高效液相色谱法测定组胺的方法验证

陈瑾 （哈密市食品药品检验所）

张勇 （哈密市检验检测中心）

0 引言

食品检验是食品安全管控的一个重要环节。食品检验主要依据相应的国家标准、行业标准、地方标准、企业标准和团体标准，以及一些非标准方法和自制方法。在RB/T 214—2017《检验检测机构资质认定能力评价 检验检测机构通用要求》4.5.14方法的选择、验证和确认中规定：“在使用标准方法前应进行验证”。这种验证不仅需要识别相应的人员、设施设备和环境等技术能力满足要求，还应通过试验证明结果的准确性和可靠性，如精密度、回收率、线性范围、正确度、检出限和定量限等。

秦晓娟等在保健食品中钙含量测定时，选用5种不同的方法计算检出限，结果发现应用空白标准偏差法可信度较高。孙明坤在测定生活饮用水及其水源中氯化物时通过测定其精密度、准确度、线性方程、方法检出限等参数进行了方法验证。张丽琴对食品中总酸测定时采用同一种检测方法的精密度实验和同一种样品的不同检验方法相对标准偏差的比较进行新标准的确认及方法验证。本文以葡萄酒中组胺的测定为例，参照GB/T 27404—2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》附录F和HJ 168—2020《环境监测分析方法标准制订技术导则》检测方法确认的技术要求分别对组胺测定的方法检出限、准确度、精密度、加标回收等特性指标进行了方法验证试验，以期为食品检验人员在方法验证工作中提供借鉴和参考。

1 试验方法及过程

葡萄酒中组胺的测定采用国家标准GB 5009.208—2016《食品安全国家标准 食品中生物胺的测定》。试验用仪器设备为高效液相色谱仪。试验用试剂、标准溶液的配置、色谱条件、样品处理、含量计算等均严格按GB 5009.208—2016标准执行。

2 结果与分析

2.1 线性试验

分别配制低、中、高系列标准溶液，浓度分别为 1.0 mg/L、2.0 mg/L、2.5 mg/L、4.5 mg/L、5.5 mg/L；4.5 mg/L、5.5 mg/L、7.5 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L；7.5 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L、50.0 mg/L，按照样品方法衍生化后分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，目标化合物的峰面积与内标的峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线。所得方程分别为=0.0005-0.0005,相关系数=0.9946；=0.0005-0.0006，相关系数=0.9958；=0.0006-0.0006，相关系数=0.9992，均满足GB 27404—2008标准中规定的相关系数不应低于0.99的要求。线性关系图见图1至图3。

图1 低浓度标准溶液线性关系图

图2 中浓度标准溶液线性关系图

图3 高浓度标准溶液线性关系图

2.2 加标回收验证试验

表1 加标回收测试数据

2.3 精密度与准确度验证试验

表2 方法精密度、准确度测试数据

2.4 方法检出限、定量限验证实验

表3 方法检出限、定量限测试数据

3 结果

本方法采用高效液相色谱法分别对其方法检出限、准确度、加标回收等特征指标进行了方法验证实验，结果表明本方法使用设备的检出限、定量限均优于GB 5009.208—2016标准的规定。低、中、高三个浓度的加标回收率为：99.3%～101.8% ,低、中、高三条校准曲线的相关系数分别为=0.9946；=0.9958；=0.9992，精密度为 0.24%～0.73%,准确度为-1.28%～0.02% ,均满足GB/T 27404—2008的相关要求，该方法可以使用。