结核分枝杆菌γ 干扰素释放试验在结核分枝杆菌感染患者中的诊断效果观察

吴宝军 黄佳佳

（天水市第一人民医院检验科 甘肃天水 741000）

当前，结核病已经被全球列入常见肺部传染病范畴中，该病发病原因主要是感染结核分枝杆菌所致。根据WHO 发布的《2021 年全球结核病报告》中的相关数据显示：2020 年全年，全球新发的结核病患者总人数约990 万人，发病率高达127/10 万，其中我国估算出新发的结核病患者总人数为84.2 万人，在全球范围内30 个结核病高负担国家内我国确诊的结核病总人数位居第二位，仅次于印度[1]。结核病缺乏典型临床特征，在临床上容易被忽略，具有较高的漏诊率与误诊率，很多患者因为伴有显著临床症状时才入院就诊，但是已经错失了最佳的治疗时期，增加了结核病病原体的携带者。因此如何采取有效的手段诊断出是否感染结核分枝杆菌，是临床制定治疗方案的关键。临床上诊断结核分枝杆菌感染的方法较多，以细菌学检查手段的准确度最高，也列为结核病诊断的金标准。但是该检测手段用时长，结果的敏感性偏低，从而限制了该手段在临床中的推广。而其他常见的诊断手段有TST，该诊断方法虽然操作简单，但是应用的抗原为多种分枝杆菌共有，在检查时容易受到免疫抑制剂、结核菌素纯蛋白衍生物制剂、患者营养不良、检验水平、重叠免疫缺陷病等因素的影响，检测结果具有较高的假阳性率与假阴性率，限制了在临床的推广[2]。近年来，随着免疫诊断技术的进步与发展，诞生了新型结核分枝杆菌免疫学检测技术，其中以IGRA 检测技术为代表。本文就IGRA 在结核分枝杆菌感染诊断中的应用进行如下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年1 月至2022 年6 月在我院检查时疑似结核分枝杆菌感染的156 例病例作为研究对象。其中男性总例数为82 例，女性总例数为74 例，年龄28 岁～68 岁，平均年龄为（48.36±4.34）岁。

1.1.1 纳入标准。所有病例均伴有结核分枝杆菌感染的相关症状与体征，即患者伴有咳嗽和咳痰，痰液中可见血丝，持续低热、胸痛、胸闷气短、乏力盗汗等等；所有病例在近6 个月内未服用任何免疫抑制剂以及抗生素药物治疗；患者及其家属自愿参与到本研究中。

1.1.2 排除标准。排除心、肝、肺、肾等重要脏器功能合并损伤、合并凝血功能障碍、严重感染、研途中退出的病例。

1.2 方法

所有病例均在我院行结核菌素皮肤试验（TST）与IGRA 检测。

1.2.1 所需仪器和试剂。郑州安图Autolumo A2000 Plus 化学发光仪、安徽中科中佳科学仪器公司提供的KDC-1044 低速离心机、淮博DRP-9082电热恒温培养箱；IGRA 检测试剂盒（厂家：郑州安图生物工程股份有限公司）、结核菌素皮肤试验试剂盒（厂家：北京诺德生物科技有限公司）。

1.2.2 试验方法。

（1）TST 试验。将0.1 毫升的PPD 试剂注入于待测病例前臂掌侧下方1/3 皮肤处，注射方法应用皮肤内注射法，并且注射速度不宜过快，待皮肤可见一块直径约5 毫米～6 毫米的圆形皮丘，同时观察患者是否有不良反应。注射后在48 小时内借助游标卡尺分别测量经记录下来该硬结的横向直径和纵向直径，将二者的总和除以2 便可以获得硬结的平均直径。

（2）IGRA 检测试验。抽取所有病例空腹8h 后的静脉血3 毫升～5 毫升，将样本加入肝素锂抗凝管中，再平均地分成3 份。在生物安全柜中将阴性对照培养液（N）、阳性对照培养液（P）和测定培养液（T）按照手柄方向自左向右依次加入至细胞培养板相应的孔内，将其轻轻摇匀后，放置在温度为37℃的电热恒温培养箱内孵育16 小时～24 小时。培养结束后，吸取培养管上清液在安图A2000Plus 全自动化学发光仪进行测定，得到检测数据后依据安图控制软件自动判别结果。

1.3 观察指标

将罗氏培养结果作为金标准，比较两种TST 试验与IGRA 检测试验的结果。

阳性检出率=阳性检出例数/总例数×100%；阴性检出率=阴性检出例数/总例数×100%；特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%；灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%；阳性预测值=真阳性例数÷（真阳性例数+假阳性例数）×100%；阴性预测值=真阳性例数÷（真阳性例数+假阳性例数）×100%。

其中结核菌素皮肤试验结果的判定操作按照《全国结核病防治工作手册》相关标准，若硬结的平均直径＜5 毫米时，提示结果为阴性；相反，若硬结平均直径≥5 毫米时，或者局部伴有坏死、水疱、淋巴管炎等症状时，提示结果为阳性。IGRA 检测方法结果判定：若阴性对照斑点数＜6 毫米时，A（或B）抗原孔减去阴性对照后得到的斑点数≥6 毫米时，代表检测结果为阳性；相反，假如阴性斑点的数量≥6 毫米，如果检测孔的斑点数至少为阴性斑点数的2 倍时，提示结果为阳性[3]。

1.4 统计学方法

数据的统计分析应用SPSS21.0 数据统计软件，计数资料用n（%）表示，用X2检验，计量资料用均数（）表示，用t 检验，当P＜0.05 时，提示差异显著。

2 结果

2.1 两种方法检测结果比较

将罗氏培养法检测结果作为金标准，结果显示156 例样品中，阳性结果共140 例，阴性结果共16 例；IGRA 试验法检出阳性137 例，阳性检出率为87.82%，结核菌素皮肤试验检出阳性108 例，阳性检出率为69.23%，IGRA 试验法阳性检出率高于结核菌素皮肤试验，且组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两种检测方法阳性检出率分析[n(%)]

2.2 两种方法检测的敏度性、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较

根据结果显示：IGRA 检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于结核菌素皮肤试验，且P＜0.05。见表2。

表2 两种方法检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较[n（%）]

3 讨论

结核病作为一类常见的慢性、传染性疾病，其发病原因为感染结核分枝杆菌所致，可经飞沫传播，持续咳嗽、咳痰的时间不短于2 周是结核病的主要临床表现，部分患者还伴有痰中带血、胸痛、盗汗、低烧、疲乏、食欲下降、身体消瘦等等。并非所有的人感染结核杆菌后均可发病，这主要跟机体自身的抵抗力以及结核杆菌的毒力有关，当人体首次感染结核杆菌后，一般情况无显著症状，但是如果机体的抵抗力水平处于较低水平时，便可能发病。患者在感染结核分枝杆菌初期通常无典型的临床症状，因此采取高效、科学的手段及早诊断出结核分枝杆菌感染，并针对性治疗是控制感染的关键[4]。

在本文中，对比了分别应用TST 试验与IGRA试验检测结核分枝杆菌。结果显示：的阳性检出率87.82%明显高于结核菌素皮肤试验阳性检出率69.23%，IGRA 检测的敏感度96.43%、特异度87.50%、阳性预测值98.54%、阴性预测值73.68%均高于结核菌素皮肤试验73.57%、68.75%、95.37%、22.92%，且P＜0.05，证实与结核菌素皮肤试验相比，IGRA 检测的参考价值更高。IGRA 检测的基本原理为：干扰素γ 作为机体中具有巨噬细胞，其能够分泌强效的激活因子。GRA 检测技术便根据当机体感染结核分枝杆菌后，机体中的特异度T 细胞便会跟结合杆菌发生特异度结合，生成特异度抗原CFP-10 与ESAT-6 反应生成γ 干扰素，从而表现出患者外周血液中的干扰素γ 水平升高。临床研究发现，γ 干扰素跟淋巴细胞与巨噬细胞二者通过相互作用，提示结核分枝杆菌感染的过程中，机体遭受感染后，此时巨噬细胞发挥机体中的第一道防御作用，便会大量吞噬结核分枝杆菌，同时在巨噬细胞中将其消化为大小不同的片段[5]。因此，当体内的干扰素—γ 释放水平呈现出连续升高时，便提升结核杆菌感染或者结核杆菌致敏。

综上所述，IGRA 在检测结核分枝杆菌感染中具有较高的特异度和敏感性，可以将其作为诊断结核病的一类新手段。但是需要注意的是，IGRA 检测依然存在一些不足。常见的如：该检测手段需要采集患者静脉血，因此对患者的依从性较高；当采集患者静脉血时，如果样本放置时间过长，也会影响检测结果，要求样本采集后在2 小时内完成实验。如果时间过长，容易增加样本被污染的风险，从而导致检测结果的准确性下降。除此之外，该检测手段要求操作人员技术水平高，实验室设备性能佳，因此需要投入更高的成本，不利于在基层医院推广。因此建议基层医院可先进行结核菌素皮肤试验，针对结果存在疑问的再进行IGRA 检测，从而实现优势互补，提高检测结果准确性。