多发性硬化患者血清和脑脊液IL-33的表达及其临床意义

韩静贤， 庞 丽， 王 勇

（1.郑州市第七人民医院，河南 郑州 450000；2.林州市肿瘤医院，河南 林州 456550）

多发性硬化（multiple sclerosis，MS）是以中枢神经系统炎性脱髓鞘为主要特征的自身免疫性疾病。免疫细胞进入MS患者中枢神经系统后，会引发炎症，促进星形胶质细胞和中枢神经系统常驻免疫细胞产生白细胞介素33（interleukin-33，IL-33）[1]。星形胶质细胞IL-33表达增加可激活小胶质细胞在不同状态下产生促炎细胞因子或抗炎细胞因子。IL-33还能够直接作用于少突胶质细胞，在髓鞘损伤和修复中起关键作用[2]。目前，国内外已有大量IL-33与实验性变态反应性脑脊髓炎关系的相关研究，但对于IL-33与MS的关系的研究甚少，IL-33水平与MS之间的确切关系尚不清楚。为此，本研究拟探讨IL-33在MS中的表达作用。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2017年3月—2020年4月郑州市第七人民医院MS患者122例（MS组），其中男42例、女80例，年龄（35.36±10.95）岁。所有患者均符合2017年McDonald成人MS诊断标准[3]，治疗前3个月未服用免疫抑制剂或干扰素类药物。排除其他免疫性疾病、肿瘤等患者。122例MS患者中，病程≤1年者39例，病程＞1～＜5年者68例，病程≥5年者15例。另选取同期郑州市第七人民医院非炎性神经系统疾病患者122例（对照组），其中男42例、女80例，年龄（36.11±12.36）岁，包括偏头痛62例、癫痫25例、紧张性头痛35例。2个组之间年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。将MS患者和对照患者按年龄分为≤30岁（15例）、31～40岁（23例）、41～50岁（44例）、≥51岁（40例）4个年龄段。本研究经郑州市第七人民医院伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 治疗方案 依据MS患者的病情给予以下治疗方案：（1）甲基泼尼松龙静脉注射1 g/d， 持续3～5 d；（2）肌肉注射30 μg β-干扰素（interferon-beta，IFN-β），每周1次，持续治疗＞3个月以上；（3）复发期采用甲基泼尼松龙治疗，缓解期采用IFN-β肌肉注射。

1.2.2 扩展残疾状态量表（expanded disability status scale，EDSS）评分[4]和MS分型 对所有患者进行EDSS评分，按评分分为≤5分组和＞5分组。按《多发性硬化诊断和治疗中国专家共识（2018版）》[5]将MS分为复发缓解（relapsing remitting multiple sclerosis，RRMS）型、继发进展（secondary progressive multiple sclerosis，SPMS）型和原发进展（primary progressive multiple sclerosis，PPMS）型。

1.2.3 血清和脑脊液 IL-33水平检测 采集所有对象清晨空腹外周血10 mL，离心后分离血清。根据患者意愿，采集30例复发期MS患者和30例对照者的脑脊液。采用酶联免疫吸附试验检测脑脊液和血清IL-33水平，试剂盒购自英国Abcam公司，线性范围为11.72～750.00 pg/mL，批内、批间变异系数分别为2.7%、3.2%，标准曲线r2=0.99。检测仪器为Synergy LX多功能微孔板检测仪（美国BioTek公司）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量资料以x±s表示，2个组之间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。采用Pearson 相关分析评估各项指标之间的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MS组与对照组血清和脑脊液IL-33水平比较

MS组血清和脑脊液IL-33水平均显著高于对照组（P＜0.01）。女性MS患者血清IL-33水平显著高于男性（P＜0.05）；脑脊液 IL-33水平男性、女性之间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 MS组与对照组不同性别患者血清和脑脊液IL-33 水平比较

2.2 MS组和对照组不同年龄患者血清IL-33水平比较

MS组中，≤30岁、31～40岁、41～50岁患者血清IL-33水平依次升高，各年龄段之间差异均有统计学意义（P＜0.01）；对照组各年龄患者段血清IL-33水平差异无统计学意义（P＞0.05）。MS组各年龄段患者血清IL-33水平均显著高于对照组同年龄段患者（P＜0.05）。见图1。

图1 MS组和对照组不同年龄患者血清IL-33水平比较

2.3 不同病程和治疗方案MS患者血清IL-33水平比较

MS患者中，病程≤1年者血清IL-33水平显著低于病程≥5年者（P＜0.05）。使用不同治疗方案的MS患者之间血清IL-33水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同病程和治疗方案MS患者血清IL-33水平变化

2.4 不同EDSS评分和类型MS患者血清IL-33水平比较

EDSS评分＞5分的MS患者血清IL-33水平显著高于EDSS评分≤5分者（P＜0.01）。SPMS型和PPMS型患者血清IL-33水平显著高于RRMS型患者（P＜0.01、P＜0.05），SPMS型血清IL-33水平与PPMS型MS患者比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

2.5 MS患者血清IL-33水平与EDSS评分、年龄、病程的相关性

Pearson相关分析结果显示，MS患者血清IL-33水平与EDSS评分、年龄、病程均呈正相关（r值分别为0.724、0.285、0.537，P＜0.05）。

表3 不同EDSS评分和类型MS患者血清IL-33水平比较

3 讨论

IL-33在神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞等多种中枢神经系统细胞中表达，其中星形胶质细胞是IL-33的重要来 源[6]。在MS发病过程中，IL-33的受体致瘤性抑制因子2（suppression of tumorigenicity 2，ST2）可通过少突胶质细胞、轴突内和轴突周围表达，树突状细胞表面ST2缺失可导致实验性变态反应性脑脊髓炎病情加重[7]。IL-33与ST2结合能激活核因子-κB、髓样分化因子88和促炎因子，如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β等mRNA的表达，参与中枢神经系统疾病进程。

由于IL-33在脑部和脊髓中呈高水平表达，因此其在免疫介导的中枢神经系统疾病发病机制中的作用备受关注。JAFARZADEH等[8]的研究结果显示，MS患者血清和脊髓中IL-33水平均升高，且MS病情越严重，血清IL-33水平越高。有研究结果显示，与未接受干扰素治疗的MS患者相比，采用IFN-β、甲基泼尼松龙或二者联用进行治疗的MS患者血清IL-33水平显著降低[9]。本研究结果显示，MS患者血清和脑脊液中IL-33水平显著升高，且女性患者升高尤为明显，但脑脊液IL-33水平男性、女性之间差异无统计学意义（P＞0.05），原因可能与脑脊液样本量较小有关。另外，由于脑脊液样本采集难度较大，且不易保存，导致本研究收集的样本量很小，如按年龄、病程进行分层分析，各组例数过少，因此未进行年龄、病程等方面的对比研究，这也是本研究的不足之处。经IFN-β、甲基泼尼松龙或二者联用治疗后，MS患者血清IL-33水平有所降低，但3种方案治疗患者血清IL-33水平差异无统计学意义（P＞0.05）。IFN-β和甲基泼尼松龙对MS的治疗作用可能是通过调节炎症和免疫病理反应来实现的，IFN-β则可降低MS患者血浆和外周血单核细胞中IL-33的表达。

SHAJARIAN等[10]的研究结果显示，MS患者血清IL-33水平与年龄呈正相关，而非炎性神经系统疾病患者血清IL-33水平与年龄呈负相关。本研究结果显示，不同年龄和不同类型的MS患者之间血清IL-33水平差异有统计学意义（P＜0.05），与文献报道[10]基本一致。本研究还发现，不同EDSS评分、病程的MS患者之间血清IL-33水平差异均有统计学意义（P＜0.05）；Pearson相关分析结果显示，MS患者血清IL-33水平与EDSS评分、年龄、病程均呈正相关（r值分别为0.724、0.285、0.537，P＜0.05）。

综上所述，MS患者血清和脑脊液IL-33水平升高，与MS的严重程度有关。