不同免疫剂量与次数对蛋鸡禽流感抗体效价的影响

饶 希 清流县畜牧兽医水产中心 福建 清流 365300

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）感染家禽后引起的病毒性疫病，其中高致病性禽流感具有发病急、传播快、发病率和病死率高等特征，不仅对家禽业危害巨大，而且具有重要公共卫生学意义[1]，我国将其列入一类病种。接种疫苗是目前我国控制禽流感的重要措施，2018年以来全国强制免疫使用重组禽流感三价灭活疫苗（H5N1 Re-11+Re-12株+H7N9 Re-2株），但禽流感病毒具有基因型复杂、变异快等特点，随着时间推移，禽流感流行毒株已发生变异。2022年3月，全国决定统一采用新的禽流感重组三价疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株），目前尚未见对新疫苗免疫效果的报道。本试验旨在研究不同剂量和免疫次数对蛋鸡禽流感抗体消长规律的影响，为新毒株禽流感疫苗免疫程序的优化提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 试验在清流县鑫鸿盛生态养殖有限公司蛋鸡养殖场进行，选择35日龄蛋鸡160羽（AIV母源抗体衰减至4log2以下）进行试验。

1.2 免疫疫苗 重组禽流感病毒三价灭活疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株），青岛易邦生物工程有限公司生产（批号：兽药生字150132368）。

1.3 免疫分组与免疫剂量 试验蛋鸡随机分为单次免疫组（Ⅰ组、Ⅱ组）和两次免疫组（Ⅲ组、Ⅳ组），共4组，每组40羽。Ⅰ组免疫接种0.5 mL（疫苗说明书推荐剂量）；Ⅱ组免疫接种1.0 mL；Ⅲ组首免接种0.5 mL，二免接种0.5 mL；Ⅳ组首免接种0.5 mL，二免接种1.0 mL。免疫接种部位为颈部皮下。

1.4 检测试剂 禽流感病毒H5亚型（Re-13株、Re-14株）、H7亚型（Re-4株）血凝抑制试验抗原及阴阳对照血清，均由哈尔滨国生生物科技服份有限公司生产（批号：20220316，规格：2 mL/瓶）。

1.5 抗体检测方法 根据《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2020），待检样品血清以完全抑制（完全流淌）4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。HI值小于或等于3log2时判定HI试验阴性；HI值等于4log2时为可疑；HI值大于或等于5log2时判定HI试验阳性。免疫合格率（免疫合格个体数占群体总数）大于或等于70%为群体免疫合格。

1.6 采血 各组（40羽）在首免接种后第21 d、90 d、150 d、180 d分别进行翅下静脉采血。

2 结 果

2.1 抗体效价 疫苗免疫后，不同日龄蛋鸡血清中H5亚型（Re-13株、Re-14株）、H7亚型（Re-4株）3种抗体滴度见图1-图3。各组21 d时抗体滴度水平最高，HI值均达7.9log2以上，随着时间延长，HI值呈逐渐下降趋势。单次免疫组（Ⅰ组、Ⅱ组）90 d时开始下降，180 d时Ⅰ组的3种抗体HI值分别为3.8log2、4.1log2、3.6log2，Ⅱ组的3种抗体HI值均为3.9log2。

图1 各组H5Re-13株抗体消长情况

图3 各组H7Re-4株抗体消长情况

两次免疫组（Ⅲ组、Ⅳ组）150 d时开始下降，180 d时Ⅲ组的3种抗体HI值分别为7.5log2、7.3log2、7.2log2，Ⅳ组 的3种 抗 体HI值 分 别 为7.6log2、7.4log2、7.3log2。

图2 各组H5Re-14株抗体消长情况

2.2 抗体平均合格率 疫苗免疫后，不同日龄蛋鸡血清中H5亚型（Re-13株、Re-14株）、H7亚型（Re-4株）3种抗体的平均合格率见图4-图6。各组21 d时合格率均达95%以上，单次免疫组（Ⅰ组、Ⅱ组）的合格率从90 d逐渐下降，150 d时合格率处于保护临界值，180 d时低于国家要求的最低标准（70%）；两次免疫组（Ⅲ组、Ⅳ组）的合格率从150 d逐渐下降，180 d时合格率仍达80%以上。

图4 各组H5Re-13株抗体平均合格率

图5 各组H5Re-14株抗体平均合格率

图6 各组H7Re-4株抗体平均合格率

3 讨 论

1）通过抗体监测，首免后21 d，Ⅳ组3种抗体滴度水平均达7.9log2以上，群体合格率95%以上，表明新型重组禽流感三价灭活疫苗具有良好免疫原性。通过比较，Ⅰ组与Ⅱ组的抗体滴度和合格率差异不显著，表明加大剂量并不能显著提高免疫效果，在实际中免疫剂量按疫苗说明要求即可达到免疫效果，与杨飞燕等[2]研究结果一致。

单次免疫组的免疫有效期较短，90 d时抗体滴度、合格率均开始下降，150 d时抗体滴度处于保护临界值，180 d时低于国家标准（小于70%）。两次免疫组180 d时抗体滴度、合格率仍高于国家标准，下一步还应延长检测时间，确定有效抗体滴度持续程度。通过单次免疫组（Ⅰ组、Ⅱ组）与两次免疫组（Ⅲ组、Ⅳ组）的比较，结果显示两次免疫的抗体持续时间比单次免疫更长，与陈渊泉[3]对麻鸭和番鸭禽流感免疫的研究结果一致。两次免疫剂量加强组（Ⅳ组）的免疫效果与两次免疫常规剂量组间无明显差异，生产实际中，考虑疫苗成本、药物残留、安全性等因素，建议蛋鸡场按说明剂量免疫2次是最优的免疫程序。

2）做好禽流感防控，除了接种免疫，还应做好生物安全、饲养管理、日常消毒等工作，建议每间隔2个月定期按比例进行抗体监测，要求群体抗体滴度要大于或等于4log2，但江斌等[4]认为群体抗体滴度要大于或等于6log2才能抵挡病毒传染。

3）本试验为制定免疫程序提供参考依据，各养殖场在具体免疫时，应根据养殖品种、母源抗体等情况，制定具体的免疫程序。