抗核抗体检测受试者核谱及核型特征分析

李 毓，张 强

自身免疫性疾病是一组对自身抗原产生免疫应答并造成组织损伤为特征的疾病，而大多数病因尚不清楚。有证据[1]表明，自身抗体出现比自身免疫性疾病发病要早数年，因此，抗核抗体(ANA)可能是疾病进程的中间标志物，也可能是增加自身免疫性疾病易感性的信号。ANA由B细胞分泌，并与大分子细胞成分如组蛋白、抗核糖体、DNA结合[2]，不同ANA类型和亚型与不同的自身免疫性疾病相关，例如抗DNA自身抗体与系统性红斑狼疮(SLE)显著相关，而抗核蛋白与系统性硬化病相关。此外，自身抗体类型(IgG、IgA、IgM)根据具体疾病状态而异，虽然ANA通常在自身免疫性疾病如SLE、类风湿性关节炎(RA)中被发现，但也在无症状个体中被发现，在健康人群中检出率高达25%[3]，提示无症状个体ANA阳性可作为未来自身免疫性疾病发展的预测因子。解决无症状个体ANA阳性可作为疾病发生预测因子这一问题，了解ANA在自身免疫性疾病、其他疾病(如感染)和健康人群中阳性检出情况十分必要。因此，本研究分析行ANA检测受试者的ANA实验室检测结果。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年3月至2019年12月于我院进行ANA检测的331名受试者为研究对象。其中男181名，女150名；年龄1～92岁；疾病类型：强直性脊柱炎(AS)75例，RA 63例，SLE 12例，干燥综合征(SS)7例，感染126例，健康人群48名。排除标准：恶性肿瘤及血液系统疾病病人；目前正在接受已知能改变ANA滴度的药物病人，药物包括普鲁卡因胺、氯丙嗪、异烟肼、奎宁和磺胺类等药物。依据年龄将病人分为4组：<20岁组、<40岁组、<60岁组和≥60岁组。

1.2 方法 用不含抗凝剂的真空负压采血管采集血液样本，自然凝固15～20 min后，4 000 r/m离心10 min，以HEp-2细胞为底物，采用间接免疫荧光法检测ANA，仪器为EUROBlotMasterⅡ全自动免疫印迹仪、LEICA DM500荧光显微镜及欧蒙原装试剂盒。其中ANA滴度分为1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200；核型分为核颗粒型、核均质型、核仁型、胞浆颗粒型、着丝点型、核膜型和其他型；ANA谱分为抗核糖核蛋白/抗史密斯(nRNP/Sm)、抗史密斯(Sm)、抗SS A(SS-A)、抗SS B(SS-B)、抗硬皮病70(Scl-70)、抗PM-Scl(PM-Scl)、抗Jo-1(Jo-1)、抗着丝粒蛋白B(CENP B)、抗增殖蛋白(PCNA)、抗双链DNA抗体(dsDNA)、抗核小体(AnnA)和抗组蛋白(AHA)。根据试剂盒的操作说明，按照临床标准程序检测，结果判读要求为两名经验丰富的专职工作人员共同完成。细胞核显示特异性荧光模型为阳性，细胞核不显示特异性荧光为阴性。抗体滴度样本稀释度方法：将10.1 μL样本加入1 000 μL PBS吐温缓冲液中并充分混匀(即起始稀释度为1∶100)，在每100 μL的PBS吐温缓冲液中加入11.1 μL前一步的浓缩液，并充分混匀，依次稀释。

2 结果

2.1 ANA检出情况 331份标本中检出ANA阳性者共127份，检出率为38.4%，其中男性阳性检出率27.6%，女性51.3%。随着滴度的增加，女性ANA阳性检出率下降；男性以低滴度为主，高滴度ANA阳性检出率变化较小；女性各滴度ANA检出率高于男性。不同年龄组阳性检出率高峰出现在<60岁组，为51.0%；<40岁组和<60岁组滴度增加阳性检出率下降，≥60岁组滴度(1∶1 000)阳性检出率高于滴度(1∶320)和滴度(1∶3 200)(见表1)。

表1 不同性别及年龄段受试者ANA阳性检出情况[n；百分率(%)]

2.2 不同性别及年龄段受试者核型检出情况 不同核型阳性检出率女性均高于男性。男性核型阳性检出率前三位为核颗粒型、胞浆颗粒型和核仁型；女性核型阳性检出率前三位为核颗粒型、胞浆颗粒型和着丝点型。不同年龄组均以核颗粒型和胞浆颗粒型为主，略有差异的是第三位，<40岁组为核仁型，<60岁组为核均质型和核仁型，≥60岁组为着丝点型(见表2)。

表2 不同性别及年龄段受试者核型阳性情况[n；百分率(%)]

2.3 不同性别及年龄段受试者ANA谱检出情况 男性除Scl-70和Sm阳性检出率略高于女性外，女性其他ANA谱阳性检出率均高于男性。女性ANA谱阳性检出率前三位为SS-A、CENP B和dsDNA/SS-B。<40岁组ANA谱阳性检出率前三位为SS-A、nRNP/Sm及dsDNA、AnnA；<60岁组ANA谱阳性检出率前三位为SS-A、nRNP/Sm和SS-B；≥60岁组ANA谱阳性检出率前三位为Sm、CENP B和SS-A(见表3)。

表3 不同性别及年龄段受试者ANA谱阳性情况[n；百分率(%)]

2.4 不同疾病ANA核型及ANA谱检出情况 AS、RA、SLE、SS、感染和健康人群ANA阳性检出率分别为：36.0%、60.3%、91.7%、100.0%、29.4%和14.6%。AS与感染以低滴度为主，RA、SLE和SS在各滴度均有较高阳性检出率，健康人群在低、中、高滴度中阳性检出率相似。AS、RA、SS和健康人群以核颗粒型ANA核型为主，SLE以核颗粒型和着丝粒型为主。ANA谱方面，AS、RA、感染和健康人群未见特异性抗体，SS-A、dsDNA和AnnA在SLE中有较高阳性检出率，nRNP/Sm、SS-A、SS-B和PM-Scl在SS中有较高阳性检出率，其中SS-A和SS-B为100.0%阳性检出(见表4)。另外，在阳性标本中，单一阳性核型为100例(78.7%)，两种核型同时阳性为27例(21.3%)。ANA谱单一抗体阳性为25例(19.7%)，两阳12例(9.4%)，三阳6例(4.7%)，四阳3例(2.4%)，五阳1例(0.8%)。

表4 不同疾病ANA核型及ANA谱阳性情况[n；百分率(%)]

续表4

3 讨论

细胞内抗原自身抗体水平异常是全身性结缔组织疾病的标志，间接免疫荧光法是检测ANA最常用的常规方法，ANA现已成为诊断和评价自身免疫性病人预后的可靠生物标志物。早期诊断自身免疫性疾病，在器官损伤发生前进行治疗[4]，可显著改善疾病临床症状及延缓疾病进展。实验室检测的不断改进，特别是检测灵敏度和特异性的提高，以及公众和临床医生对ANA和自身免疫结果的认识的提高，人们越来越重视对ANA筛查。对ANA检查结果的分析，以了解ANA分布特征，滴度、核型和抗体谱的表现与疾病的关系，有利于临床医生对疾病进行诊断、分型及分期等。研究[5]发现ANA阳性率呈递增趋势，这可能是由于现在的生活方式改变，特别是在城市地区，也可能是由于检测灵敏度的提高。现在较为统一的认识，自身免疫性疾病在女性群体中较为高发，本研究结果显示，女性ANA阳性检出率高达51.3%，明显高于男性，与王健等[6]研究结果相似。女性ANA阳性检出率高于男性的原因，可能是由于性激素水平的改变，部分由以前怀孕引起的免疫状态的改变，或者是由于代谢和环境因素。本研究结果显示，ANA检出率高峰出现在40～60岁人群，可能与这一年龄段人群女性性激素水平明显变化有关。王泽筠等[7]研究结果显示，自身免疫性疾病病人检出ANA阳性率高峰人群为20～50岁，高达82.27%，与本研究结果差异较大，可能与年龄组划分和研究对象不同有关。

ANA滴度和核型可以反映自身免疫性疾病的严重程度[8]，病人进入自发或免疫抑制剂诱导的缓解期，滴度往往逐渐下降。颗粒型核型与疾病活动性和免疫抑制剂治疗的变化没有密切的关系，颗粒型核型更趋向于症状缓解，然而从诊断的角度来看，颗粒型抗核抗体的滴度通常不是关键的，疾病活动性与非颗粒核型的滴度密切相关。因此在评估ANA滴度的意义时，需要区分ANA核型是颗粒型还是非颗粒型[9]。本研究结果显示，颗粒型核型为主要的检出核型，但在SLE病人中可以检出25.0%的着丝粒核型。ANA在AS中有36%的阳性检出率，与陈水绵等[10]结果基本相符。

ANA阳性也可见于非自身免疫性炎症疾病，包括急性和慢性感染。当ANA试验用于非特异性临床症状(如发烧、关节疼痛、肌痛、疲劳、皮疹或贫血)病人的初始筛查时，感染导致阳性结果的可能性将增加[11]。本研究结果显示，感染病人ANA阳性检出率为29.4%，大部分为低滴度核颗粒型。周燕娟等[12]研究显示，慢性阻塞性肺疾病病人ANA阳性率高达33.9%，但与疾病严重程度关联性不高。另外一项研究[13]也表明，白血病化疗感染病人比非感染病人ANA检出率要高，对其可能的解释为：自身免疫是由多种机制介导，包括分子拟态、多克隆T和B细胞反应、交叉反应抗原、新抗原的形成和隔离/隐蔽抗原的释放。自身抗体的形成是分子模拟的结果，所有这些机制都可能有感染直接或间接参与。例如，人类氨基酸序列与细菌或病毒中发现的序列相似，研究[14]表明DNA具有免疫原性，可以引起过敏病人的超敏反应。抗DNA自身抗体作为外来DNA抗原的异常反应而产生，异常的B细胞导致产生交叉反应的自身抗体。感染可以作为环境引物，诱导或促进遗传性易感个体的自身免疫性疾病发病，或者刺激机体产生一过性的物质，被ANA试剂盒的抗体所识别。当病人患有感染时，ANA阳性通常是短暂的，这解释了为什么一些ANA阳性病人重复检测后可能显示正常结果。

当前诊断自身免疫的建议包括检测ANA阳性、实验室检查、详细分析病人的个人和家庭史以及环境/获得性危险因素，因此要考虑感染所致的短暂ANA阳性，建议有必要进行此类病人的ANA结果复查。综上，ANA在特定人群不同性别、不同年龄段有不同的阳性检出率，此外，感染和健康人群阳性结果也应给予一定的重视。