清湿热通络方对高尿酸血症小鼠血清炎症因子表达的影响*

周 颖 文笑游 柳 磊 陈茜芸 曾慧莲 董维维

象山县中医医院医疗健康集团 浙江 象山 315700

高尿酸血症作为常见的慢性疾病，可诱发痛风性关节炎、心血管疾病、慢性肾脏病、代谢综合征与高血压等疾病[1]。研究显示，高尿酸血症患者体内尿酸钠（MSU）晶体能通过刺激T细胞、血小板、滑膜细胞、单核细胞和巨噬细胞等相关细胞释放炎症介质，使体内白细胞计数和白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症因子水平增高，参与高尿酸血症的发生及发展过程[2，3]。因此，临床认为开展抗炎治疗，通过控制高尿酸血症患者体内炎症因子水平，能有效缓解症状，减缓病情进展[4]。基于此，本研究采用清湿热通络方治疗高尿酸血症，分析清湿热通络方对高尿酸血症小鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达的影响，以期为临床治疗提供参考。报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与药物：准备40只SPF级的雄性昆明种小鼠开展实验，体质量28～36g，平均体质量为（32.39±4.28）g，由杭州子源实验动物科技有限公司提供，许可证号SCXK（浙）2019-0004；屏障环境内相对温度为20～25℃，相对湿度为40%～70%；本研究严格依据动物伦理原则开展。清湿热通络方药物组成：柴胡、黄芩、白芍、桃仁、红花、忍冬藤、牛膝各10g，薏苡仁、土茯苓各30g，苍术15g，黄柏6g。加水煎煮2遍后混匀，旋蒸浓缩、干燥、粉碎后制成干粉。立加利仙（生产企业：昆山龙灯瑞迪制药有限公司，国药准字H20010790）。炎症因子试剂盒（生产批号：20210814）购自中国深圳华大基因股份有限公司。

1.2 造模及分组给药方法：将40只SPF级的雄性昆明种小鼠进行3d适应性饲养后，根据随机数字表法分成空白组、对照组、苯溴马隆组、中药组4组，每组10只。对照组和苯溴马隆组、中药组小鼠均腹腔注射氧嗪酸钾混悬液300mg/（kg·d），并于1h后给予酵母膏灌胃，酵母膏用量为30000mg/（kg·d），均为每日1次，持续14d，以完成高尿酸血症造模。完成造模后隔天，给予空白组与对照组小鼠0.9%NaCl 10mL/(kg·d)灌胃处理，苯溴马隆组小鼠用苯溴马隆溶液20mg/（kg·d）灌胃，而中药组小鼠用清湿热通络方10mg/（kg·d）灌胃，均为1次/d，持续14d。试验期间对各组小鼠的饮食、活动状态、尿液和毛发等情况进行观察。在第28d灌胃给药1h后，取各组小鼠的眼球血，放入4℃冰箱内保存，待测。同时，完成采血后将各组小鼠脱颈处死，并对腹部进行消毒备皮，将腹壁剖开，使腹腔内脏器暴露，找到肾脏，对肾周筋膜组织、脂肪组织实施游离处理，将双侧肾脏快速取下，并将血迹洗去，再将肾脏切开，取肾组织2块，用4%多聚甲醛实施固定，后开展组织修剪及脱水处理、透明处理、包埋处理，将肾脏组织切成4mm厚的切片，并将切片烘干，实施脱蜡和梯度酒精水化、HE染色处理，用盐酸乙醇实施分化处理，经蒸馏水洗涤，返蓝10min，再开展伊红复染及封片、镜检处理，观察各组小鼠的肾脏组织形态表现。

1.3 血清学指标：观察并对比4组小鼠的血清尿酸、肌酐、炎症因子（IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α）表达水平。从冰箱取出各组小鼠的血液标本，静置2h，开展4000r/min低温离心处理10min，留取血清。通过全自动生化分析仪对各组小鼠的血清尿酸、肌酐水平进行检测，并经酶联免疫吸附试验对各组小鼠的血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平实施检测，严格按试剂盒说明书执行。

1.4 统计学分析：选择SPSS 24.0软件工具包校对数据，计量资料采用均数±标准差（±s）描述，采用t检验；计数数据采用n（%）描述，采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组小鼠的血清尿酸和肌酐水平比较：对照组、苯溴马隆组、中药组小鼠的血清尿酸、肌酐水平均高于空白组（P＜0.05）；苯溴马隆组、中药组小鼠的尿酸、肌酐水平均低于对照组，且中药组低于苯溴马隆组（P＜0.05）。见表1。

表1 4组小鼠血清尿酸、肌酐水平比较（±s，μmol/L）

表1 4组小鼠血清尿酸、肌酐水平比较（±s，μmol/L）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与对照组比较，#P＜0.05；与苯溴马隆组比较，△P＜0.05。

肌酐43.16±10.47 72.36±13.18*64.82±10.23*#54.79±11.58*#△组别空白组对照组苯溴马隆组中药组例数10 10 10 10尿酸245.73±38.65 598.94±53.89*432.58±43.17*#315.91±41.52*#△

2.2 4组小鼠的血清炎症因子水平比较：对照组、苯溴马隆组、中药组小鼠的血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均高于空白组（P＜0.05）；苯溴马隆组、中药组小鼠的IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均低于对照组，且中药组低于苯溴马隆组（P＜0.05）。见表2。

表2 4组小鼠血清炎症因子水平比较（±s，n=10）

表2 4组小鼠血清炎症因子水平比较（±s，n=10）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与对照组比较，#P＜0.05；与苯溴马隆组比较，△P＜0.05。

TNF-α（ng/mL）152.86±10.43 270.91±14.52*229.73±13.82*#180.58±12.24*#△组别空白组对照组苯溴马隆组中药组IL-1β（mg/L）15.70±3.04 42.26±2.85*33.67±2.43*#22.39±3.12*#△IL-6（ng/L）78.58±6.45 151.37±7.94*122.69±7.32*#93.94±6.81*#△IL-18（mg/L）17.48±2.93 51.57±3.08*36.29±3.11*#24.69±3.25*#△

2.3 4组小鼠的肾脏组织形态表现：空白组小鼠的肾脏组织细胞间呈整齐排列，肾小管和肾小球的结构饱满且清晰，小管上皮细胞形态正常且着色均匀；对照组小鼠的肾脏组织内能发现肾小球略萎缩，肾小管呈大量空泡样改变，并可见小管上皮细胞核分裂，间质炎细胞浸润；苯溴马隆组小鼠的肾脏病变仍明显，肾小管空泡变性，间质可见炎细胞浸润；中药组小鼠的肾脏病变明显好转，能见少数肾小管空泡变性，其他功能显著改善。见图1。

图1 清湿热通络方对高尿酸血症小鼠肾脏组织形态的影响（×400）

3 讨论

现代医学研究发现，高尿酸血症能引起脂肪代谢紊乱、糖代谢紊乱和氨基酸代谢紊乱，破坏血管内皮细胞功能，加快动脉平滑肌细胞增殖与迁移，损害血管功能，进而诱发心血管疾病[5，6]。进一步研究数据显示，高尿酸血症患者的血尿酸水平上调时，尿酸盐结晶大量析出，并沉积于血管壁，破坏血管内膜，导致血管内膜出现慢性炎症损伤[7-9]；与此同时，血尿酸水平增高能将单核细胞核因子（NF）-kB激活，大量释放IL-6、TNF-α等炎症因子，使血清内炎症因子表达水平增高，产生炎症反应，破坏血管功能，增加血管内膜厚度，诱发痛风、冠心病等疾病。因此，对高尿酸血症介导的炎症反应进行有效抑制，对临床防治冠心病等疾病存在重要意义[10，11]。

清湿热通络方主要由柴胡、黄芩、白芍、桃仁、红花、忍冬藤、薏苡仁、苍术、黄柏、牛膝、土茯苓组成[12]。方中柴胡能和解表里、疏肝解郁、升阳，黄芩、忍冬藤、薏苡仁、黄柏具有清热解毒、通络除湿等功效，白芍能柔肝止痛、养血调经、平抑肝阳、敛阴止汗，桃仁、红花、牛膝具有活血祛瘀、止痛等作用，苍术能祛风散寒、燥湿健脾，土茯苓能清热利湿，搜剔湿热之蕴毒[13]。综观清湿热通络方，全方能够有效发挥清热解毒、除湿和通经活络等作用，在高尿酸血症对证治疗中具有良好的疗效。本研究通过分析清湿热通络方对高尿酸血症小鼠血清尿酸、肌酐、炎症因子表达的影响发现，对照组、苯溴马隆组、中药组小鼠的血清尿酸、肌酐、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均高于空白组，但苯溴马隆组、中药组小鼠的尿酸、肌酐、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均低于对照组，且中药组低于苯溴马隆组；提示清湿热通络方能有效降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸、肌酐和炎症因子水平，控制病情进展。分析原因主要是由于方中柴胡、黄芩、红花、忍冬藤、土茯苓等中药存在显著的抗炎、清热作用，能改善微循环，抗血小板聚集和扩张血管，降低心脑血管疾病发生风险[14，15]。肾脏病理分析结果显示，对照组小鼠的肾脏组织内能发现肾小球发生萎缩，且肾小管出现扩张，呈大量空泡样改变，说明肾脏出现病变；而中药组小鼠的肾脏病变明显好转，能见灶性肾小管空泡变性，其他功能显著改善；提示清湿热通络方对肾损伤存在显著的保护作用。

综上所述，清湿热通络方能减少高尿酸血症患者血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达，降低血清尿酸、肌酐水平，进而有效改善肾脏组织形态，保护患者肾脏，可为临床防治和研究分子机制提供参考。