液质联用快速检测猪肉中的甲氧氯普胺

黄 霞，周春红，蒋 雨，杨丽平

（1.宜宾市叙州区食品检验检测中心，四川宜宾 644699；2.重庆市黔江食品药品检验所，重庆 409000； 3.宜宾市食品药品检验检测中心，四川宜宾 644002）

甲氧氯普胺，又名灭吐宁、氯普胺、灭吐灵和胃复安等，CAS号为364-62-5，英文名称为4-Amino-5-chloro-N-(2-(diethylamino)ethyl)-2-methoxybenzamide。分子式为C14H22ClN3O2，分子量为299.8，化学结构式见图1。甲氧氯普胺因有止吐镇静的作用，在临床上主要用于治疗恶心和呕吐，可协助胃排空障碍的患者排空胃部，并治疗胃食道逆流。本品也可用于治疗偏头痛，并可治疗胃轻瘫[1-4]。

图1 甲氧氯普胺化学结构式

《中华人民共和国农业部公告第560号》指出，人用胃肠道药品用于动物源性食品缺乏残留检测实验数据，会增加动物源性食品中药物残留危害，因此明确规定动物源性食品中甲氧氯普胺为禁用兽药。国内外的研究大都集中在甲氧氯普胺作为人用胃肠道药物的检测以及血液中的含量。对于动物源性食品中的残留检测文献发表较少。甲氧氯普胺的检测有多种仪器，如紫外分光光度计、液相色谱仪、气相色谱仪、气质联用和液质联用等。本文采用液质联用电喷雾离子检测器快速检测猪肉中甲氧氯普胺的残留量，具有简便、快速、回收率高的特点[5-8]。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

甲氧氯普胺标准物质（中国食品药品检定研究院）；乙腈、甲醇、正己烷均为色谱纯（山东大禹）；无水乙酸钠为分析纯（成都科隆）；实验用水为超纯水（舒活泉）。

AB4500Q液质联用仪（配有电喷雾离子源和大气压化学源，美国AB公司)；CP225D电子天平（赛多利斯）；LD4-2C离心机（北京京立离心机有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 对照品溶液的配制

精密称取甲氧氯普胺标准物质10.0 mg于10 mL 容量瓶中，甲醇溶解定容至10 mL，摇匀，得到 1 000 μg·mL-1的标准贮备液（4 ℃冰箱避光保存可使用3个月）。精密吸取100 μL甲氧氯普胺标准贮备液于10 mL容量瓶中，甲醇稀释至10 mL，摇匀，得到10 μg·mL-1的标准中间液（4 ℃冰箱避光保存可使用1个月）。再精密吸取100 μL甲氧氯普胺标准中间液于10 mL容量瓶中，初始流动相稀释至10 mL，摇匀，得到100 ng·mL-1的标准中间液（现用现配）。分别精密 吸 取0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL 和0.400 mL于进样瓶中，阴性样品提取液定容至 1.00 mL，得 到 浓 度 为2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、20 ng·mL-1和40 ng·mL-1标 准 曲 线 工 作液（现用现配）。

1.2.2 样品前处理方法

选取未含甲氧氯普胺的阴性猪肉样品，充分打碎混匀，称取5 g置于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈，涡旋1 min，超声波提取30 min，加入2 g无水硫酸钠，充分混匀，3 000 r·min-1离心5 min。精密吸取上清液10.0 mL，加入3 mL乙腈饱和的正己烷，充分混匀，涡旋1 min，3 000 r·min-1离心5 min，去除上层正己烷，乙腈层，氮气吹干浓缩，精密吸取初始流动相1.0 mL充分溶解，过0.22 μm有机相滤膜，上机检测。

1.2.3 色谱检测条件

色谱柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；进样体积：5 μL；流速：1.0 mL·min-1；流动相：0.1%甲酸/水（A）和乙腈（B）；梯度洗脱程序：0～5.0 min，95%～5%A，5.1～10.0 min，5%A，10.1～15.0 min，95%A。

1.2.4 质谱检测条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；采集模式：多反应离子监测（MRM）；扫描模式：正离子扫描；离子源温度：600 ℃；电喷雾电压：5 500 V；气帘气压力：35 psi；喷雾气压力：60 psi；辅助气压力：70 psi；其余质谱条件如表1所示。

表1 待测组分质谱条件

2 结果与分析

2.1 基质效应

化学分析中，基质是指样品中除分析物以外的组分。基质常对分析物的分析过程有显著干扰，并影响分析结果的准确性。本实验中猪肉样品提取液中的离子强度会对分析物活度系数有影响，这些影响和干扰被称为基质效应。

目前最常用的去除机制效应的方法是尽可能地保持标准曲线的基质和待测组分基质一致。本实验采用未含有待测组分的空白猪肉提取液作为标准工作液的稀释剂，能有效地去除基质干扰。

2.2 标准曲线、相关系数

本实验以待测组分的浓度和色谱峰面积作为X、Y轴绘制线性回归方程。标准曲线线性范围为2～ 40 ng·mL-1，相关系数R2为0.999 5（标准曲线见 图2）。

图2 甲氧氯普胺标准曲线

2.3 检出限、定量限

信噪比为3（S/N=3）时为方法检出限，信噪比为10（S/N=10）时为方法定量限。空白基质配标最低点St1浓度为2 ng·mL-1（谱图见图3、图4），信噪比为S/N=10.9。根据公式1得到方法检出限为 0.220 μg·kg-1，定量限为0.734 μg·kg-1。

式中：X为方法检出限，μg·kg-1；S/N为信噪比；Cst1为st1浓度，ng·mL-1；n为稀释倍数；V为定容体积，mL；m为样品质量，g。

图3 标准品ST3定量离子图谱

图4 标准品ST3定性离子图谱

2.4 回收率、RSD

选用阴性鲜猪肉样品，分别在0.8 μg·kg-1、 4.0 μg·kg-1、16.0 μg·kg-1低中高3个加标水平对待测组分进行加标回收，高中低3个浓度各测定6次，结果见表2。16.0 μg·kg-1加标回收色谱图见图5、图6。

表2 回收率和RSD

图5 16.0 μg·kg-1加标回收定量离子图谱

图6 16.0 μg·kg-1加标回收定性离子图谱

3 结论

本实验通过液质联用检测猪肉中的甲氧氯普胺，在仪器的响应值、方法的回收率上都能满足检测需要。在后续的工作中应在此基础上进行更深入的多残留组分、多种基质类型检测的研究验证。在样品前处理上力求以更环保、更高效率、更准确的提取方法为目的，开展检测研究。