山楂提取物与抗生素复配的抑菌作用研究

山楂属蔷薇科的一种，其果实具有很高的营养价值，还具有健脾消食、降血压血脂、抗动脉粥样硬化等功效[1]。山楂中含有多种活性物质，其提取物安全无毒且含有一定的营养成分，可用于食品着色和饮料的配制等[2-3]。对于山楂提取物的抗菌作用，已有部分研究成果。姜珂等[4]研究了山楂提取物与β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的协同抑菌效果，吕晓楠等[5]研究了乳酸链球菌素（Nisin）与山楂提取液的复合抗菌效果。目前，关于山楂提取物与药物复配后抗菌作用的研究相对较少。本研究采用一定的工艺提取山楂中的抑菌物质，将其与抗生素复配后研究其协同抑菌性能，以期为山楂的综合利用提供试验参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

山楂：购自青岛胶州市展记炒货；大肠杆菌、变形杆菌：青岛工学院微生物实验室提供；阿莫西林分散片：中诺药业；氯霉素片：广东华南药业集团；克拉霉素分散片：成都恒瑞制药。

1.2 试验设备

101-3A型电热鼓风干燥箱，联鲸电子科技有限公司；SW-CJ-1F型单人双面超净工作台，智诚科技有限公司；HJPS-250型恒温培养箱，智诚科技有限公司；YXQ-LS-50SII型立式压力蒸汽灭菌锅，上海博迅实业有限公司；GM-B2002电子天平，南京伯尼塔科学仪器有限公司；SE-750高速粉碎机，永康市圣象电器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 山楂活性物质的提取

用自来水冲洗山楂，去籽，阴干，置于烘箱干燥后，粉碎、过筛，取40目的山楂粉，避光保存于磨口瓶中，备用。称取原料粉末10 g，用70%的乙醇作萃取剂，按照20∶1的比例（70%乙醇∶原料粉末，mL∶g）加入。采用70 ℃超声波萃取40 min后，进行真空抽滤，回收滤液，在同样的条件下，再萃取滤渣3次，将滤液进行混合后旋蒸至10 mL，得到浓度为1 g·mL-1的山楂提取物。

1.3.2 抗生素与山楂提取物的复配方案

称取克拉霉素、氯霉素粉末各100 mg，添加20 mL的蒸馏水进行溶解，使其溶液达到5 000 μg·mL-1，储存温度以4 ℃为最佳。将配制好的抗生素溶液与山楂提取物按1∶0、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7比例复配，测定复配液对大肠杆菌、变形杆菌的抑菌效果。

1.3.3 菌悬液的制备

菌种活化后，将菌种接种于牛肉膏液体培养液中，在37 ℃下培养24 h，计数并稀释菌液浓度至1×107CFU·mL-1。

1.3.4 抑菌圈的测定

向平板中加入0.1 mL的大肠杆菌和变形杆菌的菌悬液，将其均匀涂布，再将6 mm直径的灭菌滤纸片浸入复配溶液0.5 h，然后粘贴于培养基上，每个培养皿3片，滤纸片等间距排列，同时做空白对照试验。将培养皿置于37 ℃的培养箱中进行24 h的培养，测量抑菌圈的直径大小，记录数据并计算平均值。

2 结果与分析

2.1 山楂提取物的抑菌作用

由图1可知，1 g·mL-1山楂提取物对大肠杆菌、变形杆菌都有一定程度的抑制效果，且对变形杆菌的抑制较为明显，达到了9.8 mm。20世纪50年代，人们开始对山楂的化学成分进行研究，证实其含有大量的黄酮以及有机酸、金丝桃甙、胆碱、维生素C等成分[1]。出现上述结果的原因可能是山楂提取物中含有的复杂活性成分对大肠杆菌及变形杆菌的生长产生了抑制作用。

图1 山楂提取物的抑菌作用图

2.2 克拉霉素复配液对变形杆菌的抑菌作用

由图2可知，克拉霉素和山楂提取物复配可以增强对变形杆菌的抑菌作用，最佳复配比例为1∶5，此时抑菌圈直径为13.7 mm。继续增加山楂提取物用量，复配物效价下降，可能是提取物中过多的复杂成分与克拉霉素产生了拮抗作用，也可能是山楂提取物偏酸性，随着山楂提取物比例增加，复配液的pH值减小，减弱了克拉霉素的抑菌活性。

图2 克拉霉素复配液对变形杆菌抑菌作用图

2.3 克拉霉素复配液对大肠杆菌的抑菌作用

由图3可知，当复配比例为1∶0到1∶5时，抑菌圈的直径逐渐增大，说明克拉霉素和山楂提取物复配可以增强对大肠杆菌的抑菌作用，复配比例为1∶5时抑菌效果最好，抑菌圈直径为13.0 mm。克拉霉素属于大环内酯类抗生素，其抑菌机理是通过与细胞核糖体50S亚基结合，从而抑制细菌蛋白质的合成，具有较强的抑菌能力。继续增加山楂提取物用量，复配物的效价降低，其原因可能是提取物中的多种组分与克拉霉素有一定的拮抗性，或者是pH值减小影响了克拉霉素的抑菌效果。

图3 克拉霉素复配液对大肠杆菌抑菌作用图

2.4 氯霉素复配液对变形杆菌的抑菌作用

由图4可知，氯霉素和山楂提取物复配明显地增强了对变形杆菌的抑菌作用，且复配比例为1∶4时，抑菌效果最好，抑菌圈直径为28.8 mm，为单独使用氯霉素时的1.72倍。有学者研究显示氯霉素与维生素C合用会导致抗菌药物的抗菌活性显著下降[6]，本实验中克拉霉素复配液在1∶5时抑菌效果最好，而氯霉素则是在复配比为1∶4时抑菌效果较好，推测其原因可能是山楂提取物中含有丰富的维生素C，复配比为1∶5时，维生素C对抗菌活性的影响超过了氯霉素与提取物中其他活性物质复配时的协同抑菌作用。

图4 氯霉素复配液对变形杆菌抑菌作用图

2.5 氯霉素复配液对大肠杆菌的抑菌作用

由图5可知，氯霉素和山楂提取物复配增强了对大肠杆菌的抑菌作用，当复配比例为1∶4时，抑菌效果最好，抑菌圈直径为19.2 mm。氯霉素的抗菌机理是通过抑制肽酰基转移酶的活性，进而抑制蛋白质的合成，属抑菌性广谱抗生素，所以无论是变形杆菌还是大肠杆菌，其抑菌圈直径都较大，抑菌作用较强。

图5 氯霉素复配液对大肠杆菌抑菌作用图

3 结论

本试验选用山楂作为主要原料，经过烘干、粉碎等处理之后，再经超声波提取、真空抽滤等措施获得山楂提取物，并将山楂提取液与抗生素通过不同比例进行复配，通过测定抑菌圈直径大小，对其抑菌效果进行研究，以此来确定最佳复配比例。试验结果表明，克拉霉素复配液的复配比例在1∶5时对供试菌的抑菌效果最好，而氯霉素复配液复配比例在1∶4时对供试菌的抑菌效果最好。山楂提取物与氯霉素复配时协同增效抑菌效果较好，其次是克拉霉素。当超过一定复配比例时，山楂提取物和抗生素复配液的抑菌效果均会有所下降。