LLLT疗法联合盐酸米诺环素对重度牙周炎患者的疗效及对Arg1、STAT6表达的影响*

郅晓雷,惠新宇,张耐新,于晓艳△，华 超

1.华北医疗健康集团峰峰总医院北院区口腔科，河北邯郸 056200；2.开滦总医院口腔科，河北唐山 063000；3.河北省邯郸市口腔医院口腔科，河北邯郸 056000

牙周炎主要是由局部因素引起的牙周支持组织的慢性炎症[1]。牙周炎初期的症状并不明显，当炎症进一步扩散，就会导致牙周膜被破坏，牙槽骨出现吸收的现象，并且牙龈与牙根逐渐分离，龈沟加深并形成牙周袋[2]。若没有得到及时有效的治疗，会导致牙周袋壁出现溃疡及炎症性肉芽组织的形成，使牙周组织被破坏，特别是牙槽骨吸收严重时，还易导致牙齿支持力量不足，从而出现牙齿松动、移位甚至是脱落等情况[3]。低能量激光(LLLT)疗法可改善组织血液循环、加速组织修复、提高痛阈、减少炎性渗出等，具有无创和不良反应少的优势，但其破坏力较强；盐酸米诺环素具有杀菌的功效，主要用于治疗衣原体、支原体感染，但单一使用治疗效果不理想[4-5]。精氨酸酶1(Arg1)是一种具有抗炎、促进组织修复功能的亲水性蛋白，能够在炎症后期修复和重塑由病原微生物造成的组织损伤。信号转导及转录激活蛋白6(STAT6)是介导辅助性T细胞分化的关键信号转导转录子,也是介导过敏性炎性反应的重要因子,在炎性反应中起着重要作用。近年来研究发现，Arg1、STAT6在牙周炎患者血清中存在异常表达，但临床有关LLLT疗法联合盐酸米诺环素治疗对Arg1、STAT6水平影响的报道较少[6-7]。因此，本研究使用LLLT疗法、盐酸米诺环素联合治疗牙周炎患者，分析其对Arg1、STAT6表达的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年6月至2021年6月华北医疗健康集团峰峰总医院诊治的95例重度牙周炎患者，采用随机数字表法分为对照组及联合组。对照组47例，其中男25例，女22例；年龄22～55岁，平均(36.0±11.2)岁；病程1～2年，平均(1.5±0.4)年。联合组48例，其中男24例，女24例；年龄23～54岁，平均(38.5±12.4)岁；病程1～2年，平均(1.5±0.4)年。所有患者基线资料均衡、完整，两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究通过华北医疗健康集团峰峰总医院伦理委员会批准，患者、家属知情同意。纳入标准：所有患者均符合《重度牙周炎诊断标准及特殊人群牙周病治疗原则的中国专家共识》[8]中有关重度牙周炎的诊断标准；患者近3个月内未接受过口腔手术；患重度牙周炎且患牙超过两个，深度超过4 cm，对本研究药物均无过敏史。排除标准：患者在入院前已接受过牙周治疗；近1个月内使用抗菌药物者；处于妊娠期者；意识模糊不清或患有精神疾病，不能够积极配合完成治疗者。

1.2方法 对照组使用盐酸米诺环素(厂家：惠氏制药有限公司；国药准字H10960010；规格：100 mg)，首次剂量0.2 g，12 h或24 h后再次服用0.1 g；联合组在对照组治疗后的第1、2、7天使用LLLT疗法，波长为808 nm，输出功率为80 mW，能量密度为4 J/cm2，光斑面积为0.28 cm2。将激光光纤探头缓慢插入患牙的牙周袋袋底，覆盖袋底及袋内壁，呈“之”字形进行上下提拉照射，照射15 s，同时用湿润的消毒棉卷进行局部隔阻，防止对邻近组织造成损伤。联合组盐酸米诺环素使用剂量与对照组保持一致。

1.3观察指标

1.3.1牙周指数评分[9]包括菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、出血指数(BI)、牙松动度(TM)评分。PLI评分，牙龈边缘无菌斑计0分，见薄层菌斑计1分，中等量菌斑计2分，大量软垢计3分；BI评分，牙龈无炎症、出血计0分，牙龈出现炎症、无出血计1分，牙龈出血呈线状计3分，出血溢出龈沟计4分，自动出血计5分；GI评分，牙龈健康计0分，轻度炎症计1分，炎症出现水肿计2分，中度炎症出现红肿、有出血计3分，重度炎症且肿胀明显、自动出血计4分；TM评分，颊舌方向松动计1分，近远向有松动计2分，垂直松动计3分。

1.3.2PCR检测Arg1、STAT6水平 采用实时荧光定量PCR法测定Arg1、STAT6水平。细胞转染成功，采用Trizol法提取细胞中总RNA，应用mRNA逆转录试剂盒行逆转录获得cDNA，GAPDH为内参。采用Primer5.0软件设计引物。反应条件：94 ℃ 30 s、58 ℃ 45 s复性，72 ℃ 1 min,72 ℃延伸7 min，35个循环。采用2-ΔΔCt方法计算目的基因相对表达量。实验重复3次，取平均值。

1.3.3疾病相关因子及炎症因子测定 分别抽取治疗前、治疗后所有患者空腹静脉血5 mL，以2 000 r/min 离心10 min，离心半径10 cm，取上层血清(肝素抗凝)，于-60 ℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附法测定单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、骨钙素(BGP)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平，试剂盒由上海恒远生物科技有限公司提供。

1.3.4疗效评价标准[10]显效：牙龈肿胀出血等症状消失，牙周袋深度>2 mm，牙龈指数下降50%；有效：牙龈肿胀、出血等症状显著缓解，牙周袋深度>1 mm；无效：牙龈肿胀、出血等临床症状无改善甚至加重。总有效率=(显效例数+有效例数)/总例数×100%。

1.3.5不良反应 记录并比较两组患者皮疹、局部肿胀、胃肠道反应、牙龈肿痛、恶心等不良反应发生情况，总发生率=不良反应发生例数/总例数×100%。

2 结 果

2.1两组牙周指数评分比较 治疗前，两组PLI、GI、BI、TM评分相比，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组患者PLI、GI、BI、TM评分降低，且联合组评分低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组牙周指数评分比较分)

2.2两组龈沟液疾病相关因子比较 治疗前，两组MCP-1、BGP、sICAM-1水平相比，差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组患者MCP-1、sICAM-1水平降低，BGP水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；相比对照组，联合组MCP-1、sICAM-1水平较低，BGP水平较高，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组龈沟液疾病相关因子水平变化

2.3两组血清Arg1、STAT6水平比较 治疗前，两组血清Arg1、STAT6水平相比，差异均无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组患者血清Arg1、STAT6水平降低，且联合组Arg1、STAT6水平低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组血清Arg1、STAT6水平比较

2.4两组炎症因子水平比较 治疗前，两组TNF-α、IL-6、hs-CRP水平相比，差异均无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组患者TNF-α、IL-6、hs-CRP降低，且联合组TNF-α、IL-6、hs-CRP较低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 两组炎症因子水平比较

2.5两组临床疗效比较 治疗后，联合组治疗总有效率(95.83%)高于对照组(80.85%)，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 两组临床疗效比较[n(%)]

2.6两组不良反应发生情况比较 治疗后，联合组不良反应总发生率(14.58%)高于对照组(12.77%)，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表6。

表6 两组不良反应发生情况比较[n(%)]

3 讨 论

牙周病的病因复杂,一般来说是由于大量的牙菌斑和牙结石长时间刺激牙龈引起的[9]。牙周病局部刺激因素包括牙菌斑、牙结石、创伤性咬合、食物嵌塞、不良修复体、用口呼吸等，促进了牙周组织的炎症过程。研究发现，牙龈萎缩是由成年期某种脑激素分泌水平的逐渐降低引起的，导致消化系统无法吸收牙龈最需要的维生素[10]。

牙周炎的治疗应以消炎抑菌为主，盐酸米诺环素是一种具有快速、高效抑菌作用的药物，常用于牙周炎的治疗。但盐酸米诺环素存在耐药性，且对肝功能和肾功能有一定的损害[11]。LLLT是一种能够有效加速牙周组织愈合的激光疗法，随着医学技术的进步，该法目前在临床应用广泛[12]。LLLT用于牙周炎的治疗，可有效消除局部刺激因素，缓解炎症。本研究将两种方法联合，通过内服和外治的方法相结合，可极大发挥两种治疗方法的优势。研究发现，多种因子在牙周炎的进展中起重要作用，其中BGP作为一种合成的维生素K依赖性钙结合蛋白，参与调节骨代谢，进而影响牙槽骨的改建过程，减轻牙槽骨的吸收破坏，延缓骨转换进程；sICAM-1参与多种免疫反应，加重机体炎性反应；MCP-1可激活单核细胞并促进单核细胞趋化，进而加重牙周炎患者牙龈炎性反应[13]。TNF-α、hs-CRP、IL-8为主要的促炎因子，可加重患者病情，对疾病的诊断、评估有一定参考价值，牙周炎患者血清中炎性指标水平显著升高[14-15]。盐酸米诺环素是一种广谱抗菌药物，属于一种半合成的四环素类抗菌药物，具有高效和长效性，作用机制主要是通过抑制细菌或者其他病原菌的蛋白质合成而发挥抗菌、杀菌功效[16]。本研究结果显示，治疗后重度牙周炎患者BGP水平升高，MCP-1、sICAM-1、TNF-α、hs-CRP、IL-8水平降低，且LLLT疗法、盐酸米诺环素联合治疗疗效明显优于单一药物治疗，提示联合治疗可发挥协同作用，盐酸米诺环素可阻止细菌、蛋白质的合成而发挥抗菌的作用,明显抑制与破坏牙周组织和形成牙周袋有关的胶原酶的活性，疗效显著。

Arg1是M2型巨噬细胞的一种亲水性蛋白，当机体发生外伤、感染时需要从外源摄入[17]。慢性重度牙周炎进展可能与巨噬细胞密切相关，且发现Arg1可抑制T细胞和自然杀伤细胞的增殖，以及细胞因子的分泌作用，具有重要的免疫调节功能[18]。研究显示，在重度牙周炎中Arg1表达下降，且Arg1具有促进血管生长和修复、重构损伤组织的功能[19]。STAT6的磷酸化在M2巨噬细胞极化过程中发挥重要作用[20]。相关研究指出，通过抑制STAT6磷酸化，从而抑制巨噬细胞分化为M2型，进一步证实STAT6磷酸化广泛参与细胞增殖、分化、凋亡及炎症等过程[21]。研究发现，在健康牙周组织中有Arg1、STAT6的存在，提示M2型巨噬细胞在维持免疫稳态中有关键作用[22]。盐酸米诺环素的有效成分可能有效抑制胶原酶活性,减少骨吸收,促进牙周膜细胞的附着及牙周组织再生,从而改善慢性牙周炎的症状。LLLT疗法是指功率密度低的红光或近红外光，具有促进伤口愈合、神经再生等作用，安全无创[23]。本研究结果指出，治疗后重度牙周炎患者Arg1、STAT6水平降低，提示LLLT疗法联合盐酸米诺环素药物可有效抑制炎性反应，减轻重度牙周炎牙槽骨的吸收，延缓牙齿脱落，加强疗效。

综上所述，LLLT疗法、盐酸米诺环素联合应用可改善重度牙周炎患者临床症状，有效减轻龈沟液内炎性反应，改善牙周指数，抑制Arg1、STAT6水平，疗效显著，不良反应较少，安全性高，可作为治疗重度牙周炎的有效手段。但本研究样本纳入量较小，可能会使研究结果出现偏倚，需进一步加大样本量深入研究以确认。