子宫内膜癌组织中miR-143 的表达及与预后的相关性分析

罗婵娟

（宜宾市第二人民医院/四川大学华西医院宜宾医院病理科，四川 宜宾 644000）

子宫内膜癌（endometrial cancer）是发生于女性子宫内膜的一种上皮恶性肿瘤，多发于围绝经期，临床表现为不规则阴道出血、阴道排液、腹部包块等症状，其死亡率位居妇科恶性肿瘤前列，严重威胁女性生命安全[1，2]。目前临床多采用手术治疗，但子宫内膜癌确诊时多数为中晚期，其治疗效果不甚理想，术后远处转移率较高，患者3 年生存率较低，故明确影响预后的因素对子宫内膜癌的临床诊治具有积极意义[3，4]。近年来研究发现[5，6]，微小RNA（microRNA，miRNA）可调节基因表达，在多种真核生物的病理进程中发挥重要作用，其中位于人染色体5q32 的miR-143 被证实与多种肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及转移息息相关，参与肝癌、胰腺癌、宫颈癌等肿瘤的发生及进展。但miR-143 在子宫内膜癌中的研究较少，基于此，本研究以子宫内膜癌患者为例，探讨子宫内膜癌组织中miR-143 的表达及与预后的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年1 月-2018 年7 月宜宾市第二人民医院/四川大学华西医院宜宾医院收治的82 例子宫内膜癌患者为研究组，年龄47～61 岁，平均年龄（54.21±5.20）岁；病理类型：子宫内膜样腺癌75 例，其他7 例；根据随访3 年存活情况分为死亡组32 例，存活组50 例。另选取同时期住院的50例子宫肌瘤患者为对照组，年龄45～65 岁，平均年龄（55.01±5.18）岁。两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审查批准，患者或家属知情同意，并签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①研究组符合《子宫内膜癌诊断与治疗指南（第四版）》[7]中相关诊断标准并经临床宫腔镜检查确诊为子宫内膜癌；②子宫肌瘤患者均为子宫切除的良性患者；③意识清晰，无沟通障碍者；④依从性较好，可配合完成后续治疗及随访者。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②合并心、脑、肾等功能性器官存有器质性病变者；③合并精神类疾病及既往病史者；④失访或中途主动退出研究者。

1.3 方法 采用实时荧光定量多聚酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测对照组及研究组癌组织、癌旁组织miR-143 表达水平。①样本提取：手术时获取患者子宫内膜组织、癌组织、癌旁组织，洗净后分别置于液氮速冻5 min 并于-80 ℃冰箱中保存备用；②总RNA 提取：将子宫内膜组织、癌组织、癌旁组织分别进行研磨，加入细胞裂解液处理后按照TRIzol 总RNA 试剂盒（美国Invitrogen 公司）说明书进行提取总RNA，采用N6000 彩屏紫外可见分光光度仪（青岛瑞明仪器设备有限公司）定量，miRNA 试剂盒购于上海酶联生物科技有限公司；③PCR 检测：采用上海生工生物公司设计合成的引物：miR-143 上游引物序列为5’-GCTAGCAGGTTAATTGAAATA-3’，下游引物序列为5’-GTGGACCTTGCTGGAATATCG-3’；对照内参（U）上游引物序列为5’-GTAATACTACCTGCTGACTCG-3’，下游引物序列为5’-AAATTAATGGAATTGACGAAT-3’；PCR 总反应体系为20 μl，上游及下游引物各1 μl，DNA 模板2 μl，灭菌蒸馏水6 μl，反应条件：95 ℃15 min，94 ℃60 s，55 ℃30 s，72 ℃延伸1 min，36 个循环；每个样本均设有3 个复孔，留取Ct 平均值，分别计算引物及内参的ΔCt 值，ΔCt=Ct（miR-143）-Ct（U6），以2ΔΔCt得出组织miR-143的相对表达量。

1.4 观察指标 比较对照组、研究组及研究组不同预后者miR-143 表达水平，并绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲线判断研究组患者发生死亡时组织miR-143 水平最佳截断值，分析不同miR-143 表达与临床病理特征的关系及与预后的关系。

1.5 统计学方法 采用SPSS 24.0 统计学软件进行数据分析。计量资料以（）表示，采用t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组miR-143 表达水平比较 研究组miR-143表达水平低于对照组（P＜0.05），且研究组中死亡组癌组织及癌旁组织miR-143 表达水平低于存活组（P＜0.05），见表1、表2。

表1 对照组与研究组miR-143 表达水平比较（）

表1 对照组与研究组miR-143 表达水平比较（）

表2 研究组不同预后患者miR-143 表达水平比较（）

表2 研究组不同预后患者miR-143 表达水平比较（）

2.2 研究组患者发生死亡时组织miR-143 水平最佳截断值分析 ROC 曲线分析显示，子宫内膜癌患者癌组织最佳截断值为0.510，曲线下面积为0.749，灵敏度为62.71%，特异度为80.21%，95%CI为（1.320～3.440），见图1。

图1 癌组织miR-143 对子宫内膜癌患者预后价值评估的ROC 曲线图

2.3 研究组中不同临床病理特征患者癌组织miR-143 表达比较 研究组中miR-143 高表达患者52例，低表达患者30 例。不同病理分期、淋巴结转移、分化程度间miR-143 表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；而不同年龄、绝经状态、肿瘤直径、肌层浸润状态间miR-143 表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 研究组中不同临床病理特征患者癌组织miR-143 表达比较[n（%）]

2.4 研究组患者癌组织miR-143 表达与预后的关系随访3 年，研究组患者癌组织miR-143 高表达生存率为60.00%，高于miR-143 低表达生存率的38.46%，差异有统计学意义（P＜0.05），见图2。

图2 研究组患者癌组织miR-143 表达与预后的关系

3 讨论

子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，近年来发病率有所增加且日趋年轻化，生育年龄女性亦可发生，其发病机制尚未完全明确[8]。研究表明[9，10]，雌激素对子宫内膜的长期持续刺激、子宫内膜增生过长、不育、家族史等均可能诱发子宫内膜癌。目前子宫内膜癌的最佳治疗方式为以手术切除为主的综合治疗，临床手段有限，患者生存率较低，故明确影响预后的因素，对避免癌转移、提高患者生存率有着重要意义。随着基因工程、蛋白组学在癌症领域的不断发展。有研究发现[11，12]，CA199、甲胎蛋白等许多与子宫内膜癌相关的生物标志物对子宫内膜癌疾病的诊断及预后具有重要作用，但其存在假阳性、特异性较差等现象，故寻求更加合理的生物标志物对子宫内膜癌进行早期诊断及预后评估尤为关键。

miRNA 由高等真核生物基因组编码，是一种类似于siRNA 的小分子，其通过和靶向基因mRNA 碱基配对，诱导沉默复合体降解，阻碍mRNA 翻译，在许多癌症病理中占据重要位置[13，14]。研究表明[15]，miRNA 既可作为抑癌基因下调原癌基因活性，也可转变为癌基因下调抑制体内原有基因活性，故多数研究对肿瘤的研究越来越集中在miRNA 分子上。研究显示[16，17]，miRNA 参与乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌等多种癌症疾病发生及发展，如miR-199 在乳腺癌组织中表达下调与不良预后有关，而在胃癌组织中表达上调可促进患者不良预后；miR-206 可抑制前列腺细胞增殖、迁移进程，有利于疾病早期诊断及预后评估。而miR-143 作为miRNA 家族的重要成员，可靶向调节细胞增殖相关信号通路或生物学反应，进而干扰相应生物学效应过程，其已被证实在胰腺癌、肝癌等恶性肿瘤中发挥抑癌基因作用[18]，但在子宫内膜癌疾病中表达情况鲜有报道。本研究应用PCR 检测子宫内膜癌患者组织miR-143 表达水平，结果显示研究组miR-143 表达水平低于对照组（P＜0.05），且研究组中死亡组癌组织及癌旁组织miR-143 表达水平低于存活组（P＜0.05），提示临床可将miR-143 作为子宫内膜癌的生物标志物。同时，本研究分析子宫内膜癌临床病理特征与miR-143 表达水平的相关性发现，miR-143 与病理分期、淋巴结转移、分化程度相关，与Christensen ST 等[19]研究结果具有同质性，提示miR-143 表达水平越低，病理分期级别越高、淋巴结转移风险越大，分化程度越低，可为子宫内膜癌的早期诊断提供参考依据。Farooqi AA 等[20]研究表明，miR-143 在子宫内膜病变组织中的表达水平与患者生存率有关。本研究结果也发现，随访3 年，EC 患者组织miR-143 高表达组生存率高于miR-143 低表达组，提示miR-143 表达水平影响子宫内膜癌患者预后，可为患者生存预测提供理论支持。

综上所述，子宫内膜癌患者组织miR-143 表达下调，对患者预后有明显影响，临床可将其作为子宫内膜癌预后的评估指标。但因本研究选取样本量及研究时间有限，相关结论仍需多中心大样本临床试验进一步佐证。