辣椒抗炭疽病品种（材料）筛选及鉴定

彭 泽 胡明文 廖芳芳 朱文超 苏 丹 张爱民

（贵州省农业科学院辣椒研究所， 贵阳 550006）

前言

辣椒炭疽病（）与辣椒疫病（）、辣椒病毒病被称为辣椒（L.）上的3大病害。辣椒炭疽病由炭疽菌引起，主要危害辣椒果实，造成采收前后果实的腐烂、减产从而造成经济损失。长期种植单一类型品种，易使品种抗病性下降，同时田间清洁与管理措施不到位，栽植密度过大，长期连作，且贵州辣椒主产区雨热同季、高温高湿，导致辣椒炭疽病多发。目前炭疽病已成为辣椒优质高产的主要障碍之一。

防治辣椒炭疽病的途径主要有化学防治、生物防治、农业防治和应用抗病品种。但辣椒由于种植面积大，病害发生普遍，化学、生物等病虫害综合防控措施及关键药剂施用技术的操作要求较高，田间措施又往往延后，造成辣椒病害难以控制和产量损失。推广和应用抗病品种是防治辣椒炭疽病最经济有效的方法之一。目前生产上极度缺乏抗炭疽病的辣椒品种，且不同辣椒品种对炭疽病的抗性也不相同。因此开展辣椒抗炭疽病资源的筛选、育种研究非常必要。吕玲玲等通过离体果实接菌筛选鉴定，得到表现为抗病以上的种质资源共10份，可运用于炭疽病抗性品种选育。贺字典等采用田间自然发病方式测定了10个主栽品种的抗病性程度，并调查两地不同种植模式下辣椒炭疽病发病率情况。Ro等采用喷雾和针刺接种方法，对辣椒资源进行了抗炭疽病筛选，并利用酶切扩增多态性序列（CAPS）和高分辨率熔融曲线（HRM）技术对所筛抗炭疽病辣椒材料进行了验证。

本文采用离体果实喷雾接菌法对38份优异辣椒种质资源高代自交系和杂交组合（品种）开展室内炭疽病抗性鉴定与筛选，并对筛选出来的抗性材料开展田间鉴定，以期发掘出具有较强炭疽病抗性的种质资源，为辣椒抗炭疽病育种、分子标记辅助育种提供材料支撑。

1 材料与方法

1.1 供试材料及菌种

供试的38份辣椒资源来自贵州省辣椒研究所，供试菌种为贵州省辣椒研究所栽培课题组自行分离纯化得到的胶孢炭疽菌（，编号：LJ17091501-01-02）。

1.2 离体果实室内接种鉴定

参照亚蔬中心林世雯离体果实喷雾接种方法略作修改：采集绿色健康成熟果15个，经表面消毒后，采用喷雾接菌法，将配制的孢子悬浮液均匀喷洒在辣椒果实表面，将其放置于铺有湿润滤纸的保鲜盒中保湿培养，温度在25～28 ℃之间，每天12 h光照，相对湿度保持90%以上，每个材料进行3次重复。培养7 d后调查发病情况。观察记录果实发病情况，病斑直径≥1 mm的视为发病，以病斑面积占整个果实面积的百分率来分级。

1.3 抗炭疽病资源田间鉴定试验

供试品种：室内接种筛选所获得的抗病材料、易感病材料。

试验地点：贵州省辣椒研究所遵义试验基地，属于近3年炭疽病多发地。

试验于2020年4月4日在遵义市新蒲新区试验基地进行漂浮育苗技术育苗，2020年5月29日定植。采用高畦覆膜方式栽培、畦上双行单株定植，株距35 cm，行距40 cm，进行随机区组设计，各个品种重复3次，每个小区种200株，小区面积为45 m，露地栽培。定植后进行常规管理，在辣椒生长期间遵照“预防为主、综合防治”的原则，炭疽病之外的其余病虫害可使用吡虫啉、阿维菌素、高效氯氰菊酯、宁南霉素等药剂防治，但整个生育期不使用任何防治炭疽病的药品。盛果期开始调查发病情况，包括发病率和病情等级。从2020年8月11日开始调查发病率，连续调查3次，间隔期为7 d，每个小区随机调查30株辣椒。在2020年8月25日进行病情指数调查，随机调查每小区3株辣椒的所有果实，以病斑面积占整个果实面积的百分率来分级，重复3次。

1.4 调查方法及品种资源抗病性划分标准

调查方法及病情等级划分参照GB/T 17980.33—2000《农药 田间药效试验准则(一)杀菌剂防治辣椒炭疽病》执行。

发病率计算：发病率/%＝发病株数/调查总株数×100

病情指数计算及抗性划分：

免疫(I)：病情指数= 0；高抗(HR)：0 <病情指数≤5；抗病(R)：5 <病情指数≤20；中抗(MR)：20<病情指数≤40；感病(S)：病情指数> 40。

等级划分（以病斑面积占整个果实面积的百分率）：

0级：无病斑；

1级：病斑面积占果实面积的2%以下；

3级：病斑面积占果实面积的3%～8%；

5级：病斑面积占果实面积的9%～15%；

7级：病斑面积占果实面积的16%～25%；

9级：病斑面积占果实面积的25%以上。

每次调查时要查病果率（包括落果）。

病情指数计算公式：

2 结果与分析

2.1 辣椒种质资源离体果实对炭疽病的抗性鉴定

对38份辣椒品种（材料）的离体果实接种病菌，进行抗炭疽病菌鉴定（表1），发现其病情指数介于17.4～81.0之间，平均病情指数为54.28。结果表明，抗病种质资源（图1 a）有3份：X-3-2、红辣螺丝椒和辣研12号，占7.9%；中抗病种质资源（图1 b）有9份：GJH2010-3、3A×GJH17-13、

表1 38份辣椒资源名称及抗病性

GJH18-17、GJH18-44、GJH-4-2①、GJH18-41、GJH18-22、7A×GJH2-2①和GJH18-15，占23.7%。对炭疽病感病的种质资源（图1 c）居多，有26份，占68.4%。

图1 不同炭疽病抗性的辣椒材料

2.2 辣椒资源对炭疽病抗性田间鉴定

对室内离体果实接种筛选出的抗病材料（品种）X-3-2、红辣螺丝椒和辣研12号进行抗炭疽病田间鉴定，并以易感病材料y185-1作对照。田间鉴定结果（表2）与离体果实接种筛选结果一致，根据品种抗病性标准判定，所鉴定的4个辣椒品种（材料）中X-3-2、红辣螺丝椒和辣研12号均为抗病材料，病情指数介于12.39～17.41之间，y185-1为易感病材料，病情指数为54.44。将田间病情指数与室内离体果实接种病情指数相关性分析发现，二者呈极显著相关，相关性系数达0.992，表明室内离体果实接种筛选能很好体现材料在田间的炭疽病真实抗性。根据第3次发病率调查和田间病情指数结果统计显示，X-3-2发病率和抗病指数最低，y185-1的发病率和抗病指数最高，分别相差2.83倍和3.39倍，X-3-2呈现出更强的抗病性。第1次发病率调查显示，抗病材料X-3-2、红辣螺丝椒和辣研12号发病率为0，易感病材料y185-1发病率达到16.67%；而在第2次发病率调查中3个抗病材料才出现了发病情况，说明抗病材料的炭疽病发病时间较晚，其抵抗炭疽病病菌的能力更强。

表2 辣椒品种（材料）炭疽病田间鉴定发病率和病情指数

3 讨论与结论

目前，辣椒抗炭疽病品种（材料）较少，针对相关抗炭疽病种质资源的挖掘还不够，所以对辣椒抗炭疽病资源的鉴别与筛选具有重要意义。不同地区的辣椒炭疽病菌种类并不相同，目前报道的辣椒炭疽病病菌主要为黑色炭疽菌（）、黑点炭疽菌（）、胶孢炭疽菌（）、尖孢炭疽菌（）等4种。并且辣椒炭疽病菌种类多样性丰富且病菌还在不断的分化，想要高效地防治该病害，不仅要选种抗病品种，还要采取生态调控措施、合理施肥，化学药剂等一系列措施，为辣椒生长创造适宜的环境条件，减少病害的发生。因此在病害发生初期准确鉴定病害种类，充分掌握病原菌侵染传播规律，结合制定综合防治措施，才能更好地利用抗病品种，减小炭疽病对辣椒生产上的危害。

据相关研究报道，辣椒炭疽病菌易在高温高湿条件下危害成熟椒果，因此本次试验主要对以采收成熟果为主的品种（材料）进行离体果实接种抗病筛选，并将抗性较好的3个品种（材料）进行田间抗性鉴定，取得了较好效果。室内接种抗性鉴定与田间抗性鉴定结合则能综合评价、筛选辣椒抗炭疽种质资源，张世才等就采用室内果实离体接种结合田间病圃鉴定出40008和30163两份抗尖孢炭疽菌的材料。一些研究也表明开展室内抗性鉴定试验，可获得稳定抗病资源。本研究结果表明田间鉴定与室内离体果实接种鉴选结果基本一致，这与吴庆丽等的研究结果相符，证明室内离体果实接种的方法可较好地对辣椒种质进行抗炭疽病鉴定。目前，辣椒炭疽病抗性的遗传和精细定位作为缩小种质筛选周期、提高鉴别效率的有效方法，也有很多研究报道。通过离体果实接种与田间鉴定的方法综合筛选种质资源，与开发出的抗炭疽病分子标记结合进行检验，能准确、高效的筛选出抗炭疽病辣椒材料。本文鉴定出的3份抗病种质资源也进一步丰富了辣椒对胶孢炭疽菌抗性遗传的材料基础，可助推辣椒炭疽病抗性遗传和精细定位研究。

综上所述，离体果实接种鉴定与田间鉴定结合对辣椒炭疽病抗性材料具有良好的鉴定效果。本文通过室内离体果实接种鉴定，筛选出抗病品种（材料）3份，中抗病品种（材料）9份。结合田间鉴定，进一步验证了3份抗病材料的炭疽病抗性，研究成果可为辣椒生产、炭疽病抗病育种与分子标记辅助育种提供材料支撑。