抗Sm抗体、抗U1-RNP抗体阳性检测结果与临床诊断不符1例报道

张 艳

（简阳市人民医院，四川 简阳 641400）

自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生反应，导致自身组织损伤而引起的疾病。抗核抗体（anti-nuclear antibody，ANA）及ANA谱对于自身免疫性疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察及预后评估具有重要意义。抗U1-核糖核蛋白（U1-ribonucleoprotein，U1-RNP）抗体可在多种风湿性疾病中出现，但高滴度抗U1-RNP抗体对混合性结缔组织病（mixed connective tissue disease，MCTD）有诊断意义。抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的高特异性血清学标志物[1]。本研究报道1例抗Sm抗体、抗U1-RNP抗体阳性结果与临床诊断不符的患者。

1 病例资料

1.1 病例介绍

患者，女，15岁，因“关节肿痛6个月，加重5 d”至简阳市人民医院住院。患者无明显诱因出现左手第二近端指间关节疼痛、伴肿胀、皮温升高，无明显发红，后逐渐出现左膝关节肿痛，程度较轻，未予重视，后无明显诱因出现左膝关节肿痛加重，伴皮温升高，无局部发红。病程中无腰部疼痛、炎性眼病、银屑样皮疹，无颜面部蝶形红斑、口腔溃疡，无光过敏、雷诺现象，无口眼干燥、牙齿片状脱落等症状。

1.2 临床诊疗

1.2.1 实验室检查 ANA核颗粒型1∶100±、抗U1-RNP抗体++、抗Sm抗体++、人类白细胞抗原B27阳性、风疹病毒IgG抗体阳性、单纯疱疹病毒Ⅰ型IgG抗体阳性、红细胞沉降率 55 mm/h，血清抗环瓜氨酸肽抗体阴性、γ干扰素释放试验阴性、类风湿因子阴性。

1.2.2 关节磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）检查结果 MRI检查结果示：双侧骶髋关节炎，累及关节缘，周围肌膜肿胀；左股骨内侧踝及胫骨平台髓内斑片样骨髓水肿，关节囊肿积液。行左膝增强MRI进一步明确关节滑膜情况，结果示：左侧膝关节滑膜广泛增厚，增强扫描明显强化，拟诊为滑膜炎。

1.2.3 临床诊断 根据国际脊柱关节炎专家协作组外周型脊柱关节病分类标准[2]，明确诊断为脊柱关节病（外周型）。

1.2.4 临床反馈 患者ANA 1∶100±，抗U1-RNP抗体++，抗Sm抗体++，考虑MCTD。但患者无颜面部蝶形红斑、口腔溃疡、光过敏、雷诺现象、口眼干燥、牙齿片状脱落，建议复查自身抗体和特定靶抗原。

2 实验室复查

2.1 试剂与仪器

ANA试剂盒（间接免疫荧光法）购自德国欧蒙公司，BX51荧光显微镜（日本奥林巴斯公司）。分别采用Tenfly Blot-B全自动蛋白印迹仪（深圳亚辉龙公司）及配套试剂（免疫印迹法）、EUROBlotMasterⅡ免疫印迹仪（德国欧蒙公司）及配套试剂（免疫印迹法）、iFlash 3000全自动化学发光免疫分析仪（深圳亚辉龙公司）及配套试剂（化学发光法）、Tesmi F4000全自动流式荧光免疫分析仪（嘉兴凯实生物科技有限公司）及上海透景公司试剂（多重微球流式荧光免疫分析法）检测特定靶抗原。

2.2 复查结果

ANA核颗粒型1∶100±。2种免疫印迹法检测抗U1-RNP抗体、抗Sm抗体均为阳性。

化学发光法检测抗U1-RNP抗体和抗Sm抗体的结果分别为2.1、0.32 AU/mL，均为阴性。多重微球流式荧光免疫分析法检测抗U1-RNP抗体和抗Sm抗体的结果分别为0.02、0.06 AU/mL，均为阴性。

3 讨论

ANA是以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体的总称。ANA检测可分为针对总抗体的检测和针对靶抗原/抗体的特异性自身抗体的检测。本例患者2次ANA结果均为核颗粒型1∶100±，但特定靶抗原检测结果不一致，抗U1-RNP抗体和抗Sm抗体免疫印迹法均为阳性，而化学发光法和多重微球流式荧光免疫分析法均为阴性，不同检测方法之间检测结果存在明显差异。自身抗体检测必须采用相应的靶抗原进行免疫结合反应，即抗体针对的靶抗原才是核心，自身抗体检测结果与靶抗原的序列、肽段三级或四级结构、抗原决定簇暴露位置等有关。由于不同的抗原生产商会对抗原进行重新设计和改造，因此靶抗原结构会有一定的差异，若该抗原决定簇与其他抗原不同或不完全相同，就会造成检测结果不相符[3]。抗U1-RNP抗体属于小核核糖核蛋白（small nuclear ribonnuclear protein，snRNP），抗U1-RNP抗体靶抗原的主要成分为相对分子质量70 000的蛋白、蛋白A（相对分子质量32 000）和蛋白C（相对分子质量2 000）。抗U1-RNP抗体具有多个蛋白结构，包括U1-snRNA分子、U1A、U1C和U1-70K蛋白[4]。抗Sm抗体也属于snRNP，靶抗原主要成分为B/B'、D、E、F、G蛋白多 肽[5]。2种抗体的蛋白结构见图1。

图1 抗U1-RNP抗体和抗Sm抗体的蛋白结构

本研究使用的2种免疫印迹法试剂均采用U1-RNP全片段，因此无法区分抗U1-RNP抗体蛋白结构中某1个或多个蛋白阳性。免疫印迹法试剂的膜条采用固相包被，抗原以固相方式固定在硝酸纤维素膜上，空间构象会发生细微变化，且抗原片段较大，个别非特异性位点暴露，可能会导致假阳性。因U1-70K蛋白（又称RNP70）对MCTD的诊断特异性最高[6]，因此在化学发光法及多重微球流式荧光免疫法试剂中仅使用了RNP70片段，其阴性结果提示针对RNP70的检测结果为阴性。

MCTD是一种血清中有高滴度的斑点型ANA和抗U1-RNP抗体，临床症状有雷诺现象、双手肿胀、多关节痛或关节炎、肢端硬化、肌炎、食管运动功能障碍、肺动脉高压等特征的临床综合征[7]。儿童MCTD中，有雷诺现象者占50%～70%，有关节疾病者占36%～57%[8]。儿童MCTD的关节炎、关节痛表现为多发性，且多为四肢小关节受累[9]。本例患者虽无雷诺现象，但关节肿痛6个月，因此存在儿童MCTD的可能。在实验室检测结果中，化学发光法及多重微球流式荧光免疫分析法试剂都仅采用RNP70片段作为包被抗原，虽然提高了检测方法的特异性，但因为包被抗原的不全面，可能会导致假阴性结果。

目前，自身抗体检测尚无溯源标准，也没有可溯源的确证试验，因此对自身抗体的检测应结合多种检测方法。结合本例患者的检测结果，建议针对抗U1-RNP抗体的检测，可以选用特异性高的抗原，如RNP70来替代大片段抗原，以降低由方法学引起的非特异性干扰。