状，仅有少量黑色素。如杂交鳜(大眼鳜Sinipercakneri×翘嘴鳜S.chuatsi)初孵仔鱼鱼体基本透明，而卵黄囊含有较多黑色素[12]。

一般而言，受精卵的卵径大小与胚胎发育历时成正相关关系，受精卵越大，胚胎发育时间越长，其初孵仔鱼规格也越大[13]。本研究中，攀鲈胚胎发育历时17 h 45 min，初孵仔鱼全长(1 915.31±92.21)μm，受精卵大小、发育时长和仔鱼规格均小于大口黑鲈(Micropterussalmoides)[14]、翘嘴鳜[15]、大眼鳜[16]、黑莓鲈(Pomoxisnigromaculatus)[17]等其他鲈形目鱼类。在出膜阶段，胚胎孵化酶的消化和胚体的物理运动共同作用于卵膜，促使卵膜破裂，完成孵化过程。在合适的温度区间，孵化酶的活性随着温度的升高而增强[18]，这也加快了胚体出膜的进程。陈祈辉等[19]使用规格较小的攀鲈作为亲鱼进行人工繁殖，发现在水温28 ℃下胚胎孵化时间长达72 h，远长于本试验结果。其原因可能为亲鱼性腺发育情况、卵子质量不同。此外，孵化密度、水流量、溶解氧和pH等外界因子也会对胚胎发育产生较大影响[20]。以上因素的共同作用导致其与本试验中攀鲈胚胎发育时间差异较大。综上所述，攀鲈胚胎发育历时较短，初孵仔鱼分布有较多黑色素细胞，胚胎发育过程中与其他鱼类相比有共性也有其特异性。