CMIA法在HBV感染患者血清学标志物水平检测中的应用价值

张 楠

洛阳市第三人民医院(洛阳职业技术学院第一附属医院)检验科 (河南 洛阳 471002)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)作为乙肝患者常见病原体，其可导致患者病程迁延，治愈难度大，预后较差[1]。HBV感染可激活体液抗体应答，血清中乙肝表面抗体(HBsAb)能清除血液中病毒颗粒，但抗体抗原形成免疫复合物，会沉积在肝细胞中，造成肝毛细血管堵塞，引起急性肝坏死，并会暴露肝特异性脂蛋白抗原，损害肝细胞[2]。同时免疫细胞可识别HBV，直接杀伤靶细胞，但细胞免疫低下无法有效清除病毒，造成慢性感染，而细胞免疫反应过度会造成大量肝细胞损伤，产生重症肝炎。此外，HBV作为传染病毒，可经性接触、血液途径、医务人员职业暴露传播[3-4]。因此，应尽早对HBV感染患者进行确诊，及时予以患者有效治疗，避免病情加重，减轻肝损伤。乙肝五项指(HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb)是诊断HBV感染常用血清学指标[5]。临床常用酶联免疫吸附法检测乙肝五项，其操作简单，但结果易受环境影响，准确率较低[6-7]。随着我国检测技术发展，化学发光技术在HBV感染血清学标志物检测中广泛应用。微粒子化学发光法(CMIA)是结合免疫反应、化学发光系统，通过化学发光物质标记抗原、抗体，进行抗体、抗原定量检测[8]。研究显示，ELISA与化学发光法因方法学、放大信号等差异，在检测数值方面存在差异[9]。本研究旨在探究CMIA法在HBV感染患者血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平检测中的应用价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年5月至2021年4月我院406例疑似HBV感染患者，男287例，女119例；年龄20～48岁，平均(34.12±6.33)岁；BMI18.5～28.6 kg/m2，平均(23.64±1.27)kg/m2。排除标准：MOCA评分异常、恶性肿瘤、精神异常、其他病毒性疾病。

1.2 检测方法抽取清晨空腹肘静脉血5mL，放入离心机中离心分离血清，3000r/min，离心10min，提取血清，-20℃冰箱保存。采用CMIA法测定血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平，使用安图A2000 Plus全自动化学发光仪，试剂盒由郑州安图公司提供，严格按照说明书操作。采用ELISA法测定血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平，使用安图酶标仪，试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供，严格按照说明书操作。CMIA法检测阳性判定：HBsAb＞10 mIU/mL，HBsAg＞0.05 IU/mL，HBeAb＞1 PEI U/mL，HBeAg＞0.1 PEI U/mL，HBcAb＞0.15 PEI U/mL。ELISA法检测阳性判定：HBsAb＞1 S/CO，HBsAg＞1 S/CO，HBeAb＜1 S/CO，HBeAg＞1S/CO，HBcAb＜1 S/CO。

1.3 观察指标(1)根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)EP5-A文件中关于评价临床定量测量方法精密度的要求，每日对标本做2批实验，间隔时间＞2h，对样品做双份测定，抽取40对结果。检测前室温放置0.5h，再进行检测。统计分析检测结果，计算变异系数(CV)。(2)对比CMIA法与ELISA法检测HBV感染患者血清学标志物的结果。(3)取ELISA法HBsAb、HBsAg 6点定标液各200μl，根据不同浓度梯度加入5个试管内，0浓度为空白。抽取1份HBsAb、HBsAg阳性血清，用CMIA法检测浓度，将HBsAb、HBsAg阳性血清各200 μl将入已知浓度试管，重复检测2次，取平均值，回收率=各浓度点实测平均值/理论期望值×100%。(4)对比CMIA法与ELISA法检测HBsAg最低浓度。

1.4 统计学方法通过SPSS 22.0对数据进行分析，计量资料用(±s)表示，行t检验，计数资料用n(%)表示，行χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HBV疑似患者血清学标志物CV值的比较与ELISA法比较，CMIA法检测HBV感染患者血清学标志物CV值较低，低差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 HBV感染患者血清学标志物检测CV值比较(%)

2.2 HBV疑似感染患者血清学标志物符合率的结果CMIA法与ELISA法检测HBV感染患者血清标志物的符合率为99.51%、99.75%、98.28%、99.75%、98.52%，见表2。

表2 HBV感染患者血清学标志物的结果对比(%)

2.3 CMIA法回收率测定HBsAb平均回收率为98.37%(96.76%～99.61%)，HBsAg平均回收率为97.81%(94.92%～99.45%)，见表3～表4。

表3 不同浓度HBsAb回收率(%)

表4 不同浓度HBsAg回收率(%)

2.4 HBsAg最低浓度CMIA法检测HBsAg最低浓度0.05IU/mL低于ELISA法0.16 IU/ml，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨 论

HBV传染性强，而我国为乙型肝炎高发国家，数据显示，2015年我国HBV感染患者达3000万[10]。常规检测方法诊断HBV感染易出现漏诊、误诊，诊断效果不太理想，影响疾病及时治疗及控制HBV传播; 尽管使用PCR扩增乙肝病毒DNA进行定量检测是确诊HBV感染的金标准， 但其存在耗时长， 费用高等缺点，对于部分患者临床接受程度有限。因此，需寻找一种准确有效, 价格低廉快速HBV感染检测方法，以提高诊断效果。

乙肝五项指标是HBV感染诊断常用检测治疗，可有效反映HBV感染状态，指导临床诊疗。人体感染HBV后，血液中会存有大量HBsAg，是HBV感染的标志之一[11]。HBsAb是HBV免疫的保护性抗体，由HBsAg诱导产生，较高浓度HBsAb可有效清除机体内HBV，在乙肝疫苗接种后或 HBV感染恢复期出现，是HBV感染特异性免疫标志[12]。HBeAg作为第2种血清学抗原标志物，可在躯体被HBV感染后被检出，HBeAg检出率升高，提示肝细胞严重损伤，患者HBV传染性强[13]。HBeAb是受HBeAg刺激产生的抗体。HBcAb也是HBV感染后人体出现的血清抗体，是一种敏感的血清学标志。ELISA法是临床HBV血清标志物检测常用方法。ELISA法是将可溶性抗体、抗原结合至固相载体上，根据一定的抗体只能与特定抗原结合，具有特异性，进行免疫反应定量、定性检测。胡梅霞等[14]研究显示，ELISA检测HBsAg可能出现假阳性结果，通过增加标本的离心时间和提高离心速度可有效减少假阳性例数。ELISA法实验步骤较多，标本质量、运输过程、环境等多种因素可能影响检测稳定性，导致ELISA法检测结果误差较大，易出现假阳性。我国各级医院ELISA法检测自动化水平差异较大，基层医院自动化水平低，影响检测结果的准确性。而CMIA法是在ELISA法、放射免疫分析法的基础上改进形成的新型检测方法，CMIA法是通过微粒子扩大抗体、抗原结合面积，结合免疫反应、化学发光系统，等抗体或抗原反应，或化学发光物质标记抗原、抗体后，分离游离态化学发光标记物，加入其它相关物，引起化学发光，进行抗体、抗原定量检测[15-17]。CMIA法不仅有ELISA法检测简便、反应时间短的特点，还具有放射免疫分析法灵敏、特异性强、用样量少等特点。许丽枫等[18]研究发现，CMIA法可实现全自动化的定量检测，使乙肝五项检测更快速、灵敏、准确、重复性好、少见模式少，可降低漏检率，可为临床早期诊断、有效治疗及改善预后提供有价值的参考依据。本研究结果显示，CMIA法检测HBV感染患者乙肝五项CV值低于ELISA法(P＜0.05)，HBsAb平均回收率为98.37%，HBsAg平均回收率为97.81%，说明CMIA法应用于HBV感染患者血清学标志物水平检测中，检测精密度高，回收率高。可能是由于CMIA法采用全自动化检测，可减小手工操作对结果的影响，稳定性高，有利于提高检测精密度。此外，CMIA法与ELISA法检测HBV感染患者血清标志物的符合率为99.51%、99.75%、98.28%、99.75%、98.52%，具有高度一致性。而HBeAb、HBcAb存在一定差异，可能是由于检测原理不同、原材料存在差异所致，不会明显影响检测结果。本研究还显示，CMIA法检测HBsAg最低浓度0.05 IU/ml低于ELISA法0.16 IU/ml，提示CMIA法可应用于HBV感染患者低水平血清HBsAg检测中，效果良好，有利于缩短“窗口期”时间。低水平HBsAg感染确诊，可提高检出率，便于及时控制传染。

综上所述，CMIA法应用于HBV感染患者血清学标志物水平检测中，检测精密度高，回收率高，准确度高，且用于低水平血清HBsAg检测中，效果良好。