不同干制方式对新疆野生裂盖马鞍菌多糖含量的影响

石 越 努尔买买提* 玛依拉 李文文

（1伊犁师范大学微生物资源保护与开发利用重点实验室，新疆伊宁 835000；2伊犁师范大学生物与地理科学学院，新疆伊宁 835000）

马鞍菌（Helvella）属子囊菌门（Ascomyzcota）盘菌纲（Discomycetes）盘菌目（Pezizales）马鞍菌科（Helvellaceae），分布于中国新疆、河北、山西、甘肃、四川、湖南、云南等地区。

在新疆，裂盖马鞍菌常见于塔里木盆地北的叶尔羌河及塔里木河周边的胡杨林生态系统、新疆杨树林以及库尔勒香梨树林生态系统中，在北疆的伊犁哈萨克自治州昭苏县也有发现[1]。因为人工培育裂盖马鞍菌难度过大，加上人们对该菌生物特性了解不全面，至今仍不能进行人工栽培[2]。在野生环境中，裂盖马鞍菌生长所需的水流量、环境温度、湿度、土壤条件以及光照等生态因子不可控。随着生态环境日益恶化，人为保护力度不足，野生裂盖马鞍菌处于灭绝边缘[3]。

裂盖马鞍菌是由新疆独有的生态环境孕育出的珍稀野生食用菌，质嫩味美，营养丰富。长期食用裂盖马鞍菌，不仅可以提升免疫力、促进大脑发育、预防脑动脉硬化、促进副肾皮质的激素分泌，还具有提高人体应激能力和溶血栓、减少体内胆固醇等多种保健功能[4]。裂盖马鞍菌含有的多糖类物质是抵抗衰老的重要成分，其多糖含量高于其他食用菌，且健康无毒害。

不同的干制方式会对裂盖马鞍菌多糖含量产生一定的影响[5]，进而影响裂盖马鞍菌的营养价值和保健作用。本文研究了烘干、自然晒干和自然阴干3种干制方式下新疆野生裂盖马鞍菌多糖含量的差异，选择了更有效的裂盖马鞍菌干制方式，以期为马鞍菌多糖的开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

1.1.1 供试材料。供试野生裂盖马鞍菌于2021年5月采摘自新疆昭苏。

1.1.2 试验仪器。供试仪器有电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9140A，上海齐欣科学仪器有限公司）、数显恒温水浴锅（HH-S6，江苏金怡仪器科技有限公司）、可见分光光度计（722S，上海菁华科技仪器有限公司）、球形索氏提取器（QX-06，杭州汇尔仪器设备有限公司）、旋转蒸发仪（R-300EL，瑞士步琦有限公司）、高速冷冻离心机（H1750R，湖南湘仪实验仪器开发有限公司）、超纯水机（UPR-Ⅱ-15TNZ，四川优普超纯科技有限公司）。

1.1.3 试验试剂。主要试剂包括乙醚、果胶酶、三氯乙酸、95%乙醇、葡萄糖、苯酚、硫酸等，均为分析纯。

1.2 试验设计

试验根据野生裂盖马鞍菌干制方式不同设3个处理，分别为自然晒干处理（A）、自然阴干处理（B）、烘箱80℃烘干处理（C）。对3个处理样品中的多糖含量进行检测、分析，比较不同干制方式对野生裂盖马鞍菌多糖含量的影响。

1.3 试验方法

1.3.1 裂盖马鞍菌多糖的提取。使用小毛刷刷净裂盖马鞍菌表面及根部的尘土，将其研磨成粉末之后准确称取20 g。用滤纸包包好放入索氏提取器中，紧贴抽提管内壁，滤纸包高度低于虹吸管，加入乙醚抽提8 h左右，用玻璃棒蘸取抽提管中的乙醚滴于滤纸上，无脂肪残留即为抽提终点。抽提结束取出滤纸包烘干，加入60 mL超纯水、10 mg果胶酶，40℃保温2 h，再加入100 mL超纯水，沸水浸提2 h，使用布氏漏斗抽滤。第2次加入超纯水100 mL，沸水浸提1 h，抽滤。第3次加入超纯水50 mL，沸水浸提30 min，抽滤之后合并3次浸提液[6]。将浸提液减压浓缩至原来体积的1/4左右，再加入浓缩后体积7%的2 mol/L三氯乙酸[7]，使溶液中的三氯乙酸达到一定的质量浓度，然后振荡25 min，4℃静置过夜，将上清液于4℃、12 000 r/min条件下离心10 min，取上清液，加3倍体积的95%乙醇，4℃静置过夜，分离沉淀，于60℃烘干，即可得到新疆野生裂盖马鞍菌粗多糖样品。

1.3.2 葡萄糖标准溶液配制。称取葡萄糖10 mg，加超纯水定容至 100 mL，分别取 0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL加入试管中，再补超纯水至1.0 mL，后向各试管中加入6%1.0 mL苯酚溶液，混匀后迅速加入5.0 mL浓硫酸，振荡混匀，静置10 min后沸水浴15 min，取出冷却至室温，静置20 min。用可见分光光度计在490 nm波长下测定吸光度，并绘制标准曲线。

1.3.3 贮备液配制。准确称取新疆野生裂盖马鞍菌多糖样品10 mg，加超纯水定容至100 mL，配制成浓度为0.1 mg/mL的贮备液，吸取溶液1 mL，同1.3.2操作，利用苯酚-硫酸法[8]测定样品在490 nm波长下的吸光度，根据上述葡萄糖标准曲线计算样品中的总糖含量，从而计算换算因子。

1.3.4 样品提取液配制。分别准确称取自然晒干、自然阴干及80℃烘干的新疆野生马鞍菌粉末样品0.5 g，用三氯乙酸法除去蛋白质后，离心，将滤液分别加超纯水定容至100 mL，分别取3种溶液1 mL，再用苯酚-硫酸法分别测定吸光度，然后代入回归方程，求得3种样品提取液的多糖含量。

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线

葡萄糖标准曲线见图1，回归方程为y=0.043 7x+0.085 1。

图1 葡萄糖标准曲线

2.2 换算因子计算

换算因子计算公式如下：

式中：W1为多糖重量（mg），C1为多糖溶液中葡萄糖浓度（mg/mL），D为稀释倍数。贮备液的吸光度为0.386，葡萄糖浓度为6.89，稀释倍数为100，按照式（1）计算 f=1.45。

2.3 多糖含量测定

裂盖马鞍菌多糖含量计算公式如下：

式中：C2为样品提取液中葡萄糖浓度（mg/mL），D为稀释倍数，f为换算因子，W2为样品重量（mg）。

由表1可知，不同处理的马鞍菌多糖含量按照从大到小的顺序为处理C＞处理A＞处理B。处理C为新疆野生裂盖马鞍菌的最佳干制方式，即用烘箱80℃烘干，可最大限度地保留裂盖马鞍菌多糖。

表1 不同处理对裂盖马鞍菌多糖含量的影响

3 结论与讨论

3.1 结论

经烘箱80℃烘干的裂盖马鞍菌多糖含量高于自然阴干和自然晒干的裂盖马鞍菌多糖含量，不同干制方式的马鞍菌多糖含量具体表现为烘干＞晒干＞阴干。因此，新疆野生裂盖马鞍菌采用烘干的方式能尽可能地保留其中的多糖。

3.2 讨论

烘干的裂盖马鞍菌多糖含量大于晒干的裂盖马鞍菌，这可能与晒干时的环境因素有关[9]，较长的干制时间导致裂盖马鞍菌糖分流失严重，因而多糖含量降低；晒干的裂盖马鞍菌多糖含量大于阴干的裂盖马鞍菌，这可能与晒干和阴干时的温度、湿度或光照的差异有关，或是裂盖马鞍菌内部多糖结构产生了变化，从而影响了多糖含量，具体原因还有待研究。

本试验采用热水浸提法提取新疆野生裂盖马鞍菌多糖，此方法操作简单，不会破坏多糖结构，能把多糖损耗降到最低，且工艺不复杂，成本不高，但需要较长的提取时间和较高的提取温度。采用乙醚脱脂，与其他溶剂相比效果较好。采用三氯乙酸法去除裂盖马鞍菌蛋白，反应温和、效果好，多糖的损失率低。采用苯酚-硫酸法测定裂盖马鞍菌多糖含量，方便快速、灵敏度较好。经恒温电热鼓风干燥箱烘干的裂盖马鞍菌多糖可以更好地保留，为新疆野生裂盖马鞍菌多糖的进一步研究奠定了基础。