麝香保心丸联合阿托伐他汀对老年冠心病患者心功能、氧化应激及miR-133、miR-499表达的影响

吴立华，吴钟江

(海口市第三人民医院，1.心内科；2.神经内科，海南 海口 571100)

冠心病(coronary heart disease，CHD)是因冠状动脉壁被胆固醇及其他物质沉积形成的斑块导致管腔变窄，部分或完全阻断血流而引起的缺血性心脏病，严重时可诱发急性心肌梗死或猝死，威胁患者生命安全[1]。CHD不可治愈，易反复发作，进行性加重病情，但可通过改变生活方式、药物、手术等干预阻止或延缓病情进展[2]。高血脂是引起CHD的独立危险因素，临床常使用阿托伐他汀等血脂调节药物防治CHD[3]，但因西药作用机制单一，疗效受限。中医药的多靶点效应则在CHD治疗中独具优势[4]。麝香保心丸是由舌象、人参、牛黄等7余味中药精制而成的中成药，主治芳香温通、益气强心，研究[5]证实，可有效改善CHD患者的血脂、炎症和血管内皮功能。近年来，研究[6-7]发现，氧化应激在CHD的发生发展中作用重要；而微小RNA(miRNA)也被发现与CHD病变关系密切。本研究旨在探究麝香保心丸联合阿托伐他汀对老年CDH患者心功能、氧化应激及miR-133、miR-499表达的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年3月至2021年3月海口市第三人民医院收治的90例CHD老年患者为研究对象，根据治疗方法不同分为对照组和观察组，每组各45例。本研究经院伦理委员会审核批准，患者及家属知情同意。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。纳入标准：(1)确诊为冠心病；(2)高血脂；(3)年龄60～85岁；(4)生命体征平稳；(5)配合度高。排除标准：(1)合并心肌梗死、心力衰竭者；(2)合并严重脑、肺、肾、肝功能障碍者；(3)合并免疫系统疾病、血液系统疾病、精神疾病、恶性肿瘤者；(4)过敏体质者。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 对照组予以阿托伐他汀钙片(辉瑞制药)治疗，20 mg/次，1次/晚；观察组在对照组基础上增加麝香保心丸(22.5 mg，上海和黄药业有限公司)治疗，50 mg/次，3次/d，疗程均为12周。

1.2.2 观察指标 (1)临床疗效：参考《临床冠心病诊断与治疗指南》[8]进行3级评价。显效：临床症状完全或显著改善，3个月内未发生心绞痛或心绞痛发作次数降低>90%；有效：临床症状明显改善，3个月内心绞痛发作次数降低50%～90%；无效：未达到以上标准。总有效率=(显效+有效)例数/总例数×100%。(2)心功能指标：治疗前后采用心脏彩色多普勒超声诊断仪(iE33型，PHILIPS)检测患者左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩期末内径(LVESD)、左心室舒张期末内径(LVEDD)。(3)氧化应激指标：治疗前后采集采集患者空腹外周静脉血，离心分离出血清于-20 ℃下保存，采用黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)水平；硫代巴托酸显色法检测丙二醛(MDA)水平；比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。(4)血浆miR-133、miR-499表达水平：治疗前后取分离血浆150 μL，加TRIzol试剂300 μL、氯仿60 μL，室温静置，离心15 min(12 000×g，4 ℃)，留取分层水相，加异丙醇150 μL均匀混合，再次离心10 min(12 000×g，4 ℃)，沉淀RNA，弃上清液，加乙醇(750 mL/L)300 μL洗涤，振荡均匀，离心5 min(7 500×g，4 ℃)，弃上清液，干燥RNA后用DEPC 20 μL溶解，使用紫外分光光度计检测总RNA吸光度，使用RT-qPCR，以两步法检测miR-133、miR-499表达水平，按逆转录试剂盒说明进行反转录反应。反应总体积25 μL；反应条件：95 ℃ 15 min预变性，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，总共35个循环。以2-ΔCt表示miR-133、miR-499的相对表达量。ΔCt=CtmiRNA-(Ctcel-miR-133+ Ctcel-miR-499)/2。(5)不良反应发生情况：包括胃肠道不适、皮疹、味觉障碍、头晕、头痛等。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较

观察组患者总有效率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者临床疗效比较[n(%)]

2.2 两组患者心功能指标比较

治疗前，两组患者心功能指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组患者LVEF均提高(P<0.05)，且观察组高于对照组(P<0.05)；LVESD、LVEDD均降低(P<0.05)，且观察组低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者心功能指标比较

2.3 两组患者氧化应激指标比较

治疗前，两组患者氧化应激指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组患者血清MDA均降低(P<0.05)，且观察组低于对照组(P<0.05)；SOD、GSH-Px水平均提高(P<0.05)，且观察组高于对照组(P<0.05)。见表4。

表4 两组患者氧化应激指标比较

2.4 两组患者miR-133、miR-499表达水平比较

治疗前，两组患者miR-133、miR-499表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组患者miR-133、miR-499水平均降低(P<0.05)；且观察组低于对照组(P<0.05)。见表5。

表5 两组患者miR-133、miR-499表达水平比较

2.5 两组患者不良反应发生情况比较

治疗期间，两组患者均未发生严重不良反应导致患者退出研究。观察组患者发生胃肠道不适1例，皮疹1例，味觉障碍2例，不良反应总发生率为8.89%(4/45)；对照组发生胃肠道不适1例，头晕头痛1例，味觉障碍1例，不良反应总发生率为6.67%(3/45)。两组患者不良反应总发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

CHD是临床常见心血管疾病，阿托伐他汀钙片是其治疗常用药物，可通过阻断羟甲戊酸转化过程从而减少包括胆固醇在内的固醇前体合成，降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量而发挥降脂作用，降低CHD患者发生心肌梗死、心力衰竭、心绞痛等风险[9]。考虑到阿托伐他汀作用机制单一，中西医联合治疗CHD在近年逐渐受到重视且被证实具较好的临床疗效和安全性[10]。

中医认为，CHD属“心痛”“胸痹”等范畴，以气虚、血瘀等最为常见，为本虚标实之症[11]。麝香保心丸是以宋代名方苏合香丸为基础，以麝香、苏合香、人参、肉桂、蟾酥、牛黄、冰片7味中药用现代技术精制而成，具温阳逐寒、化浊开窍、益气强心之效。现代药理学研究[12-14]显示，麝香保心丸具有强心、调脂、改善心肌氧耗、抑制血管炎性反应、增加冠脉血流、修复血管内皮损伤等作用，有益于CHD患者。本研究结果显示，相比对照组，观察组总有效率提高(P<0.05)，且治疗后LVEF、LVESD、LVEDD更优(P<0.05)，与既往报道类似[15]，表明在阿托伐他汀基础上，应用麝香保心丸可提高疗效，改善心功能。氧化应激与CHD的发生发展关系密切。氧化应激反应产生的活性氧(ROS)将刺激血管平滑肌细胞、内皮细胞产生一系列细胞因子诱发平滑肌细胞迁移、内皮细胞凋亡等，导致冠脉粥样斑块的形成、破裂，并进一步加重心肌损伤[16]。本研究发现，与对照组相比，观察组患者治疗后血清MDA更低(P<0.05)；SOD、GSH-Px水平更高(P<0.05)，表明增加麝香保心丸治疗CHD可有效减轻氧化应激反应，可能与麝香保心丸的多成分、多靶点作用有关：(1)麝香可通过改善细胞内相关抗氧化酶如SOD、GSH-Px等的活性来抵抗氧化应激损伤[17]；(2)苏合香挥发油则可通过抑制TLR9的过表达来提高SOD活性，减轻氧化应激[18]；(3)人参皂苷可通过参与NF-κB、Wnt/β-Catenin、PI3K/AKT、Keap1-Nrf2-ARE等多个信号通路来调节机体的氧化与抗氧化系统的平衡[19]；(4)肉桂总黄酮也被证实有抑制氧化应激反应的作用[20]。

miRNA是一种单链、非编码RNA，近年来被证实在CHD、心律失常、心力衰竭等进展中具有重要作用，将其作为心血管疾病潜在标志物的研究越来越多。miR-133和miR-499均具有心肌特异性，二者在心肌发生急性损伤后进入外周血液循环[21]。miR-133的相对表达量与冠状动脉病变的狭窄程度呈正相关[22]，miR-499也被证实与CHD伴慢性心衰患者的心功能、心室重构程度呈负相关[23]。因此，检测miR-133和miR-499的相对表达量也有助于评估CHD患者病情。本研究显示，观察组患者治疗后miR-133、miR-499表达水平均低于对照组(P<0.05)，表明麝香保心丸联合阿托伐他汀可降低CHD患者miR-133、miR-499的相对表达量，但其作用机制尚不明晰。另外，本研究还发现，两组患者不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)，表明二者联用安全性好。

综上，在使用阿托伐他汀的基础上，对老年CHD患者增加麝香保心丸治疗，可提高疗效，且具良好的安全性，减轻氧化应激反应、减少miR-133和miR-499的相对表达量可能是其发挥疗效的作用机制。