疏花蛇菰石油醚部位的化学成分研究*

陈孝礼，江文婧，吴继春，杜 江

(贵州中医药大学药学院，贵州 贵阳 550025)

疏花蛇菰(Balanophoralaxiflora)，为蛇菰科蛇菰属的草本寄生植物，又名鹿仙草、不上莲、回春草、通天蜡烛，苗药名为购俗(ngoub xud)，具有益肾养阴、清热止血、镇痛消炎的作用，常用于痔疮、虚劳出血、腰痛等多种病症的治疗，广泛分布于云南、四川、湖北等西南地区，西南地区民间常用于痔疮、梅毒、小儿阴茎肿、胃痛、咳嗽咳血等多种病症的治疗[1]。现代研究表明疏花蛇菰含有酚酸、多糖、黄酮等多种化学成分，可以用于原发性肝癌、肝硬化等肝病的治疗，但是目前对其研究较少。为了明确疏花蛇菰的物质基础，为该药的临床应用提供科学依据，本实验对疏花蛇菰的化学成分进行了研究，从该植物石油醚部位中分离得到5个化合物，分别鉴定为角鲨烯(1)、羽扇豆醇乙酸酯(2)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯(3)、齐墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯(4)、β-谷甾醇(5)。化合物1-4为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

数显调温热风枪，宁波得力工具有限公司；Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波谱仪(TMS为内标),德国Bruker公司；1000Y西厨多功能粉碎机，永康市铂欧五金制品有限公司；WFH-308B型三色紫外分析仪，上海精科实业有限公司； New Classic MF型电子天平，瑞士Metter-Toledo公司；Buchi 旋转蒸发仪，瑞士步琦有限公司；GF254 薄层硅胶板，青岛海洋化工有限公司；柱层析硅胶(140～160目，200～300目)，青岛海洋化工有限公司；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶，美国GE公司。

无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇(分析纯)，天津市富宇精细化工有限公司；纯净水，华润怡宝饮料有限公司。

实验用材料购于云南省昆明市新螺狮湾中药材市场，由贵州中医药大学江洪副教授鉴定为蛇菰科蛇菰属疏花蛇菰(Balanophoralaxiflora)的全草。标本存放于贵州省苗医药重点实验室(标本号为2018100402)。

2 提取与分离

干燥疏花蛇菰5 kg，粉碎成粗粉，1.5倍95%乙醇冷浸提取3次，回收溶剂，合并提取液，浓缩得浸膏800 g。将浸膏分散于2 L水中，经过石油醚萃取、回收石油醚得到石油醚部分浸膏250 g。石油醚部分用200～300目硅胶拌样，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到A～C三个流份。A部分经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯 100:1洗脱)、Sephadex LH-20柱层析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脱)得到A1～ A2两个流份，A1再经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯 70：1洗脱)得到化合物1(25 mg)，A2经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯 50:1洗脱)、Sephadex LH-20柱层析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脱)得到化合物2(33 mg)；B部分经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯50:1洗脱)得到B1～B2两个流份，B1经Sephadex LH-20柱层析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脱)得到化合物3(30 mg)、B2经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯70:1洗脱)、Sephadex LH-20柱层析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脱)化合物4(21 mg)；C部分经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯7:1洗脱)、Sephadex LH-20柱层析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脱)得到化合物5(273 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：角鲨烯

黄色油状液体，分子式为C30H50。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.06～5.18(1H, m, H-3, 7, 11, 14, 18, 22), 1.93～2.14(2H, m, H-4, 5, 8, 9, 12, 13, 16, 17, 20, 21), 1.68(3H, s, H-1, 24), 1.60(3H, 重叠, H-25～30);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 17.5(C-1, 24), 131.1(C-2, 23), 124.2(C-3, 22), 26.8(C-4, 21), 39.6(C-5, 20), 134.7(C-6, 19), 124.1(C-7, 14), 26.5(C-8, 17), 39.6(C-9, 16), 134.9(C-10, 15), 124.1(C-11, 18), 28.1(C-12, 13), 25.5(C-25, 30), 15.8(C-26, 29), 15.9(C-27, 28)。以上数据与文献[2]报道基本一致，故鉴定该化合物为角鲨烯。

化合物2：羽扇豆醇乙酸酯

白色粉末，分子式C32H52O2。氢谱数据中显示在化学位移4.68出现d峰且耦合常数为2.4 Hz，化学位移4.57出现d峰且耦合常数为2.4 Hz，说明是一组相关峰；在化学位移2.37出现d 峰。碳谱数据中显示化学位移在14.5, 16.2, 16.0, 16.5, 18.0, 19.3， 21.3, 27.9分别为甲基碳信号，化学位移150.8和109.4为一组烯烃碳信号，化学位移170.9为酯基碳信号。该化合物的数据与文献[3]报道基本一致，故鉴定该化合物为羽扇豆醇乙酸酯。

化合物3：羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯

白色粉末，分子式C48H84O2。该化合物与化合物2在母体结构上一致，1H-NMR(400 MHz, CDCl3)中母体结构上质子信号类似，唯一不同在于该化合物还有脂肪链，故在高场区质子信号较为丰富，氢谱信号中化学位移在2.28为t 峰，耦合常数为7.5 Hz，峰面积显示有2个质子，该峰为连酯基的质子信号；碳谱数据角甲基化学位移值与化合物2相似，在化学位移151.0、109.4为一对烯烃碳信号，在173.7为酯基碳信号，不同的是该化合物多了脂肪酸上的碳信号，即多了甲基碳和一些亚甲基碳信号。该化合物的数据与文献[4]报道基本一致，故鉴定该化合物为羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯。

化合物4：齐墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯

白色粉末，分子式C48H84O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)中化学位移在5.18 为t峰，耦合常数为3.7 Hz，氢谱信号中化学位移在2.29为t峰，耦合常数为7.5 Hz，峰面积显示有2个质子，该峰为连酯基的质子信号；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)中化学位移在15.6, 16.8, 16.8, 26.0, 23.6, 28.1, 28.4, 33.4均为母体结构上角甲基碳信号，化学位移在14.1为脂肪链上甲基碳信号，化学位移在121.6, 145.2为一对烯烃碳信号，化学位移在173.7为酯基碳信号，该化合物数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定该化合物为齐墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯。

化合物5：

白色结晶，分子式C29H50O。氢谱数据中，化学位移在5.30(1H, m) 为烯烃质子信号；化学位移在1.09(3H, s), 1.01(3H, s), 0.92(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.84(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.80(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.68(3H, s) 为6个角甲基质子信号；碳谱数据中，化学位移在11.0, 12.0, 17.9, 18.9, 18.9, 19.1为6个角甲基碳信号，化学位移在121.0, 140.0为一对烯烃碳信号以及化学位移在71.0为连羟基的碳信号。该化合物数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定该化合物为β-谷甾醇。

4 结 论

疏花蛇菰石油醚部位经过硅胶柱层析、凝胶柱层析等分离技术和波谱数据鉴定得到5个化合物，分别是为角鲨烯(1)、羽扇豆醇乙酸酯(2)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯(3)、齐墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯(4)、β-谷甾醇(5)，化合物1～4均为萜类化合物，化合物5为甾醇。化合物1具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性[7～8]；化合物2具有抗完全弗罗因德氏佐剂诱导的大鼠关节炎作用[9]；化合物5具有降血脂、抗癌、抑菌等多种药理活性[10]，化合物1、5在现代研究中具有较好的活性，非常具有研究价值。蛇菰属药用资源相对丰富，民间药用基础深厚，全世界约有18个属120种，我国2个属20种，广泛分布于台湾、四川、贵州、云南等地。近年来国内外学者对蛇菰属植物研究广泛，如筒鞘蛇菰、杯茎蛇菰、印度蛇菰等蛇菰的研究相对成熟且广泛，但疏花蛇菰的基础研究相对较少，本课题对疏花蛇菰化学成分进行研究，为其开发与利用提供参考。