王晨亮 张 菁 刘浩茹 李观华
1.江西省九江市第一人民医院病理科,江西九江 332000;2.江西省九江市第一人民医院检验科,江西九江 332000
非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC) 是一种常见的发病率和死亡率极高的呼吸系统恶性肿瘤。因为NSCLC 早期无特异性症状,一些患者在确诊时已经是晚期,早期诊断和早期治疗对于改善肺癌预后尤为重要。肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是重要细胞因子参与慢性炎症反应的,可刺激肿瘤生长。目前有研究指出,TNF-α 的应答基因——肿瘤坏死因子α 诱导蛋白2(TNF-α induced protein 2,TNFAIP2)在NSCLC 中高表达,并与恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移有密切的联系。细胞角蛋白19 片段抗原(cytokeratin 19 fragment antigen,CYFRA21-1)是临床常用的肿瘤标志物,已有研究证实其对肺癌的诊断具有一定价值。本研究采用免疫组化法检测TNF-α、CYFRA21-1 在癌组织中的表达情况及疾病分期的关系,并分析它们之间的相关性及意义。
选取2018年10月至2021年11月九江市第一人民医院收治的60 例NSCLC 患者为研究对象。其中男34 例,女26 例;年龄31~78 岁,平均(60.12±6.40)岁;TNM 临床分期:Ⅰ期13 例,Ⅱ期16 例,Ⅲ期19 例,Ⅳ期12 例。纳入标准:①符合指南中相关诊断及分期标准;②符合手术指征;③患者皆自愿参与研究并签署相关文件以示同意。排除标准:①接受过放化疗治疗者;②合并其他恶性肿瘤者;③病理资料不全者。本研究已通过医院伦理委员会审批。
1.2.1 样本采集 所有患者皆行手术切除NSCLC 组织。采集患者癌组织、癌旁组织(距离癌组织5 cm 以上)留作样本,采用4%多聚甲醛固定样本,并行常规石蜡包埋,连续切片(厚度为3 μm),进行免疫组化标记。
1.2.2 免疫组化 样本脱蜡、水化,浸泡在枸橼酸缓冲液(0.01 mol/L、95℃)中,同时热修复,培养后于3%HO的环境中,10 min 后加入山羊血清封闭,在25~27℃的温度下孵育半小时,之后抽离封闭液,加入一抗,将其置于4℃的冰箱培养过夜,第二天加入二抗,并在恒温箱培养半小时(温度37℃),应用PBS 冲洗2~4 次后,DAB 显色、封片。阳性、阴性表达分别为胞浆呈清晰棕色、细胞浆无棕色或与背景着色一致。采用1000 细胞计数,以阳性细胞数所占比判断TNF-α表达分级:阴性(-):≤10%;阳性(+):>10%,其中弱阳性:11%~50%,中度阳性:>50%~80%,强阳性:>80%。用已知阳性片作为阳性对照,用PBS 代替一抗作为阴性对照。每张切片随机选取10 个视野,通过Image J 软件分析CYFRA21-1 表达量。
癌组织中TNF-α 表达阳性率及CYFRA21-1 表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。
表1 癌组织及癌旁组织中TNF-α、CYFRA21-1 表达的比较
病理分期Ⅲ~Ⅳ期患者的癌组织TNF-α、CYFRA21-1 表达均高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。
表2 不同病理分期TNF-α、CYFRA21-1 表达情况的比较
病理分期Ⅲ~Ⅳ患者TNF-α 的阳性表达度强于Ⅰ~Ⅱ患者,差异有统计学意义(P<0.05)(表3)。
表3 不同病理分期TNF-α 表达阳性度的比较[n(%)]
相关性分析显示,患者癌组织内TNF-α 表达阳性程度、CYFRA21-1 表达水平均与病理分期呈正相关(P<0.05)(表4)。
表4 TNF-α、CYFRA21-1 与病理分期的相关性分析
肺癌是目前全球范围内对人类生命威胁最大的恶性肿瘤之一,关于肺癌的病因学、预防、诊断、治疗已经成为全世界的重要课题。其发病机制较为复杂,有研究指出与厨房油烟、吸烟、遗传、不良工作环境、电离辐射、肺部慢性疾病等因素有关,肺癌的病因多样,至今尚不完全明确。持续性慢性炎症在多种肿瘤(前列腺癌、肺癌、膀胱癌、结直肠癌等)的发生、进展以及癌症患者的预后中起到重要作用。TNF-α 是一种重要的多功能炎症因子,其能够导致各种肿瘤发生出血性坏死,在肿瘤微环境中TNF-α 的促肿瘤作用已被广泛证明,是恶性肿瘤与炎症相互调控的中介分子之一。有研究指出,健康人群血清中往往检测不出TNF-α 的表达,然而在多种癌症如乳腺癌、结肠癌、肺癌等患者血清中却能够检测到很高的TNF-α水平。肿瘤患者特别是预后较差的进展性肿瘤患者血清中TNF-α 水平明显升高,提示TNF-α 与恶性肿瘤的发生、发展有密切的联系。本研究结果显示,TNF-α 在癌旁组织基本无表达,在癌组织组中表达总阳性率为90%(54/60),高于癌旁组织(P<0.05),提示TNF-α 高表达与NSCLC 发生发展有一定的联系。且本研究结果还显示Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织TNF-α 表达阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期患者癌组织,相关系分析结果指出癌组织TNF-α 表达与NSCLC 疾病病理分析呈正相关(P<0.05),提示TNF-α 表达阳性程度越高,疾病恶化程度越高,提示癌组织TNF-α 表达作为临床对NSCLC 疾病分期辅助诊断的应用价值。
CYFRA21-1 主要存在于皮起源的肿瘤细胞,如食管癌、肺癌等的胞质中,对NSCLC 的诊断有重要价值,多项研究中指出,NSCLC 患者中CYFRA21-1 呈现异常表达,CYFRA21-1 水平的变化与NSCLC 的发生发展具有密切联系。段新春等在研究中指出,检测CYFRA21-1 表达水平能够NSCLC 患者治疗效果,CYFRA21-1 的异常表达与NSCLC 患者的预后密切相关。本研究结果发现,NSCLC 癌组织较癌旁组织中CYFRA21-1 表达水平显著增加,结果与既往研究吻合。本研究还对不同病理分期癌组织中CYFRA21-1 表达进行检测,结果显示,Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者CYFRA21-1 表达相对较高,结果与扈成伟等、曾汉华等研究一致,表明CYFRA21-1 与NSCLC 患者肿瘤病理分期具有一定相关性。相关性分析结果指出NSCLC 患者癌组织CYFRA21-1 表达与肿瘤病理分期呈正相关(P<0.05),提示NSCLC 癌组织CYFRA21-1 表达越高,病情越严重,为CYFRA21-1应用于临床NSCLC 病理分期的诊断提供数据支撑。本文旨在证明癌组织中TNF-α、CYFRA21-1 表达对临床NSCLC 的鉴别及其疾病病理分期的意义,尚未对诊断效能进行探究,本研究下一步将对两者联合检测NSCLC 的诊断效能进行研究,以期为TNF-α、CYFRA21-1 检测作为临床辅助诊断的推广应用,提供理论及数据支撑。
综上所述,NSCLC 癌组织中TNF-α、CYFRA21-1呈现异常高表达,并与疾病病理分期具有一定相关性,与NSCLC 发生、发展密切相关。