2018年-2020年我国部分城市宠物犬布鲁氏菌病血清学调查

吴洪超，丁航天，卢 旭，王 洁，廖均乐，霍宁宁，范 伟，张渊魁，习向锋，刘玉秀*，田克恭,*

(1.国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471003；2.河南农业大学动物医学院，河南郑州 450002；3.洛阳惠中生物技术有限公司，河南洛阳 471003；4.郑州宠康伴侣动物医院，河南郑州 450002；5.兆丰华生物科技(南京)有限公司，江苏南京 211102)

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的在全球广泛分布的一种动物源性人畜共患传染病[1]，严重危害畜牧业发展和人类健康。全世界有170多个国家和地区报告了人和动物的布鲁氏菌病[2]，并且每年都有新发地区和复发地区的病例报道，每年新发病例约50万人[3-4]，受到世界动物卫生组织(WOAH)和世界粮农组织(FAO)的高度关注[5]。WOAH将布鲁氏菌病列为法定报告的动物疫病，我国将该病列为二类动物疫病。

布鲁氏菌是一种细胞内寄生的小球杆状、革兰氏阴性菌，具有很强的传染性，传播途径也较多，可通过消化道、呼吸道黏膜、皮肤黏膜、生殖道感染，给防疫带来了很大的困难。WOAH根据布鲁氏菌的抗原性差异和宿主的偏好性，将其分为9个种、21个生物型：羊种布鲁氏菌(3个生物型：1、2、3)、牛种布鲁氏菌(7个生物型：1、2、3、4、5、6、9)、猪种布鲁氏菌(5个生物型：1、2、3、4、5)、绵羊附睾布鲁氏菌、犬布鲁氏菌、沙林鼠布鲁氏菌、鲸布鲁氏菌、鳍布鲁氏菌和田鼠布鲁氏菌[4-6]。我国主要流行羊种、牛种和猪种布鲁氏菌[7]。牛种、羊种和猪种布鲁氏菌为光滑型布鲁氏菌，毒力强，除感染最适宿主外，还可以感染人、犬[3]和其他多种动物[8]。犬种布鲁氏菌为粗糙型布鲁氏菌，毒力较弱，主要引起犬科动物发病，也有感染人的报道。人主要通过与宠物犬亲密接触[3]或实验室接触活菌而感染，1986年对广西省家养犬进行犬种布鲁氏菌感染调查，在人群中发现了犬种布鲁氏菌[5]。有研究不仅分离到羊种布鲁氏菌，同时也分离到犬种布鲁氏菌[9]。随着我国社会经济快速发展和人民生活水平的提高，养犬的家庭越来越多，犬与人的关系也更加密切，犬的布鲁氏菌病成为危害人类健康和公共卫生安全的重要隐患，影响畜牧业、旅游业、国际贸易和社会经济的发展，因此，急需加强犬布鲁氏菌病的流行病学调查。本研究从我国16个城市的宠物医院、犬场和农户收集1368份宠物犬血清样品，进行犬的布鲁氏菌血清学调查，为犬布鲁氏菌病的监测和防控提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 待检样品 2018年-2020年，从我国16个城市的宠物医院、农户、犬场共收集犬血1368份。

1.1.2 主要试剂 布鲁氏菌病光滑型和粗糙型虎红平板凝集试验抗原、布鲁氏菌病阴阳性血清，均购自青岛中创汇科生物科技有限公司。

1.1.3 主要仪器 离心机，Eppendorf公司产品；水浴锅(DK-8D)，上海一恒科学仪器有限公司产品；冰柜(BCD-203-H)，澳柯玛公司产品；洁净工作台(SW-CJ-2FD)，苏州安泰空气技术有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 血清样品制备 采集宠物犬的外周静脉血0.5 mL～1.0 mL，2℃～8℃静置析出血清，5 000 r/min离心5 min，取上清，56℃水浴30 min，置-20℃保存备用。

1.2.2 虎红平板凝集试验(RBT) 参考《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T18646-2018)方法进行,取干净的培养皿画好方格，标记待检样品编号，涡旋混匀待检血清和抗原，取待检血清和抗原各25 μL，加于培养皿方格内，用灭菌的吸头涂成2 cm直径的圆形，混匀后4 min内观察结果，同时设置阴阳性血清作为对照。

1.2.3 结果判定 在阴阳性血清对照成立的条件下，对待检血清进行判定。待检血清出现肉眼可见凝集现象时判为阳性，无凝集现象且反应混合液呈均匀粉红色时判为阴性。

2 结果

2.1 宠物犬布鲁氏菌抗体检测结果

用虎红平板凝集试验对1368份宠物犬血清进行布鲁氏菌抗体检测，结果显示，共14份血清RBT检测为阳性，总阳性率为1.02%，其中粗糙型和光滑型阳性血清样品数分别为5份和9份，阳性率分别为0.36%和0.66%。

2.2 不同城市宠物犬布鲁氏菌抗体阳性率

对来自16个城市的宠物犬血清进行布鲁氏菌抗体检测，其中来自北京市、洛阳市、常州市、成都市、重庆市和昆明市共6个城市的宠物犬血清检测到布鲁氏菌抗体，阳性率分别为0.79%、1.10%、2.56%、3.96%、3.57%和6.90%，而其余10个城市均未检测到犬布鲁氏菌抗体(表1)。

表1 不同城市犬布鲁氏菌抗体检测结果

2.3 不同月份宠物犬布鲁氏菌抗体阳性率

根据2018年-2020年宠物犬血清的虎红平板凝集试验检测结果，分析了不同月份光滑型和粗糙型布鲁氏菌抗体阳性样品数，结果发现，3月份和5月份的布鲁氏菌抗体阳性样品数量最多，分别检测到8份和3份阳性血样样品，其次为8月～10月份，分别检测到1份阳性血清样品，其余月份均未检测到布鲁氏菌抗体阳性的样品(图1和表2)。

表2 2018-2020年不同月份收集宠物犬血清样品数量(份)

图1 不同月份犬布鲁氏菌抗体阳性的样品数量

2.4 饲养条件对宠物犬布鲁氏菌感染率的影响

宠物犬血清样品主要来自于宠物医院、犬场和农户，饲养条件不同，布鲁氏菌抗体检测结果显示，10份来自宠物医院的宠物犬血清检测到布鲁氏菌抗体阳性，光滑型和粗糙型布鲁氏菌抗体阳性率均为0.54%；1份来自犬场的血清RBT检测为光滑型抗体阳性，阳性率为0.36%；3份来自农户的血清RBT检测为光滑型抗体阳性，阳性率为1.82%(表3)。

表3 不同饲养条件的宠物犬布鲁氏菌抗体阳性率

2.5 性别对宠物犬布鲁氏菌感染率的影响

对已知性别的宠物犬血清进行分类，RBT检测结果显示，112只母犬的血清中，仅1份血清样品检测到粗糙型布鲁氏菌抗体，阳性率为0.89%，而20只公犬的血清中均未检测到布鲁氏菌抗体(表4)。

表4 不同性别宠物犬的布鲁氏菌抗体检测结果

3 讨论

对人类有致病力的布鲁氏菌主要有牛种、羊种、猪种和犬种[10-11]。近年来，我国对布鲁氏菌病进行的监测，发现羊、牛布鲁氏菌病感染率上升较快，是法定报告传染病中感染数上升最快的疾病之一，动物布鲁氏菌病疫情形势较为严峻[12]，已引起国家卫生部门和公众的高度重视。国内外学者重点关注了经济动物牛、羊、猪的布鲁氏菌病，而忽视了伴侣动物宠物犬的布鲁氏菌病对人类健康的潜在威胁。随着宠物犬与人类生活的密切，通过排泄物、分泌物或亲密接触等多种途径传染给人类[13]。因此，宠物犬的布鲁氏菌病的预防与控制也应得到更加密切的关注。

本次调查显示，来自全国16个城市的1 368份宠物犬血清中，仅5例光滑型虎红平板凝集检测呈阳性和9例粗糙型虎红平板凝集检测呈阳性，阳性率分别为0.36%和0.66%，与文献[4,14,15]的调查结果接近。全国宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率为4%～20%[16]，内蒙古、四川、湖北、贵州、广西等省犬布鲁氏菌抗体阳性率约为8.16%[17]，均高于本次调查的结果，可能是由于近年来我国经济水平、宠物主防护意识、卫生条件等较20世纪有明显提高，使宠物犬感染布鲁氏菌的几率降低。

本次调查中，宠物犬布鲁氏菌抗体阳性血清来自北京市、洛阳市、常州市、成都市、重庆市和昆明市。我国大多数省(区、市)都存在不同程度的犬感染犬布鲁氏菌(0.3%～ 42.7%)[4]，从北京市宠物犬体内分离到犬种布鲁氏菌，从宠物犬血清中检测到粗糙型布鲁氏菌抗体[18]，并且北京地区报道过犬病的疫情[19]。本研究首次从常州市宠物犬中检测到光滑型布鲁氏菌抗体，为常州市布鲁氏菌病的流行情况提供了参考。成都市、重庆市和昆明市宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率较高，分别为3.96%、3.57%和6.90%，高于云贵川三省的调查结果[15]，可能是由于警犬作为工作犬，与外部病犬或病犬排泄物接触的风险较小。成都市、重庆市和昆明市宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率高于其他城市，可能是由于该3个城市距离牧区较近，宠物犬可能与病犬或病犬的流产物、排泄物等污染物有过接触，也可能与该地区附近的牛羊有过接触史所致。

根据2018年-2020年宠物犬血清的虎红平板凝集试验检测结果，发现3月份和5月份的布鲁氏菌抗体阳性数量最多，其次为8月份～10月份，其余月份均未检测到布鲁氏菌抗体阳性的样品，分析认为在春秋季，环境气候适宜，宠物犬外出活动频繁，接触患病犬或病犬排泄物的风险更高，并且春季是牛羊的繁殖季节，产仔、羊水、胎衣等处理不及时，容易造成布鲁氏菌病在牛羊和宠物犬之间传播流行。

宠物犬血清样品主要来自于宠物医院、犬场和农户，饲养方式不同，调查结果显示，来自宠物医院的犬血清布鲁氏菌抗体阳性数较多，其次为农户，最后是犬场。赵焜等研究也发现城区和农区犬均有较高的布鲁氏菌抗体阳性[5]。宠物医院接诊的城市犬需要经常外出散步，接触其他患病犬或病犬排泄物的风险较高，农户的家养犬通常为散养的方式饲养，并且外出时会随意吃东西，也容易被感染，而犬场采用封闭式管理，与外界接触的机会较少，而引种或饲料带菌时可能导致感染。

本次调查中，收集到112只母犬血清和20只公犬血清，经虎红平板凝集试验检测，仅1份母犬血清检测到粗糙型布鲁氏菌抗体，虽然本次调查收集的母犬和公犬数量较少，不能很好的反映不同性别宠物犬感染布鲁氏菌的差异，但是在随机收集宠物犬血清的情况下，该结果在一定程度上表明母犬感染布鲁氏菌的几率更高。

本研究调查了我国16个城市宠物犬的布鲁氏菌感染情况，宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率为1.02%，宠物犬血清中既可检测到光滑型布鲁氏菌抗体，也可检测到粗糙型布鲁氏菌抗体，距离牧区较近的成都市、重庆市和昆明市宠物犬血清抗体阳性率高于其他城市，不同月份和不同性别的宠物犬布鲁氏菌感染率有所差异。本次调查研究为更好地了解宠物犬布鲁氏菌感染情况提供实验依据，为提高广大养犬爱好者、兽医从业人员和犬场的防疫意识敲响警钟。