A-FABP、NMP22联合Pyk2检测对肌层浸润性膀胱癌的诊断价值分析

王 强，罗涵云，徐述雄，王晓东，王元林

膀胱癌是恶性肿瘤，发病率、转移率及复发率均较高，其发病率与环境和遗传因素有关，近年来呈增长趋势[1-4]。恶性肿瘤可分为浅表性与浸润性2种[5]。浸润性膀胱癌患者会出现血尿、尿频、尿急、尿痛及排尿困难症状，出现此类情况提示肿瘤沿肌层生长，恶性程度较高[6]。有关资料显示，脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)作为细胞内低分子量蛋白质，存在于各种正常组织和细胞中，在脂肪酸代谢中起重要作用[7]；尿核基质蛋白22(NMP22)为膀胱肿瘤标志物，是存在于尿液中的大分子核基质蛋白[8-9]；在调节机体免疫及细胞增殖等方面酪氨酸蛋白激酶2(Pyk2)同样不可忽视[10]。鉴于此，本研究探讨A-FABP、NMP22联合Pyk2检测诊断肌层浸润性膀胱癌的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2017年2月—2020年5月收治的124例肌层浸润性膀胱癌。纳入标准：符合肌层浸润性膀胱癌诊断标准[11]；患者或家属签署知情同意书；临床资料完整。排除标准：合并其他恶性肿瘤；其他疾病放化疗者；妊娠期患者。124例中男99例，女25例；年龄22～77(50.14±11.69)岁；肿瘤分期：T1期31例，T2期38例，T3期55例；分化程度：高分化32例，中分化38例，低分化54例。

1.2研究方法 取124例膀胱癌组织和距离膀胱癌病灶3 cm处正常组织。标本进行固定、脱水、包埋处理后加入抗人Pyk2、A-FABP、NMP22单克隆抗体24 h后采用SP免疫组织化学法检测Pyk2、A-FABP、NMP22水平，试剂盒购于上海艾博抗公司。A-FABP阳性为细胞呈棕黄色，阳性分为3级：弱阳性为阳性细胞数<10%，显色为淡黄色或个别细胞呈黄色至棕黄色；强阳性为阳性细胞>60%，多数细胞呈黄色至棕黄色；中等阳性为阳性细胞数及显色界于弱阳性与强阳性之间[12]。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。Pyk2阳性率判断标准：显微镜下出现棕黄色或棕褐色颗粒状物质即为阳性。NMP22阳性为显微镜下细胞呈黄色或褐色，阳性表达分为Ⅲ～Ⅴ级，Ⅲ级为有可疑肿瘤细胞，Ⅳ级为有肿瘤细胞，Ⅴ级为有形态典型的肿瘤细胞；阴性为显微镜下细胞显色度与背景无差异，分为Ⅰ～Ⅱ级，Ⅰ级为正常细胞，Ⅱ级为有非典型细胞。

1.3观察指标 ①比较癌组织和癌旁正常组织Pyk2、A-FABP、NMP22表达情况。②比较肌层浸润性膀胱癌患者Pyk2、A-FABP、NMP22阳性表达与临床病理特征的关系。③Pyk2、A-FABP、NMP22联合检测对肌层浸润性膀胱癌的诊断价值。

1.4统计学方法 应用SPSS 22.0软件分析数据。计数资料以率(%)表示，比较采用χ2检验；采用受试者工作特征(ROC)曲线评估诊断价值。α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1癌组织和癌旁正常组织Pyk2、A-FABP、NMP22表达比较 癌组织Pyk2、A-FABP、NMP22阳性表达率均高于癌旁正常组织(P<0.01)，见表1。

表1 癌组织和癌旁正常组织Pyk2、A-FABP、NMP22表达比较[例(%)]

2.2Pyk2、A-FABP、NMP22阳性表达与临床病理特征的关系 Pyk2、A-FABP、NMP22阳性率病理分期Ⅲ期患者明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者，低分化患者明显高于中分化及高分化患者(P<0.01)。见表2。

表2 Pyk2、A-FABP、NMP22阳性表达与临床病理特征的关系(例)

2.3Pyk2、A-FABP、NMP22单独及联合检测对肌层浸润性膀胱癌的诊断价值 ROC曲线分析显示，Pyk2、A-FABP、NMP22三者联合诊断肌层浸润性膀胱癌的曲线下面积(AUC)为0.914，敏感度、特异度分别为0.855、0.912，显著高于各指标单一检测，见表3及图1。

表3 Pyk2、A-FABP、NMP22单独及联合检测对肌层浸润性膀胱癌的诊断价值分析

图1 Pyk2、A-FABP、NMP22联合检测诊断肌层浸润性膀胱癌的ROC曲线

3 讨论

肌层浸润性膀胱癌属于泌尿系恶性肿瘤，及时诊断有助于采取有效措施，对患者预后具有重大意义[13-18]。临床采用腹部膀胱彩超、静脉尿路造影或膀胱镜检查等方法诊断膀胱癌[19-20]。但腹部膀胱彩超对于诊断早期膀胱癌存在一定弊端，静脉尿路造影有造影剂不良反应的担忧，膀胱镜检查有创，可能会出现二次感染的情况[21-24]。故选取更安全、诊断率更高的检测方法对诊断本病具有重要价值。

贺金标等[25]认为A-FABP、NMP22、Pyk2联合检测具有敏感度高、无创伤等优点，可作为诊断膀胱癌和术后监测的有效指标。A-FABP表达水平与膀胱癌的进展密切相关，对于远期干预和预测预后具有重要作用，其可抑制肿瘤细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡[26-28]。本研究发现，肌层浸润性膀胱癌患者癌组织A-FABP、NMP22、Pyk2表达显著高于癌旁正常组织，说明三者对膀胱癌患者的诊断具有重要意义，提示A-FABP、NMP22、Pyk2可以作为评价肌层浸润性膀胱癌患者临床效果的重要指标。

进一步分析显示，A-FABP、NMP22、Pyk2表达与肌层浸润性膀胱癌患者性别、年龄、病灶数无关，病理分期Ⅲ期、低分化患者A-FABP、NMP22、Pyk2阳性率明显升高，表明3种蛋白可能参与了本病的分化及转移过程。ROC曲线分析结果表明，A-FABP、NMP22、Pyk2单一检测诊断肌层浸润性膀胱癌有一定价值，但敏感度不高，三者联合检测诊断肌层浸润性膀胱癌AUC为0.914，敏感度为0.855，提示3项蛋白联合检测可成为临床诊断肌层浸润性膀胱癌的新指标。

综上，A-FABP、NMP22联合Pyk2检测可提高肌层浸润性膀胱癌的诊断率。