PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌检验中的效果对比分析

于芳沧

曹县人民医院检验科，山东菏泽 274400

细菌性阴道炎是一种由细菌感染引起的临床常见疾病，使患者出现阴道菌群紊乱情况，可降低患者阴道内有益菌，且极易被致病菌所代替[1]。细菌性阴道炎这一妇科常见疾病，受病情进展缓慢、无明显临床特征等因素影响，难以引起重视，当临床症状明显时，则可能已进展为盆腔炎、宫颈炎等疾病，病情严重时甚至诱发不孕[2]。所以，考虑到患者的身心健康，及早接受早期诊断及治疗，对保障其生育能力具有重要作用。当前临床治疗阴道炎疾病的关键是及时诊断患者病情，并准确掌握病情进展。白带常规检查是当前妇科验证的常用辅助检查方式，可通过检查患者阴道分泌物，掌握患者阴道感染类型及感染情况。细菌培养法作为阴道炎疾病的一种常用诊断方法，随其研究不断深入，发现其需耗费较长时间，且阳性检出率不高，不少患者需要接受多次细菌培养检验方可确诊[3]。PCR检验法作为一种近年来新兴的检验方法，其在临床应用广泛。为深入研究细菌性阴道炎疾病的最佳检验方式，本研究对2021年1—12月来曹县人民医院检验科就诊的120例细菌性阴道炎患者进行临床研究，给予PCR检验法和细菌培养法检验，对比两种检验结果差异。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

对来本院就诊的120例细菌性阴道炎患者进行临床研究，采集患者阴道分泌物，其中对照组（60例）接受细节培养法检测，年龄23～45岁，平均（33.68±1.43）岁；病程3个月～3年，平均（2.54±0.51）年。观察组（60例）接受PCR检验法检测，年龄23～44岁，平均（33.17±1.56）岁；病程3个月～3.5年，平均（2.61±0.43）年。以影像学联合实验室检查为金标准，所有患者均确诊为细菌性阴道炎患者，两组患者中棒状杆菌、肠球菌、加纳特菌患者均有20例。两组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，家属及患者签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①均符合细菌性阴道炎临床诊断标准；②均伴随白带瘙痒、气味异常、灼热、阴道黏膜糜烂等临床表现。排除标准：①患有重要脏器功能严重受损者；②合并凝血功能异常、精神障碍者；③参与研究前10 d使用过抗菌药物、哺乳期、妊娠期者。

1.3 方法

患者取截石位，采取无菌阴道镜，暴露宫颈，使用棉签在患者阴道穹隆位置蘸取阴道分泌物，再放入装有无菌生理盐水的试管内，分别对观察组和对照组患者实施PCR检验法与细菌培养法检验。

1.3.1 PCR检验法将观察组300 mL阴道分泌物放入900 mL生理盐水中，使用离心机离心，并调整其转速为10000 r/min，离心13 min，清除其上清液，再加入组织裂解液，并进行迅速搅拌，使其处于均匀状态。将其置入温度为90℃容器中，进行14 min加热，随后再使用离心机离心，调整其转速为10000 r/min，离心8 min。待完成离心，去少量上清液，制作出DNA模板，同时对比检验细菌阴性与阳性，以制作阴性为对症，整个过程中，除不加入DNA模板外，其他均相同。随后进行PCR扩增、产物检查，再加入缓冲对、引物及模板，取24 μL无菌离子水，使用32 μL无菌液状石蜡覆盖其表面，然后进入PCR循环阶段。

1.3.2细菌培养法使用高压蒸汽锅对检验所用工具进行消毒、灭菌操作，再选择适宜的培养基配方，调制出适宜阴道细菌生长的培养基。于无菌生理盐水中取出患者阴道分泌物，置于无菌器皿内。在保证无菌条件下，接种分泌物，并置于培养液中，再对无菌接种分泌物实施细菌分离。随后将分离所得放入含有二氧化碳的孵育箱内，将温度保持在34℃左右。44 h后，使用显微镜对细菌生长情况进行观察与监测，当培养液中培育出菌落，挑选出灰色、光滑、半透明的水滴状菌落，对其进行生化检验，确保整个检验过程与检验结果均满足生化检验标准。

1.4 观察指标

①对比患者阳性检出率：细菌培养阳性检验标准：当其具有典型菌落，且菌落呈（+）阳性；PCR阳性标准：当其边缘整齐，且条带宽度＜1 mm。②对比两组棒状杆菌、肠球菌、加特纳菌的实际检出情况。

1.5 统计方法

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据处理，计数资料以[n(%)]表示，组间差异比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组检验方法阳性检出率对比

观察组阳性率显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组检验方法阳性检出率对比[n(%)]

2.2 两组细菌检出情况对比

观察组棒状杆菌、肠球菌、加特纳菌检出率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组细菌检出情况对比[n(%)]

3 讨论

近年来，随着人们生活节奏加快、环境变化等因素影响，阴道疾病发病率正呈升高趋势，且患病人数逐渐增加[4]。阴道炎作为临床常见妇科疾病，通常是由阴道内寄生菌群失衡引起的。细菌性阴道炎则多是由阴道加特纳菌引起的，其传播途径为性传播。女性受社会环境、饮食结构改变等因素影响，其细菌性阴道炎发病率正逐渐升高，除给女性的正常生活与身体健康带来不便外，还限制了患者正常社会交往[5]。细菌性阴道炎是一种伴有外阴瘙痒、白带异味等临床症状的妇科常见疾病，其发病原因多与患者服用抗生素类药物、性生活不洁等因素有关，出现阴道菌群失衡情况[6-7]。白带分泌物可从一定程度上反映女性身体状况，如果出现白带分泌异常，需及时来院检查。

阴道内各类菌群能够达到相关制衡作用，使阴道pH值处于合理范围，通过保持阴道内环境稳定，达到抑制部分致病菌滋生的作用[8]。处于平衡状态下的阴道菌群，其所分泌的物质，对阴道内环境具有稳定作用，有助于保障女性阴道健康，但一旦出现阴道菌群失衡，则会导致阴道杆菌出现大量死亡情况，这给致病菌提供了良好的滋生与繁殖环境，不仅限制了阴道上皮细胞的屏障、保护作用，还极易引发细菌性阴道炎疾病[9-10]。由于阴道内上皮细胞环境属于弱酸性，可对阴道细菌疾病产生病理改变，起到保护作用；而当致病菌侵袭表面抗原，则会改变患者阴道内pH值，降低阴道杆菌数量，增加病菌数量，消耗掉许多营养成分，降低正常上皮细胞新陈代谢能力，从而使其失去了良好的保护作用[11-12]。

阴道细菌给女性健康、工作及生活带来较大影响，想要迅速鉴别出细菌种类，改进细菌检验操作方法十分必要，不仅能给医师诊断病情提供便利条件，还便于医师给患者制订科学、合理的治疗方案[13]。不少研究指出，女性阴道内菌群失衡现象的出现，是多种因素共同作用的结果，使阴道杆菌出现大量死亡，不仅损耗大量糖原等营养物质，还易引起阴道内酸碱失衡，使阴道上皮细胞失去保护作用，诱发白带增多、阴道炎等常见妇科疾病，如果得不到及时治疗，则会加重病情，限制生活质量[14]。所以，女性在日常生活中，为保持阴道内菌群正常与稳定，应保持良好的外阴清洗习惯。因此，选择一种高效、合理的检验方法，对提升检验效果具有重要作用。

阴道分泌物作为妇科判断女性阴道炎的主要诊断方法之一，是一种良好的辅助检查手段，借助该检查方式，不仅能全面了解阴道内膜炎性感染状况与菌群失调状况，还能帮助医师准确评估阴道炎预后质量及治疗干预方案[15]。所以，给患者寻求一种良好的检验方式，对判断其感染情况、判定致病菌具有重要意义。

细菌培养法这一临床常用检验方式，是当前临床用于检验阴道细菌的金标准，但随我国医疗技术水平不断提升，该检验方式也暴露诸多缺点：①细菌培养法不仅需要一定培养条件，其操作步骤也较为复杂，如果培养环节存在污染，则会诱发交叉感染，除降低检验结果准确度，还会给医务人员身体健康带来严重影响。②细菌培养法培养时间较长，其培养时间一般需要＞48 h；③细菌培养法的阳性检出率较低，且其检测结果需要进行反复核实方可确诊。

PCR检验法是一种阳性检出率较高的荧光定量检测法，在当前女性阴道细菌检测中应用广泛。和细菌培养法相比，PCR检验法更具检测优势：①PCR检验法操作步骤较为简单，且对实验室要求不高；②PCR检验法具有较高的特异性，整体检验时间也较短，且阳性检出率更高。

研究结果表明，经PCR检验，观察组阳性检出率91.67%显著高于对照组（P＜0.05）。这表明在阴道细菌检验中，PCR检验法的阳性检出率，明显优于细菌培养法。这与闫清[16]“研究组经检验，患者阳性率90%显著强于对照组（P＜0.05）”的研究结果相一致。观察组棒状杆菌、肠球菌、加特纳菌检出率分别为95.00%、90.00%、90.00%高于对照组（P＜0.05）。这提示PCR检验法应用于阴道细菌检验中，其检出能力显著强于细菌培养法。本研究结果表明阴道细菌检验中采取PCR检验法后，肠球菌、加特纳菌、棒状杆菌这3种菌阳性率得到了大幅提升，进一步表明PCR检验法的检验结果效率更高，具有较大的优越性。PCR检验法作为一项新型检验技术，其PCR灵敏性、DNA特异性杂交等特征更加明显，作为一种DNA特异片段，通常是体外酶合成的，整个过程一般是由DND变形、退热、延伸3个步骤构成的，经过这一循环过程，有助于增加标本中DNA含量，且PCR技术检验结果也较优，检出率也较高，操作方法也较为简便。和PCR检验法相比，细菌培养法阳性检出率不高，是一种由人工培养方式开展的细菌生长繁殖方法，受阴道细菌种类多、数量大等因素影响，检验误诊率较高，且对光照、温度、pH7.0等环境要求较高。细菌培养法受培养时间长、操作方法复杂、实验室标准要求较高等因素影响，部分基层医院难以开展此项技术，所以，通常被PCR技术所代替。这与杨宇[17]“患者经PCR检验组，棒状杆菌、肠球菌、加特纳菌检验准确性为28.87%、26.80%、34.02%高于细菌培养组（P＜0.05）”的研究结果相符合。PCR检验法可借助离心分离操作，对菌群进行隔离处理，可最大限度降低菌群状态的扰乱情况，通过将菌群与其他物质进行分离，能够准确检测出患者菌群情况[18]。由于PCR检验法检测过程并无复杂操作过程，且对设备要求不高，检验过程中仅需遵循无菌操作要求，不仅能避免发生细菌感染，还能防止检验结果出现异常情况。本研究受检测时间等因素影响，尚未对其他检验方法进行深入分析与对比，所以仍需进行深入探索与研究。

综上所述，阴道细菌检验中采取PCR检验法，其具有较高的阳性检出率，取得了不错的检验效果，具有较高的临床检验价值。