CK2β与E-cadherin在宫颈癌中的表达及对患者3年生存率的预测价值

胡 静,朱 莉,谈微微

(江苏大学第四附属医院妇科,江苏 镇江 212001)

宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤,其具有侵袭性强、发病率高和预后极差等特征[1],早期临床表现较为隐蔽,如阴道出血或阴道排液等,因特异性较弱而被忽视;中晚期通常表现为宫颈溃疡、坐骨神经疼痛及尿毒症等症状,中晚期5年存活期极低,且极易复发,严重威胁患者生命安全[2]。目前临床上首选手术治疗宫颈癌,但术后复发率约为15.86%[3];而针对中晚期宫颈癌患者只能行放疗和化疗等手段,以减缓癌细胞扩散速度,但其预后极差[4]。研究表明[5],有效的肿瘤预后预测指标可在一定程度上提高患者近、远期疗效,而肿瘤直径、肝癌转移及治疗方法等参数均会影响患者预后,但目前尚无统一结论。蛋白激酶CK2β广泛分布并表达于真核细胞内,是机体重要的信号传导因子[6],研究表明[7],CK2β可激活信号通路,拮抗癌细胞凋亡,促进癌细胞增殖,在恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。而E-钙黏蛋白(E-cadherin)是一种跨膜蛋白,广泛分布并表达于上皮细胞,在维持细胞完整性和极性方面发挥着重要功效[8]。Rhys等[9]研究表明,E-cadherin的低表达可增强癌细胞增殖、迁移等作用,加重肿瘤患者病情。E-cadherin和CK2β均与宫颈癌的发生、发展有一定相关性,但针对二者在宫颈癌组织的具体表达及其对宫颈癌患者预后评估的研究相对较少,因此研究通过E-cadherin与CK2β在宫颈癌中的表达及其对患者3年生存率的预测价值,旨在为临床宫颈癌患者复发及预后评估提供依据。

1 资料与方法

1.1 资料

研究时间:2013年3月—2017年2月。研究对象:60例宫颈癌患者,其中22例腺癌,38例鳞癌;20例淋巴结转移。临床分期:41例Ⅰ～Ⅱ期,19例Ⅲ～Ⅳ。分化程度:26例低分化,34例中高分化。

纳入标准:①所有患者均经影像学和病理组织活检等方式确诊为宫颈癌[10];②年龄范围为18～75岁;③患者临床病例资料齐全;④首次诊断为宫颈癌,且未经过化疗、手术治疗等;⑤在筛选受试者时获得患者及家属同意。

排除标准:①合并患有自身免疫疾病者;②合并患有其他恶性肿瘤;③心脏、肝及肾等重要脏器官严重损伤者;④合并精神疾病者;⑤不配合者。研究经江苏大学第四附属医院伦理委员会审查并批准。

1.2 E-cadherin与CK2β表达检测

分别采集患者治疗前宫颈癌和旁癌组织标本,行病理穿刺活检,并对宫颈组织标本行一系列处理,使其满足检测要求。具体操作如下:应用体积分数10%甲醛溶液行常规固定包埋操作,制作5 μm石蜡切片,不同梯度乙醇水溶液处理,PBS磷酸盐缓冲液冲洗3次,在高温和高压状态下修复3 min,在体积分数3%双氧水培育10 min,再用相同PBS缓冲液洗涤3次,并分别滴加CK2β和E-cadherin一抗,室温下孵育120 min,弃去一抗后,分别滴加二抗,室温下继续孵育60 min,弃去PBS洗涤液。

检测方法:在上述样品中加入DAB显色剂避光显色3～5 min,苏木精染色5 min,脱水至透明色后应用中性树胶封片,由2名高年资医护人员在显微镜下观察并分别评分,取平均值。研究中兔抗人克隆CK2β抗体和鼠抗人E-cadherin抗体、DAB显色剂和PBS缓冲液均来自北京百奥莱博科技有限公司。

判定标准[11]:应用半定量计数方法评估宫颈癌组织和旁癌组织CK2β和E-cadherin表达水平,且免疫组化评分为染色强度评分和阳性细胞评分之积,0～3分为阴性表达,4～9分为阳性表达。阳性细胞评分:显微高倍镜下选取10个视野区域,计算阳性细胞占比,具体评分细则为:阳性细胞占比≤10%,0分;11%≤阳性细胞占比≤25%,1分;26%≤阳性细胞占比≤50%,2分;阳性细胞占比>50%,3分。

1.3 随访

随访时间:3年,从患者入组后即开始,至患者死亡或随访时间到达为止。随访频率:前2年每3个月1次,第3年每6个月1次。随访内容:血清标志物、影像学资料等,并记录患者总生存期。

1.4 统计学

SPSS25.0计数资料以[n(%)]表示,行χ2检验,生存分析行log-rank检验,多因素分析行Cox回归分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E-cadherin与CK2β表达

宫颈癌组织E-cadherin与CK2β蛋白表达情况比较见表1。由表1可以看出,宫颈癌组织CK2β蛋白阳性率明显高于旁癌组织,而宫颈癌组织E-cadherin阳性率明显低于旁癌组织(P<0.05)。E-cadherin与CK2β在宫颈癌组织和旁癌组织的阳性表达分别见图1、图2。

图1 免疫组化检测E-cadherin在组织中的阳性表达

图2 免疫组化检测CK2β在组织中的阳性表达 (×400)

表1 宫颈组织E-cadherin与CK2β表达情况比较[n(%)]

2.2 宫颈癌组织E-cadherin与CK2β蛋白表达与患者临床病理参数的关系

宫颈癌组织E-cadherin、CK2β蛋白表达与患者临床病理参数的关系见表2。由表2可知,宫颈癌组织E-cadherin、CK2β蛋白与临床分期、淋巴结转移和分化程度等标志物有关(P<0.05),而与病理类型、脉管瘤栓、肿瘤直径深肌层浸润及宫旁浸润等标志物无关(P>0.05)。

表2 宫颈癌组织E-cadherin、CK2β蛋白表达与患者临床病理参数的关系[n(%)]

2.3 宫颈癌患者单因素分析

单因素分析结果显示,宫颈癌患者3年生存率与肿瘤直径、临床分期、分化程度、CK2β蛋白表达及E-cadherin表达等指标差异有统计学意义(P<0.05),详情见表3。由表3可见,CK2β蛋白阳性表达3年生存率为67.50%,明显低于阴性的95.00%(χ2=5.637,P=0.020);E-cadherin阳性表达3年生存率为86.96%,明显高于阴性的59.46%(χ2=5.107,P=0.035),不同CK2β蛋白表达和E-cadherin表达生存时间比较分别见图3、图4。

表3 宫颈癌患者3年生存率单因素分析[n(%)]

图3 不同CK2β蛋白表达宫颈癌生存时间比较

图4 不同E-cadherin表达宫颈癌生存时间比较

2.4 宫颈癌患者Cox回归分析

以单因素差异有统计学意义的指标为自变量,以随访期存活状态作为因变量(0=存活,1=死亡),进行Cox回归分析。结果显示,临床分期(OR=1.335,95%CI:1.029～1.733)、分化程度 (OR=2.018,95%CI:1.034～3.937)、淋巴结转移(OR=2.770,95%CI:2.093～3.667)、CK2β蛋白阳性表达(OR=2.563,95%CI:2.102～3.124)和E-cadherin阳性表达(OR=0.415,95%CI:0.339～0.508)是宫颈癌患者3年生存率的独立影响因素,详情见表4。

表4 宫颈癌患者预后Cox回归分析

3 讨论

宫颈癌是女性较为常见的恶性肿瘤,其发病率仅次于乳腺癌,且发病群体有年轻化趋势,严重威胁患者生命安全[12]。早期临床表现特征不明显,而中晚期宫颈癌扩散和转移程度较高,子宫切除术和放疗、化疗等措施无法完全阻断癌细胞分化和转移,降低患者生存期,影响预后[13]。目前临床尚无评估宫颈癌预后的统一标志物,且年龄、淋巴结转移、肿瘤分型及治疗方式等标志物均对预后有一定的影响[14],但无法通过上述诸因素准确判断。E-cadherin和CK2β在宫颈癌组织中呈异常表达状态,二者在宫颈癌细胞的增殖、分化上有一定的作用[7,9],但其对宫颈癌预后的研究相对较少,因而本次研究E-cadherin与CK2β在宫颈癌中的表达及其对患者3年生存率的预测价值,旨在为临床研究提供依据。

研究结果显示,宫颈癌组织CK2β蛋白阳性率明显高于旁癌组织,而宫颈癌组织E-cadherin阳性率明显低于旁癌组织(P<0.05),说明CK2β蛋白和E-cadherin参与宫颈癌的发生、发展。针对我院治疗的60例宫颈癌患者随访3年,Cox多因素分析表明,临床分期 (OR=1.335,95%CI:1.029～1.733)、分化程度 (OR=2.018,95%CI:1.034～3.937)、淋巴结转移(OR=2.770,95%CI:2.093～3.667)、CK2β蛋白阳性表达(OR=2.563,95%CI:2.102～3.124)和E-cadherin阳性表达(OR=0.415,95%CI:0.339～0.508)是宫颈癌患者3年生存率的独立影响因素。淋巴结转移是癌细胞转移的主要方式,其可穿透淋巴管壁,且分化或脱落后以淋巴结为中心增殖、分化,加快疾病进程[15]。中高分化型癌细胞具有生长缓慢、恶性程度低等特征,而低分化细胞则相反,具有很强的分化、转移等潜力,是临床风险极高的肿瘤分型[16]。肿瘤分期可综合评估患者肿瘤部位、淋巴结转移及是否远处转移等,临床分期越高,则提示癌细胞恶性程度越高[17]。

CK2β归属于蛋白激酶,广泛分布于机体真核细胞中,可发挥CK2信号传导作用,而CK2可激活信号传导途径阻止宫颈癌细胞的凋亡进程,且还能形成宫颈癌组织血管,对宫颈癌的发生、发展起一定促进作用[18]。E-cadherin是临床常见的抑癌因子,正常情况下其与机体内连环素有机结合形成复合体结构,在维持上皮细胞结构稳定等方面具有重要作用,而宫颈组织发生癌变后,E-cadherin水平明显降低,进而破坏上皮细胞结构稳定性,提高宫颈癌细胞增殖、分化及迁移的能力,因而E-cadherin是宫颈癌的保护因素[19]。本次研究对象及得出的结论仅限于60 例宫颈癌患者,仍需扩充研究样本;同时E-cadherin与CK2β蛋白的相关性可作为下一步研究思路,值得临床进一步研究和推广。

综上所述,E-cadherin、CK2β表达与宫颈癌淋巴结转移、临床分期和分化程度相关,且E-cadherin与CK2β是影响宫颈癌患者3年生存率的独立预后因素。