香诃止泻汤对功能性消化不良小鼠治疗作用的实验研究

梁 玲，聂 坚，李添美，李 瑞，张建英

(云南中医药大学·云南 昆明 650500)

香诃止泻汤是云南省儿科名中医熊磊教授治疗小儿泄泻的临床效验方，主要由藿香、诃子、葛根、茯苓、焦山楂等9味中药组成，具有行气消食导滞、运脾化湿止泻等功效，临床治疗多种原因引起的小儿腹泻效果肯定[1]。功能性消化不良(FD)是临床上常见的消化系统疾病，亦是临床引起小儿腹泻的常见原因之一，其发病与脾失运化、饮食失节、情志不遂密切相关，中医多从运脾化湿、消食导滞入手治疗。本实验将通过建立FD腹泻小鼠模型，予以香诃止泻汤干预治疗，与莫沙必利进行对照，观察其对小鼠体质量、胃肠动力及胃肠激素含量的影响，旨在了解香诃止泻汤对功能性消化不良小鼠的治疗效果，为该方在临床中更科学、合理、广泛的应用提供依据。

1 实验材料

1.1 动物 清洁级健康成年昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18～22 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，证号：SCXK(湘)2019-0004。

1.2 药物与试剂 香诃止泻汤主要由藿香、诃子、葛根、茯苓、焦山楂等9味中药组成，中药饮片均购于云南省昆明市中医医院中药房，参照临床用药方法及前期实验结果制备成浸膏保存备用[2]，临用时按照各组给药剂量分别用纯净水配用。枸橼酸莫沙比利片：成都康弘药业集团股份有限公司，批号：01024，纯净水配制浓度成9.75%备用。碘乙酰胺：上海瑞永生物科技有限公司；L-精氨酸盐酸盐：山东齐鲁生物科技有限公司；小鼠胃动素(MTL)ELISA检测试剂盒：江苏酶免实业有限公司，批号：21210122；小鼠血管活性肠肽(VIP)ELISA检测试剂盒：江苏酶免实业有限公司，批号：21210122。碳末糊制备：羧甲基纤维素钠5 g溶于200 mL蒸馏水，搅拌至充分溶解，再加入2 g活性炭，搅拌均匀后纱布过滤备用。

2 方法

2.1 模型制备 75只小鼠参照文献[3-5]所述进行造模。按照0.2 mL/只灌胃给予0.1%碘乙酰胺蔗糖混合溶液，2 h后在(22±1)℃、深12 cm的水中持续游泳20 min，2 h后按0.1 mL/10 g灌胃L-精氨酸溶液，持续6 d。从第7天开始将L-精氨酸溶液换成冷大黄水煎液，按2.9 g/kg持续灌胃4 d。在造模期间打乱小鼠饮食规律(逢单日进食，双日禁食，不禁水)。小鼠精神状态不佳、活动减少，扎堆明星，倦怠嗜睡，部分出现拱背、竖毛现象，毛色偏黄无光泽，粪便颗粒增大、质地稀软，有明显的粪便不成形；小鼠日进食量、体质量增长均值明显降低，日平均饮水量稍有减少，粪便含水量明显升高；随机选取5只小鼠，颈椎脱臼处死，沿胃大弯剪开胃，纵向剪开肠管，冲洗净胃肠内容物后，观察胃肠表面黏膜外观，小鼠胃肠没有明显的充血、水肿或溃烂。综合分析小鼠整体特征符合FD模型表现，判断本次造模成功。

2.2 实验动物分组与给药 将造模成功的FD腹泻小鼠随机分为模型组，香诃止泻汤高、中、低剂量组和阳性对照组，每组12只，另设正常对照组12只，编号、称重记录备用。香诃止泻汤高、中、低剂量组按照折算剂量[6]，分别按33.30、16.65、8.33 g/kg给予香诃止泻汤灌胃；阳性对照组予枸橼酸莫沙必利 1.95 mg/ kg灌胃(按人与动物体质量系数折算剂量)；模型对照组和正常对照组灌胃等量生理盐水；各组小鼠每天灌胃1 次，连续灌胃3 d。

2.3 观察指标及检测方法

2.3.1 小鼠体质量增长值及粪便含水量检测 给药3 d后测量小鼠体质量，计算各组体质量增长均值。第3天上午给药后，收集各组小鼠4 h粪便，称重后放入干燥箱(80 ℃)里烘干，取出再称重，计算粪便含水量。粪便含水量(%)=[湿重(g)-干重(g)]/干重(g)×100%[7]。

2.3.2 胃内残留率和小肠推进率检测 末次给药后，所有小鼠禁食不禁水12 h，按0.6 mL/只灌胃碳末糊，20 min后，颈椎脱臼法处死小鼠，迅速打开腹腔，结扎贲门和幽门口，剪下整个胃，滤纸吸干，称取全胃重量。然后沿胃小弯剪开，蒸馏水洗净胃内残留物，滤纸吸干后再次称重，计算胃净重，计算胃内残留率。同时快速剪开肠系膜剥离出小肠，平展后测量从幽门口到黑色碳末糊前沿长度及小肠全长，计算小肠推进率。胃内残留率=(胃全重-胃净重)/小鼠所灌的碳末糊量×100%[8]。小肠推进率：幽门口到黑色碳末糊前沿长度/小肠总长×100%[8]。

2.3.3 血清胃肠激素检测 药物治疗结束后，小鼠禁食12 h，摘眼球取血，静置1～2 h，以3 000 r/min离心20 min，离心半径10 cm，取血清-20 ℃冰箱保存。ELISA法检测MTL、VIP含量。

2.4 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行统计处理，计量资料用均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。

3 实验结果

3.1 香诃止泻汤对FD模型小鼠的体质量及粪便含水量的影响 结果见表1。

表1 各组小鼠体质量增长值及粪便含水量比较

3.2 香诃止泻汤对FD模型小鼠胃排空及小肠推动作用的影响 结果见表2。

表2 各组小鼠胃内残留率、小肠推进率比较

3.3 香诃止泻汤对FD模型小鼠血清MTL、VIP含量的影响 结果见表3。

表3 各组小鼠血清MTL、VIP含量比较

4 讨论

功能性消化不良(FD)属于中医学“泄泻”“胃脘痛”“痞满”“积滞”等范畴。临床常以腹胀腹痛、泄利不爽、饮食减少甚至嗳腐吞酸等胃肠功能紊乱表现为特征，中医认为中焦气机不利，气机壅滞结于胃脘是其病机所在。临床治疗多以健脾、行气、消积、化滞辨证论治。香诃止泻汤主要由霍香、诃子、石榴皮、茯苓、焦山楂等9 味中药组成，全方配伍，具有行气化滞、运脾止泻等的功效，临床运用于多种腹泻治疗，效果显著稳定[1]。

本实验结果表明：(1)香诃止泻汤中、低剂量给药能增加FD模型小鼠的进食量，促进其体质量增长，而中、高剂量给药具有减少粪便含水量的作用。实验结果显示，低剂量组小鼠体质量增值最大，甚至超过正常对照组，这可能与方中含有焦山楂等消食化滞药物，能够改善进食量，从而促进小鼠的体质量增长有关。中、高剂量给药后，小鼠粪便含水量明显降低，具有良好的止泻效果。(2)香诃止泻汤能调节胃肠功能，恢复胃肠蠕动，改善胃肠症状，作用缓和而有效。中、低剂量给药后，能使胃排空和肠推进功能更趋近与正常水平，说明该方对于恢复胃肠功能、改善胃肠症状效果显著而平和。(3)其治疗作用机制与调节血清中胃肠激素含量有关。实验中发现模型组胃动素(MTL)含量低于正常组，血管活性肠肽(VIP)含量高于正常组，与其肠推进率、胃排空率降低存在相关性，这与有关报道研究结果一致[9-10]。给药组小鼠胃动素(MTL)水平升高，血管活性肠肽(VIP)降低，并趋近于正常水平。

综上所述，香诃止泻汤对FD模型小鼠具有良好的综合治疗作用，不仅能减轻FD小鼠的胃肠动力紊乱症状，还能增加其进食量，促进其体质量增长，改善其一般状态，机制可能与调节血清中MTL和VIP水平有关。