非小细胞肺癌组织中肿瘤坏死因子-α、细胞角蛋白19片段抗原21-1的表达与疾病分期的相关性分析

王晨亮 张 菁 刘浩茹 李观华

1.江西省九江市第一人民医院病理科，江西九江 332000；2.江西省九江市第一人民医院检验科，江西九江 332000

非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC） 是一种常见的发病率和死亡率极高的呼吸系统恶性肿瘤。因为NSCLC 早期无特异性症状，一些患者在确诊时已经是晚期，早期诊断和早期治疗对于改善肺癌预后尤为重要。肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是重要细胞因子参与慢性炎症反应的，可刺激肿瘤生长。目前有研究指出，TNF-α 的应答基因——肿瘤坏死因子α 诱导蛋白2（TNF-α induced protein 2，TNFAIP2）在NSCLC 中高表达，并与恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移有密切的联系。细胞角蛋白19 片段抗原（cytokeratin 19 fragment antigen，CYFRA21-1）是临床常用的肿瘤标志物，已有研究证实其对肺癌的诊断具有一定价值。本研究采用免疫组化法检测TNF-α、CYFRA21-1 在癌组织中的表达情况及疾病分期的关系，并分析它们之间的相关性及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年10月至2021年11月九江市第一人民医院收治的60 例NSCLC 患者为研究对象。其中男34 例，女26 例；年龄31～78 岁，平均（60.12±6.40）岁；TNM 临床分期：Ⅰ期13 例，Ⅱ期16 例，Ⅲ期19 例，Ⅳ期12 例。纳入标准：①符合指南中相关诊断及分期标准；②符合手术指征；③患者皆自愿参与研究并签署相关文件以示同意。排除标准：①接受过放化疗治疗者；②合并其他恶性肿瘤者；③病理资料不全者。本研究已通过医院伦理委员会审批。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 所有患者皆行手术切除NSCLC 组织。采集患者癌组织、癌旁组织（距离癌组织5 cm 以上）留作样本，采用4%多聚甲醛固定样本，并行常规石蜡包埋，连续切片（厚度为3 μm），进行免疫组化标记。

1.2.2 免疫组化 样本脱蜡、水化，浸泡在枸橼酸缓冲液（0.01 mol/L、95℃）中，同时热修复，培养后于3%HO的环境中，10 min 后加入山羊血清封闭，在25～27℃的温度下孵育半小时，之后抽离封闭液，加入一抗，将其置于4℃的冰箱培养过夜，第二天加入二抗，并在恒温箱培养半小时（温度37℃），应用PBS 冲洗2～4 次后，DAB 显色、封片。阳性、阴性表达分别为胞浆呈清晰棕色、细胞浆无棕色或与背景着色一致。采用1000 细胞计数，以阳性细胞数所占比判断TNF-α表达分级：阴性（-）：≤10%；阳性（+）：＞10%，其中弱阳性：11%～50%，中度阳性：＞50%～80%，强阳性：＞80%。用已知阳性片作为阳性对照，用PBS 代替一抗作为阴性对照。每张切片随机选取10 个视野，通过Image J 软件分析CYFRA21-1 表达量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 癌组织及癌旁组织中TNF-α、CYFRA21-1 表达的比较

癌组织中TNF-α 表达阳性率及CYFRA21-1 表达水平均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 癌组织及癌旁组织中TNF-α、CYFRA21-1 表达的比较

2.2 不同病理分期TNF-α、CYFRA21-1 表达情况的比较

病理分期Ⅲ～Ⅳ期患者的癌组织TNF-α、CYFRA21-1 表达均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 不同病理分期TNF-α、CYFRA21-1 表达情况的比较

2.3 不同病理分期TNF-α 表达阳性度的比较

病理分期Ⅲ～Ⅳ患者TNF-α 的阳性表达度强于Ⅰ～Ⅱ患者，差异有统计学意义（P＜0.05）（表3）。

表3 不同病理分期TNF-α 表达阳性度的比较[n（%）]

2.4 TNF-α、CYFRA21-1 表达与病理分期的相关性分析

相关性分析显示，患者癌组织内TNF-α 表达阳性程度、CYFRA21-1 表达水平均与病理分期呈正相关（P＜0.05）（表4）。

表4 TNF-α、CYFRA21-1 与病理分期的相关性分析

3 讨论

肺癌是目前全球范围内对人类生命威胁最大的恶性肿瘤之一，关于肺癌的病因学、预防、诊断、治疗已经成为全世界的重要课题。其发病机制较为复杂，有研究指出与厨房油烟、吸烟、遗传、不良工作环境、电离辐射、肺部慢性疾病等因素有关，肺癌的病因多样，至今尚不完全明确。持续性慢性炎症在多种肿瘤（前列腺癌、肺癌、膀胱癌、结直肠癌等）的发生、进展以及癌症患者的预后中起到重要作用。TNF-α 是一种重要的多功能炎症因子，其能够导致各种肿瘤发生出血性坏死，在肿瘤微环境中TNF-α 的促肿瘤作用已被广泛证明，是恶性肿瘤与炎症相互调控的中介分子之一。有研究指出，健康人群血清中往往检测不出TNF-α 的表达，然而在多种癌症如乳腺癌、结肠癌、肺癌等患者血清中却能够检测到很高的TNF-α水平。肿瘤患者特别是预后较差的进展性肿瘤患者血清中TNF-α 水平明显升高，提示TNF-α 与恶性肿瘤的发生、发展有密切的联系。本研究结果显示，TNF-α 在癌旁组织基本无表达，在癌组织组中表达总阳性率为90%（54/60），高于癌旁组织（P＜0.05），提示TNF-α 高表达与NSCLC 发生发展有一定的联系。且本研究结果还显示Ⅲ～Ⅳ期患者癌组织TNF-α 表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者癌组织，相关系分析结果指出癌组织TNF-α 表达与NSCLC 疾病病理分析呈正相关（P＜0.05），提示TNF-α 表达阳性程度越高，疾病恶化程度越高，提示癌组织TNF-α 表达作为临床对NSCLC 疾病分期辅助诊断的应用价值。

CYFRA21-1 主要存在于皮起源的肿瘤细胞，如食管癌、肺癌等的胞质中，对NSCLC 的诊断有重要价值，多项研究中指出，NSCLC 患者中CYFRA21-1 呈现异常表达，CYFRA21-1 水平的变化与NSCLC 的发生发展具有密切联系。段新春等在研究中指出，检测CYFRA21-1 表达水平能够NSCLC 患者治疗效果，CYFRA21-1 的异常表达与NSCLC 患者的预后密切相关。本研究结果发现，NSCLC 癌组织较癌旁组织中CYFRA21-1 表达水平显著增加，结果与既往研究吻合。本研究还对不同病理分期癌组织中CYFRA21-1 表达进行检测，结果显示，Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者CYFRA21-1 表达相对较高，结果与扈成伟等、曾汉华等研究一致，表明CYFRA21-1 与NSCLC 患者肿瘤病理分期具有一定相关性。相关性分析结果指出NSCLC 患者癌组织CYFRA21-1 表达与肿瘤病理分期呈正相关（P＜0.05），提示NSCLC 癌组织CYFRA21-1 表达越高，病情越严重，为CYFRA21-1应用于临床NSCLC 病理分期的诊断提供数据支撑。本文旨在证明癌组织中TNF-α、CYFRA21-1 表达对临床NSCLC 的鉴别及其疾病病理分期的意义，尚未对诊断效能进行探究，本研究下一步将对两者联合检测NSCLC 的诊断效能进行研究，以期为TNF-α、CYFRA21-1 检测作为临床辅助诊断的推广应用，提供理论及数据支撑。

综上所述，NSCLC 癌组织中TNF-α、CYFRA21-1呈现异常高表达，并与疾病病理分期具有一定相关性，与NSCLC 发生、发展密切相关。