秦岭细鳞鲑人工驯养繁殖及受精卵孵化技术

张国维，秦 勇，高祥云，王剑周，张崇信

（1.甘肃省渔业技术推广总站，甘肃 兰州 730030；2.天水市渔业技术推广站，甘肃 天水 741000；3.张家川马鹿秦岭细鳞鲑驯养繁殖场，甘肃 天水 741020）

秦岭细鳞鲑（Brachymystax lenoktsinlingensis）属鱼纲、鲑形目、鲑科、细鳞鲑属，是我国秦岭西端所特有的鱼类物种，列入我国国家Ⅱ级保护野生动物。近几十年以来秦岭细鳞鲑资源量急剧减少，目前其野生种群仅分布于甘肃省渭河上游及其支流流域和陕西省汉水北侧支流湑水河、子午河的上游溪流中[1-3]。秦岭细鳞鲑是冷水性鱼类，生活在海拔900～2 300 m的山涧河流深潭中，最适生长水温13～16 ℃，生存水温范围为1～19 ℃[4-5]。本文总结研究了秦岭细鳞鲑亲鱼人工驯养繁殖和受精卵孵化的关键技术，以期为秦岭细鳞鲑相关研究提供参考。

1 秦岭细鳞鲑的人工驯养

1.1 人工驯养环境的构建

模拟秦岭细鳞鲑自然生存环境，修建人工仿生态水泥流水驯养池。单个水泥池长10～20 m、宽2～3 m、高1.2～1.5 m，水位保持在0.8～1.2 m，并排并联建造多组，池壁光滑整洁，池体末端搭建遮阳网，外部搭建立体防护网以防飞禽捕食亲鱼和幼鱼。水源为地下泉水或山溪河流的冷流水，水质优良无污染，水质符合GB 11607-1989《渔业水质标准》要求，水温范围4～18 ℃，溶解氧含量7.0～10.0 mg/L，pH值7.0～7.8。山区的流水池塘应设置防洪防泥石流设施，构建沉淀池和应急水源，避免雨季持续性的山洪影响。

1.2 人工驯食方法

野生秦岭细鳞鲑属肉食性鱼类，主要摄食水生昆虫（牛虻、蜉蝣、飞蚁以及蜻蜓等）的幼虫和成虫、虾类、林蛙及小型鱼类等鲜活动物饵料[6]。在人工驯养的生长条件下，可采用人工驯食方法，使其转变食性逐步适应并完全摄食人工配合颗粒饲料，克服在自然生长状态下喜食鲜活动物饵料的习惯。驯食前期，可使用黄粉虫活虫，按鱼体重2%的日投饵量每天投喂2次（早、晚），持续20～30 d；驯食中期，用水浸泡处理10 min杀死的黄粉虫和人工配合颗粒饲料按1∶1的重量比混合投喂，以增强饲料的诱食性，日投饵量为鱼体重的2%～3%，每天投喂2次（早、晚），持续30～60 d；驯食后期，完全使用人工配合颗粒饲料投喂，日投饵量为鱼体重的2%～3%，每天投喂3次（早、中、晚），完成从天然活饵到人工饲料的食性转变，之后可长期使用饲料饲养。

1.3 驯养技术和日常管理

人工饵料以黄粉虫和颗粒饲料为主，并辅助黑光灯诱虫补充外源性饵料。采用“四定”原则（定位、定时、定量、定质）投喂优质饵料。日投饵量根据秦岭细鳞鲑摄食实际情况进行调整，具体以投饵后10 min内吃完、池底无残饵为宜。定期巡塘，监测水质，检查驯养环境，防止野生飞禽捕食。

2 秦岭细鳞鲑的人工繁殖

2.1 亲鱼的强化培育

2.1.1 亲鱼筛选和集中培育 因为秦岭细鳞鲑雌鱼怀卵量较少，一般为500～2 000粒，亲鱼的品质不良会影响鱼卵的质量和数量，降低人工繁殖成功率。在繁殖季节前（2月下旬），筛选个体大、体型好、无伤病、成熟度高的3～5龄且体重在0.25 kg以上的种鱼作为繁殖用亲鱼。按体型大小分组，转至繁育车间的流水孵化缸暂养培育，雌雄比为1∶（2～3），放养密度20～30尾/m3，水深0.5～0.7 m，进水管管口落差高度0.5 m以上，并加强流水刺激促进亲鱼性腺发育。周围用黑色遮光网圈围，防止亲鱼跳池死亡。3月中下旬水温接近9 ℃提前将雌雄亲鱼分开培育，以免雌鱼自行排卵，水温到9～12 ℃时可进行人工催产[7]。

2.1.2 亲鱼的营养强化 野生秦岭细鳞鲑生活习性特殊，栖息环境条件要求苛刻，在人工驯养繁殖条件下要对亲鱼进行仿生态模拟强化培育，并人工调控亲鱼的性腺发育。在繁殖前期加强亲鱼的营养，投喂黄粉虫成虫+高蛋白颗粒饲料，日投饵量为亲鱼体重的2%，分2次投喂，开展人工繁殖前5 d停食。

2.2 人工繁殖

2.2.1 全人工繁殖方法 通过注射催产素人工催产、人工孵化受精卵的方法为全人工繁殖。人工诱导亲鱼性腺成熟、发情，并产卵或排精，短期内获得大量发育和生长同步的受精卵，有助于苗种规模化培育，缩短亲鱼繁殖周期，提升繁殖效率。

2.2.1.1 人工催产。3月底至4月中旬，挑选发育状况良好符合人工繁殖条件的亲鱼，经丁香酚麻醉剂麻醉后，注射催产激素进行催产，注射激素种类为DOM、LRH-A2和HCG混合使用，注射剂量一般按1 kg雌鱼亲鱼注射DOM 2～4 mg+LRH－A210 μg+HCG 1 000 IU，24～48 h 注射第二针，注射剂量减半；雄鱼一般情况可通过自然发育顺利性成熟，在人工授精时可直接取出精液，也可直接在雌鱼注射后第二天再注射相同的催产素，注射剂量为雌鱼的一半，注射部位均为胸腔。通过人工催产的调控技术，使雌鱼、雄鱼的性腺发育基本同步，可达到雌雄亲鱼同步排卵排精的效果。

2.2.1.2 人工授精。注射催产素后，雌雄亲本分养在不同流水孵化缸中，加大亲鱼检查频率，观察到雌鱼腹部呈白色且膨大柔软，生殖孔红肿外漏，取出雌鱼采用腹部节律挤压的方法活体采集鱼卵并盛于已消毒的瓷盆中，获得的鱼卵为半黏性沉性卵，要用生理盐水轻轻漂洗2～3次进行脱黏，同时取出雄鱼采用干法人工授精将精液挤至鱼卵表面，并立即加入少量清水激活精子，用鸡毛轻柔搅拌精液和鱼卵1～2 min，使卵子与精液充分混合受精，再将受精卵用清水清洗2～3次，将清洗干净的受精卵缓慢倒入孵化框中孵化。

2.2.2 半人工繁殖方法 半人工繁殖是采用亲鱼自然发育，不使用催产素，待亲鱼自然性成熟，人工采卵取精进行人工授精，获得受精卵的方法。将雌鱼和雄鱼按1∶1的比例搭配暂养，加大水流量用流水刺激亲鱼发情。一般情况，雌鱼排卵时间为4月中下旬，及时观察亲鱼性成熟状态，性成熟亲鱼表现为活动频繁，性情暴躁不安，沿进水口处上蹿，对声音刺激敏感紧张，对即将排卵的雌性亲鱼及时取出进行人工挤卵，排卵后立即将雄性亲鱼的精液挤出对卵子进行人工授精。人工授精方法与全人工繁殖人工授精方法一致。

3 受精卵的人工孵化

3.1 孵化设施

在室内孵化车间孵化，全过程避免强光直射，保持孵化环境安静。由于秦岭细鳞鲑卵为沉性卵，在流水孵化缸（或孵化槽）中放置孵化框，将受精卵均匀铺放在孵化框底部进行孵化。孵化设施保持微流水，孵化期间水流量控制在0.002～0.005 m3/s，确保日换水量大于200%。水体流速要适宜，水流太小会导致受精卵缺氧死亡或发育不良，水流过大会形成较大冲击力震动受精卵，影响正常的胚胎发育。在进水口处设置2层滤网，过滤水体杂物及小型水生生物；孵化装置上游挂置盐瓶（带有5～10个针孔的塑料瓶中加入粗盐），使水体保持较低盐度预防水霉滋生，有条件的情况下可在进水口处加装紫外消毒灯对孵化用水消毒杀菌处理，最大限度杀灭水体有害微生物。

3.2 人工孵化

按孵化框表面积计算孵化密度为0.5～1.0万粒/m2。温度恒定有助于受精卵的发育，受精卵在恒温地下泉水（水温10 ℃）条件下孵化时，15 d左右受精卵出现眼点进入发眼期，18～20 d胚体摆动明显，孵化全程共需200～220个累积温度（度日），20～22 d仔鱼成型出膜并分布于孵化框底部。鱼苗孵化出膜9 d后，开始出现口裂，体色逐渐变深，出现冲游，出膜13 d左右卵黄囊开始消失，鱼苗上浮开口摄食外来饵料，营养由内源性转为外源性[8-9]。从受精卵到上浮平游开口需35 d左右，上浮开口期可使用鸡蛋黄、丰年虫、鱼苗专用粉末饲料开口驯食7 d左右；90%鱼苗出现冲游行为后，移出孵化框，移至仔鱼培育孵化缸流水培育。秦岭细鳞鲑受精卵孵化发育不同阶段的积温和天数见表1。

表1 秦岭细鳞鲑受精卵孵化发育不同阶段的积温和时间

3.3 孵化管理

3.3.1 孵化环境控制 秦岭细鳞鲑受精卵胚胎发育和孵化出膜率受环境因子影响较大，主要因子有水温、溶氧、光照及病原微生物等，孵化精细化管理是提高孵化率的关键技术。一是光线控制。发眼卵和刚出膜的仔鱼对光线敏感，有惧光现象，强光直射会显著降低发眼卵的孵化率和仔鱼的成活率，孵化室内的孵化设施采取遮光处理，避免强光直射。二是环境控制。受精卵胚胎发育过程中对环境刺激极为敏感，物理性震动和强烈的噪音会延滞发育甚至死亡，要保持安静、稳定的孵化环境。三是孵化管理。每天早晚巡查3～6次，包括繁育池、孵化缸、培育池、引水渠、进水口、出水口、其他设施，及时打捞水源通路淤积的腐枝树叶、泥沙、杂物，保证水路通畅，做好水质监测记录。

3.3.2 受精卵发育控制 正常的受精卵呈淡黄色，发育过程中因各种原因不可避免会产生一些死卵、未受精的卵，一般呈白色，要及时用塑料吸管吸除，以免形成水霉病害感染其他健康卵。定时清理进水口滤网和孵化装置的沉淀杂物，以免破坏水质。不同批次的受精卵，仔鱼出膜时间和个体的大小规格也不一致，由于秦岭细鳞鲑鱼苗食性偏肉食性且有种间相残的习性，因此应及时区分不同规格批次的仔稚鱼，进行分池培育，提高苗种数量和成活率。

4 结语

秦岭细鳞鲑人工驯养繁殖及受精卵孵化技术的应用是人为干预条件下保护该物种种质资源的重要途径。张家川马鹿秦岭细鳞鲑驯养繁殖场自2012年至今连续多年开展秦岭细鳞鲑人工驯养繁殖及受精卵孵化工作，通过多年实践探索，采用人工调控等技术方法可实现人工驯养和雌雄亲鱼性腺同步发育，保证人工繁殖和受精卵孵化顺利进行，有效提高驯养成活率、受精率、孵化率，并连续多年提供苗种用于渭河上游秦岭细鳞鲑增殖放流活动，对秦岭细鳞鲑种质资源的养护和野外种群数量的恢复有积极意义。